Моноклональные антитела препараты при лимