Кислая фосфатаза при лейкозах

Цитохимические исследования занимают важное место в дифференциальной диагностике гемобластозов. Кроме большого теоретического значения, неоспорима их роль в уточнении различных форм лейкозов. Разработка эффективных методов дифференциальной диагностики и терапии острых лейкозов, особенно острого лимфобластного лейкоза детей, стала возможной только после введения в клиническую практику цитохимических методов диагностики.

Цитохимические исследования проводят в мазках крови, лейкоконцентрата, костного мозга. Они основаны на использовании специфических химических цветовых реакций для определения в клетках различных веществ. При цитохимическом исследовании пользуются полуколичественной оценкой результатов, используя принцип G. Astaldi (1957), основанный на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности. В зависимости от нее исследуемые элементы делят на четыре группы: с отрицательной реакцией (—), слабоположительной (+), положительной (++) и резкоположительной (+++).

Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определенного вида и дифференцируют их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы (ед.). Активность ферментов выражают в условных единицах или в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Средний цитохимический коэффициент вычисляют по формуле Кеплоу в модификации Астальди и Верга:

где цифры (1, 2, 3, 4) обозначают интенсивность окраски; буквы (а, б, в, г) — число подсчитанных клеток с определенной интенсивностью окраски (цитохимической реакции).

Метод полуколичественной оценки является ориентировочным, но позволяет сравнить распределение исследуемых веществ в различных клеточных элементах или в одних и тех же клетках при тех или иных патологических состояниях. Следует, однако, иметь в виду, что цитохимический метод может использоваться только в качестве дополнения к другим методам исследования — морфологическим, иммунологическим, цитогенетическим.

За счет гликогена в основном обеспечиваются энергетические потребности клеток. В частности, за счет реакций гликогенолиза образуется энергия, необходимая для осуществления функции фагоцитоза. Локализуется гликоген в цитоплазме клеток. Для цитохимического выявления гликогена чаще всего применяют PAS-реакцию, или ШИК-реакцию (по названию реактива — шифф-йодная кислота).

Положительную ШИК-реакцию могут также давать такие вещества, как гликозаминогликаны, мукополисахариды, гликопротеины, мукопротеи-ны и др. Гликоген можно легко дифференцировать от других веществ пробами со слюной или α-амилазой.

Проба со слюной . Препарат помещают в свежесобранной слюне в термостат при 37 °С на 30 мин, затем его окрашивают вышеописанной методикой. При инкубации препарата αамилаза, содержащаяся в слюне, расщепляет гликоген, и при реакции с реактивом Шиффа розовая окраска на гликоген не развивается'.

Проба с α-амилазой . Препарат помещают в раствор α-амилазы (1 мл профильтрованной амилазы растворяют в 40 мл 0,85% раствора натрия хлорида) на 30 мин в термостат при 37 °С.

Нормальные величины. В мазках периферической крови и костного мозга гликоген содержится в цитоплазме нейтрофилов разной степени зрелости, но преимущественно в более зрелых (в виде обильной мелкой и диффузной зернистости). В цитоплазме мегакариоцитов и тромбоцитов гликоген определяется в виде одиночных крупных зерен. В крови здоровых людей количество интенсивно окрашенных нейтрофилов (+++) колеблется в пределах 2–12 % от общего числа нейтрофилов, средней интенсивности окраски (++) — в пределах 72–90%, слабо окрашенных (+) — от 4 до 18%. СЦК гликогена в нейтрофилах здоровых людей равен 1,71–2,04 (Кост Е. А., 1975), а по данным В. Б. Лецкого (1970) — 2,52. У лиц пожилого и старческого возраста отмечено достоверное снижение СЦК гликогена до 1,98 (Германов В. А., Сергеева Т. М., 1972).

В лимфоцитах здоровых людей гликоген содержится в виде небольшого числа гранул в 10–12% клеток. В мегакариоцитах гликоген обнаруживается в виде гранул (от единичных до 30–50), напоминая скопления кровяных пластинок. Число гликогенположительных мегакариоцитов составляет в среднем 60 % от общего числа мегакариоцитов.

Клиническое значение . Увеличение числа гликогенположительных лимфоцитов4 (до 70–80 %) характерно для лимфопролиферативных заболеваний, особенно для хронического лимфолейкоза (гликоген определяется в виде крупных гранул). Увеличение содержания гликогена в нейтрофилах наблюдается при различных воспалительных процессах, сахарном диабете, истинной полицитемии. Уменьшение отмечается при агранулоцитозах, лучевой болезни, при хроническом миелолейкозе — примерно в 2 раза по сравнению с нормой, особенно при прогрессировании заболевания (общее количество гликогена, определяемое биохимическими методами, может быть даже повышено из-за лейкоцитоза). При тромбоцитопенической пурпуре и симптоматических тромбоцитопениях число гликогенположительных форм мегакариоцитов значительно снижено (после спленэктомии оно восстанавливается до нормальных величин).

В лейкемических клетках при остром миелобластном лейкозе гликоген или не содержится вообще, или распределен диффузно либо в виде мелкой зернистости; при остром лимфобластном лейкозе — в виде крупных гранул, расположенных в цитоплазме вокруг ядра; при остром монобластном лейкозе бластные клетки содержат незначительное количество диффузно окрашиваемого гликогена; при остром эритромиелозе гликоген в виде гранул обнаруживается в эритробластах.

Липиды локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Клетки костного мозга и периферической крови содержат простые липиды в виде нейтральных жиров, свободных жирных кислот, а также сложные липиды — фосфолипиды. Цитохимическое исследование основано на применении веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира применяют судан III, окрашивающий жир в оранжевый цвет. Липоиды лучше выявляются Суданом черным (черное окрашивание). В гематологических исследованиях чаще применяется окраска мазков Суданом III.

См. методики окраски:

Нормальные величины. Липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69–80 %) у здоровых людей окрашивается интенсивно (+++), 18–36 % — дают окраску средней интенсивности (++) и 10 % — слабо окрашены (+). СЦК липидов в нейтрофилах здоровых людей равен 2,65. В меньших количествах липиды в норме обнаруживаются и в моноцитах. В миелобластах обнаружено небольшое количество липидов, в промиелоцитах их больше, и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается. В клетках лимфатического ряда липиды не выявляются.

Клиническое значение . Повышение СЦК липидов отмечено у лиц старческого возраста. Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при остром миелобластном и монобластном лейкозах, при прогрессировании хронического миелолейкоза. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки содержат липиды в небольшом количестве (2–3 %). Уменьшение СЦК липидов отмечено при лечебном голодании. Снижение содержания липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах. При остром лимфобластном лейкозе липиды в бластных клетках не выявлены.

В организме человека пероксидаза обнаружена в лейкоцитах, тромбоцитах, в молоке, а также в тканях, в которых происходит метаболизм эйкозано-идов. Простетической группой является протогем. В реакции, катализируемой пероксидазой, перекись водорода восстанавливается за счет соединений, выступающих в качестве доноров электронов, таких как аскорбат, хиноны или цитохром С. Реакция, катализируемая пероксидазой, имеет сложный характер и суммарно выглядит следующим образом:

Пероксидаза локализуется преимущественно в специфической зернистости цитоплазмы гранулоцитов, является маркером клеток миелоидной природы. Она отсутствует в лимфоидных клетках. Ввиду специфичности для нейтрофилов, начиная с ранних фаз созревания, фермент получил название миелопероксидаза. Активность пероксидазы подвержена большим колебаниям.

См. методики окраски:

Нормальные величины. В крови здоровых людей активность пероксидазы выявляется преимущественно в цитоплазме гранулоцитов, в меньшей степени и непостоянно — моноцитов. Фермент появляется в клетках на стадиях промиелоцита и более зрелых миелобластов. Лимфобласты не содержат пероксидазу. 3–16% нейтрофилов окрашены резко положительно (+++), 60–90 % — положительно (++), остальные — слабоположительно (+) (Кост Е. А., 1975). СЦК пероксидазы в нейтрофилах здоровых людей равен 2,5 (Лецкий В. Б., 1970). Эозинофилы характеризуются резко положительной реакцией на пероксидазу.

Клиническое значение . В бластных клетках высока активность фермента при остром миелобластном лейкозе. У больных с хроническим миелолейкозом, особенно в терминальной стадии, СЦК снижается до 1,6; слабая активность фермента наблюдается при остром монобластном лейкозе и отсутствует при остром лимфобластном лейкозе. Определение активности миелопероксидазы как маркера миелоидного ряда используется для дифференциальной диагностики острых миелобластных и лимфобластных лейкозов. Снижение активности фермента отмечено при инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, опухолях.

Активность щелочной фосфатазы выявляется впервые на стадии метамиелоцита, повышается по мере дифференцировки до сегментоядерного нейтрофила, а затем по мере старения клетки вновь снижается. Активность фермента определяется в специфических гранулах цитоплазмы. Щелочная фосфатаза относится к группе гидролитических ферментов, расщепляет различные фосфорные эфиры в щелочной среде (оптимум pH 9,6), осуществляет гидролиз однозамегценных эфиров ортофосфата. Наиболее распространено определение активности фермента методами азосочетания.

См. методики окраски:

Нормальные величины. У здоровых людей большинство сегментоядерных нейтрофилов являются фосфатазоотрицательными, и только в 20–30 % клеток (Кост Е. А., 1975) (20–40% — по данным Л. В. Козловской и М. А. Мартыновой, 1975) выявлена слабая активность фермента (+). По данным М. Г. Шубина (1980), активность щелочной фосфатазы для здоровых лиц обоего пола составляет 26 ед., т. е. СЦК равен 0,26. Отмечена более высокая активность фермента у женщин по сравнению с мужчинами (соответственно 31,0±0,8 и 21,0±0,7 ед.).

Клиническое значение . Повышение активности фермента в цитоплазме нейтрофилов отмечается при истинной полицитемии, хроническом миелофиброзе, апластических анемиях. Увеличение активности щелочной фосфатазы в цитоплазме нейтрофилов при острых нелимфобластных лейкозах — благоприятный признак, поскольку у таких больных более вероятны ремиссии. Увеличение активности фермента выявлено у детей первого полугодия жизни— 150–159 ед. Активность фермента увеличивается при беременности, при многих воспалительных процессах, хронических заболеваниях печени, инфекциях, злокачественных новообразованиях, диабетическом кетоацидозе, приеме пероральных контрацептивов, болезни Дауна, инфаркте миокарда и др. Резкое снижение активности щелочной фосфатазы (до полного отсутствия) наблюдается при хроническом миелолейкозе, что может служить важным дополнением дифференциальной диагностики хронического миелолейкоза и хронического миелофиброза, а также лейкемоидных реакций по миелоидному типу. Снижение активности фермента наблюдается при вирусных заболеваниях, в том числе инфекционном гепатите, при лучевой болезни, серповидно-клеточной анемии, болезнях соединительной ткани.

Активность кислой фосфатазы обнаруживается преимущественно в нейтрофилах и лимфоцитах крови (максимально в нейтрофильных миелоцитах); локализацию связывают с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фосфатаза является гидролитическим ферментом (оптимум действия при pH 5,2). Для цитохимического исследования обычно используют методы азосочетания. Нафтолфосфаты под воздействием кислой фосфатазы расщепляются с образованием свободного нафтола, который вступает в реакцию с солью диазония. В результате в местах определяемой активности фермента выпадает осадок азокрасителя красного цвета на зеленом фоне.

См. методики окраски:

Нормальные величины. В клетках крови активность фермента обнаруживается в 12% зрелых гранулоцитов и в лимфоцитах. В нейтрофилах периферической крови здоровых людей активность фермента колеблется в пределах 11–72 ед., т. е. СЦК равен 0,386; в лимфоцитах— 25,0–28,8 ед., т. е. СЦК равен 0,286. У детей активность кислой фосфатазы в нейтрофилах выше, чем у взрослых.

Клиническое значение . Активность кислой фосфатазы повышается при острых лейкозах — монобластном и миелобластном, особенно при остром промиелоцитарном лейкозе (в диффузной форме), при острых лимфобластных лейкозах (в гранулярной форме). Повышение активности фермента наблюдается в нейтрофилах при воспалительных процессах (острая пневмония), туберкулезе, инфаркте миокарда, острых хирургических инфекциях, злокачественных опухолях. Повышение активности фермента в лимфоцитах отмечается при хронических тонзиллитах, при различных аллергических заболеваниях, после иммунизации.

Неспецифические эстеразы — это группа ферментов (гидролаз) с невысокой специфичностью, расщепляющих эфиры карбоновых кислот с короткой углеродной цепью. Локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в лизо-сомах. Активность этих ферментов в той или иной степени выявляется во всех видах лейкоцитов (максимально в незрелых гранулоцитах и моноцитах). Наибольшая активность обнаружена в моноцитах крови. Для определения активности ферментов используют различные субстраты (α-нафтилацетат, нафтол-AS-ацетат, нафтол-AS-D-хлорацетат и др.). Под влиянием неспецифических эстераз из субстрата освобождается свободный нафтол, который дает цветное окрашивание с солями диазония.

Дегидрогеназы — ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные реакции с участием двух субстратов. Ряд из них принимает непосредственное участие в процессах биологического окисления, осуществляя перенос протонов с субстрата, подвергающегося окислению, на другой субстрат. Дегидрогеназы, катализирующие такое восстановление, специфичны как к донору водорода, так и к его акцептору. Дегидрогеназы присутствуют в самых различных клетках и тканях. Они локализуются в цитоплазме и митохондриях, могут быть выявлены цитохимически при экспозиции клеток с соответствующим субстратом, на который дегидрогеназы действуют в присутствии тетразолиевых соединений, способных акцептировать протоны, с образованием нерастворимых окрашенных соединений.

Нормальные величины. У здоровых людей СДГ и α-ГФДГ выявляются в виде гранул синего цвета в нейтрофилах, лимфоцитах, тромбоцитах периферической крови и миелобластах, гранулоцитах, мегакариоцитах, эритро- и нормобластах костного мозга.

СЦК СДГ лимфоцитов составляет 1,10±0,05; α-ГФДГ — 0,80±0,08. У детей активность СДГ выявляется в 46 % лимфоцитов. У взрослых в пунктате костного мозга 88 % недифференцированных клеток имеют активность фермента (+), все ядросодержащие клетки эритроидного ряда и гранулоциты проявляют активность на (+) или (++).

Клиническое значение . Повышение активности СДГ и α-ГФДГ в гранулоцитах обнаружено у больных со злокачественными опухолями. Снижение активности выявляется в лимфоцитах в период приступа бронхиальной астмы, при хроническом лимфолейкозе, в гранулоцитах — при хроническом миелолейкозе.

Кислая фосфатаза - фермент, который ускоряет распад молекул в организме. Определение его уровня в крови имеет важное значение для диагностики состояния здоровья. Существует несколько видов кислых фосфатаз, которые имеют общую функциональную идентичность, однако значительно отличаются друг от друга по отношению к тканям организма, хромосомному происхождению, составу.

Общие данные

Работает фермент в кислых средах, откуда и пошло название. Кислая фосфатаза находится в различных тканях и клетках, может располагаться в лизосомах и вне их. Наибольшее количество определяется в предстательной железе, а также в клетках следующих органов:

печени;
селезенке;
костном мозгу;
клетках крови (эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах).

В здоровом организме активность кислой фосфатазы достаточно низкая. У представителей мужского пола ее уровень наполовину состоит из простатической фосфатазы и той, которая находится в печени и разрушенных клетках крови. В женском организме ферменты полностью образуются печенью и разрушенными эритроцитами, тромбоцитами.

Лизосомальная кислая фосфатаза

Находится в большинстве клеток организма. Ее недостаток проявляется аутосомно-рецессивной болезнью, которая считается результатом патологии обменных процессов. Симптоматика заболевания проявляется следующим образом:

периодическая тошнота и рвота;
слабость, снижение работоспособности;
снижение артериального давления;
в детском возрасте - опистотонус (судорожные припадки, которые проявляются выгибанием спины дугой, больные опираются о поверхность кровати только затылком и ступнями);
кровотечения.

Если уровень ферментов недостаточен только в лейкоцитах, пациенты часто страдают обострениями хронических инфекций.

Простатическая кислая фосфатаза

Считается маркером онкологических процессов предстательной железы. Этот вид фермента определяется и в качестве маркера семенной жидкости в судебных процессах (случаи изнасилования). Кислая фосфатаза повышена бывает и через несколько дней после оперативного вмешательства на предстательной железе или на фоне биопсии.

Оптимальный показатель кислотности для правильного функционирования фермента - 4,6. Активность проявляется исключительно после того, как мужчина достигает полового созревания.

В настоящее время определение уровня простатической фосфатазы в качестве маркера рака отступает на задний план из-за повышенного интереса к простат-специфическому антигену, который способен подтвердить наличие заболевания на более ранних стадиях развития. Тем не менее показатели простатической кислой фосфатазы важны в прогнозировании рецидива онкологического процесса после хирургического вмешательства по радикальному удалению простаты.

Анализ позволяет определить эффективность лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и других простатических патологий.

Эритроцитарная фосфатаза

Это полиморфный фермент, который находится не только в эритроцитах, но и других клетках организма. Оптимальный уровень рН для его функционирования колеблется от 5,2 до 6,2.

Кислая фосфатаза крови может определяться для уточнения отцовства. Определенные формы фермента связаны со следующими состояниями:

наследственная предрасположенность к гемолитической анемии;
патология, которая характеризуется развитием гемолитической анемии на фоне поедания бобовых;
анемия при употреблении определенных препаратов или развитии инфекций вирусного и бактериального происхождения.

Существуют формы эритроцитарной кислой фосфатазы, напрямую связанные с нарушениями, которые возникают в детском возрасте.

Макрофагальный тип кислой фосфатазы

Фермент имеет значение в диагностике болезни Гоше. Это наследственное заболевание, которое проявляется накоплением в тканях печени, селезенки, почек, мозга, легких глюкоцереброзида (органического вещества из группы жиров). Болезнь сопровождается значительным увеличением в размерах вышеперечисленных органов, резким уменьшением количества всех клеток крови, судорогами, спастическими припадками, умственной отсталостью.

Макрофагальная кислая фосфатаза также считается специфичным маркером волосатоклеточного лейкоза. Это заболевание сопровождается продуцированием значительного количества фермента, определяющегося в крови.

Фосфатаза остеокластов

Остеокластами называют клетки костной ткани, отвечающие за ее разрушение. Такой этап является важным моментом роста и ремоделирования костного аппарата. Высокая скорость разрушения костей сопровождает следующие заболевания:

болезнь Педжета (патология нормального синтеза костной ткани и формирования ее элементов);
гиперкальциемия злокачественного характера;
гиперфункция щитовидной и паращитовидных желез;
постменопауза в сочетании с остеопорозом.

Результат - частые переломы и прогрессивное истончение костных структур. Определение кислой фосфатазы остеокластов показывает повышенный уровень ферментов на фоне вышеперечисленных патологий.

Подготовка и проведение диагностики

Количественные показатели определяются в лабораторных условиях. Анализ должен проводиться по истечении 2 суток с момента проведения иных диагностических манипуляций. Если необходимо оценить уровень простатической кислой фосфатазы, то это должно происходить не ранее чем через 48 часов с момента проведения биопсии, пальпации предстательной железы, катетеризации мочевого пузыря. В противоположном случае результаты могут быть ложноположительными.

Забор материала для исследования проводится натощак. Можно пить только воду, употребление чая, кофе, соков и других напитков запрещено. За сутки нужно отказаться от спиртных напитков, жирных, копченых блюд, за 1 час до анализа - от курения. Последние полчаса до забора материала должны быть проведены в полном эмоциональном спокойствии.

Для диагностики используют венозную кровь, а именно ее сыворотку, избегая гемолиза. Результаты обследования известны уже на следующий день после проведения исследования.

Используемый метод

Для уточнения уровня общей кислой фосфатазы используется иммунохимический метод с хемилюминесцентной детекцией. Применяются специальные субстраты, которые взаимодействуют с определенными ферментами. В настоящее время системы используют производные люминола с пероксидазой в сочетании с раствором перекиси водорода. Сюда добавляется действие инициатора (например, n-йодофенол), способного увеличить свечение растворов до нескольких тысяч раз.

Существуют и другие системы, в которых используется щелочная фосфатаза и субстрат AMPPD, делающие метод диагностики еще более чувствительным. Преимущества способа исследования заключаются в стабильности используемых реактивов, отсутствии радиологического риска. Недостатки метода основываются на сложности процесса диагностики.

Норма

Общая кислая фосфатаза в анализах обозначается Ед/л. Ее допустимые показатели варьируются в зависимости от возраста и половой принадлежности.

Возраст		Кислая фосфатаза, Ед/л
Дети до 14 лет		От 0 до 5,5
Женщины	от 14 до 40	От 0 до 5,5
Мужчины	Старше 14 лет	От 0 до 6,5

Нормальные показатели простатической кислой фосфатазы - менее 2,1 нг/мл. Все цифры выше свидетельствуют о положительном результате диагностики.

Когда уровень фермента повышен?

Наиболее серьезные состояния, при которых количественные показатели выше нормы:

тромбоцитопения - сниженное количество клеток крови, отвечающих за ее свертываемость;
тромбоэмболия - закупорка просвета магистральных артерий тромбом, оторвавшимся от стенки сосуда, или эмболом, попавшим в кровеносное русло;
гемолитическая болезнь - заболевание, сопровождаемое массивным разрушением эритроцитов с высвобождением значительного количества билирубина в кровеносное русло;
прогрессирующая болезнь Педжета - патология костного аппарата, при которой происходит нарушение равновесия между образованием костных элементов и их разрушением в пользу последнего;
миеломная болезнь - опухолевый процесс злокачественного характера, в котором принимают участие В-лимфоциты, отвечающие за синтез защитных клеток;
болезнь Нимана-Пика - наследственная патология, характеризующаяся нарушением жирового обмена веществ и накоплением липидов в крупных органах (печени, селезенке, легких, сердце, почках);
несколько дней после вмешательства на предстательной железе и проведения биопсии ее ткани.

Кислая, щелочная фосфатаза - группы ферментов, отвечающих за важные процессы в организме. Именно с их помощью происходят жизненно необходимые последовательные реакции. Определение уровня ферментов позволяет вовремя уточнить наличие патологии и провести ее коррекцию для поддержки дальнейшего высокого качества жизни пациента.

Наиболее частым клиническим симптомом волосатоклеточного лейкоза является спленомегалия без лимфаденопатии, а наиболее характерной особенностью картины крови — одно-, двух- или трехростковая цитопения. По данным большинства авторов, панцитопения отмечается у половины больных, а у большинства остальных наблюдается сочетание лейкопении с анемией или тромбоцитопенией.

Лейкопения сопровождается нейтропенией и моноцитопенией, являющейся характерным признаком волосатоклеточного лейкоза. Лейкопения с числом лейкоцитов менее 4•10 9 /л встречается у 65—70 % больных, при этом у половины из них количество лейкоцитов не достигает 2•109/л, а содержание гранулоцитов равно 0,5 • 109/л.

Снижение уровня гемоглобина обнаруживают у 75—80 % больных, но у большинства из них оно выражено нерезко. Только у 15—20 % больных отмечается содержание гемоглобина менее 80 г/л, хотя встречаются пациенты, у которых при первом обращении к врачу содержание гемоглобина не превышает 40—50 г/л. Количество тромбоцитов менее 100•109/л встречается у 70—80 % больных, причем у половины из них оно не достигает 50•10 9 /л, а у 5— 10 % больных наблюдается еще более резко выраженная тромбоцитопения.

Диагноз волосатоклеточного лейкоза основывается на обнаружении в крови и костном мозге или только в костном мозге не менее 10 % характерных патологических клеток. Патологические клетки обнаруживают в крови не менее чем у 90 % больных. Их количество может колебаться в широких пределах — от 5—10 % до 70—95 %. У больных с лейкопенией процент лейкемических клеток, как правило, небольшой.

Лейкемические клетки при волосатоклеточном лейкозе представляют собой мононуклеары среднего или большого размера с бледно-голубой, серо-голубой или базофильной цитоплазмой, округлым или овальным ядром, иногда имеющим выемку, либо двухлопастным. Структура хроматина гомогенна, разрежена. В ядре иногда отчетливо просматриваются 1—2 нуклеолы, но чаще они отсутствуют. Ядерно-цитоплазматическое отношение умеренное или низкое.

Цитоплазма лейкемических клеток имеет неровные края, в типичных случаях обрывчата, отростчата или ворсинчата, однако имеются клетки с более четкими очертаниями и фестончатыми краями. Примерно у половины больных преобладают клетки одного вида, у остальных оба вида клеток представлены в почти равной пропорции. Часть лейкемических клеток может содержать азурофильную зернистость. Около 50 % лейкемических клеток имеют в цитоплазме палочковидные включения, ультраструктурный анализ которых показал, что это рибосомально-ламиллярный комплекс.

Костно-мозговой пунктат у больных волосатоклеточным лейкозом часто удается получить с трудом из-за фиброза костного мозга. У 10—20 % больных обнаруживают гипоклеточный костный мозг, у остальных — нормо- или даже гиперклеточный.

При исследовании пунктатов и трепанатов костного мозга видно, что инфильтрация патологическими клетками независимо от их количества, как правило, имеет диффузный характер, лишь изредка встречаются локальные компактные участки патологической инфильтрации. В большинстве случаев независимо от выраженности инфильтрации отмечается заметное угнетение нормального кроветворения. Характерно малое количество митозов.

Для волосатоклеточного лейкоза характерно поражение красной пульпы селезенки. При других лимфопролиферативных заболеваниях почти всегда имеется инфильтрация патологическими клетками белой пульпы.

Важнейшим диагностическим признаком при волосатоклеточном лейкозе, помимо морфологии опухолевых клеток, является обнаружение в их цитоплазме кислой фосфатазы, которая представлена ее 5-м изоферментом, не ингибируемым натрия тартратом. Высокая активность тартратрезистентной кислой фосфатазы выявляется в лейкемических клетках у 95 % больных волосатоклетоным лейкозом. Этот вид кислой фосфатазы определяется в лейкемических клетках и при других заболеваниях, в частности при пролимфоцитарном лимфолейкозе, поэтому ее наличие не может быть единственным диагностическим критерием.

Однако высокая активность фермента характерна именно для волосатоклеточного лейкоза, при других лимфопролиферативных заболеваниях она встречается не более чем в 3 % случаев. Количество клеток с высокой активностью этого фермента у разных больных волосатоклеточным лейкозом может колебаться в широких пределах — от 20 до 100 %.

В типичных клетках с отростчатой цитоплазмой кислая фосфатаза практически никогда не ингибируется натрия тартратом, в то время как в половине клеток с фестончатой цитоплазмой кислая фосфатаза частично или полностью ингибируется им.

Иммунологические исследования показали, что при волосатоклеточном лейкозе более чем в 90 % случаев лейкемические клетки имеют иммунофенотип зрелых В-лимфоцитов. Они экспрессируют мембранные иммуноглобулины разных классов с одной и той же L-цепью: в большинстве случаев IgG, чаще всего IgG3, обычно в сочетании с IgM и/или IgD, иногда с IgA. Преобладание клеток с экспрессией IgG3 отличает волосатоклеточный лейкоз от других лимфопролиферативных заболеваний.

Читайте также: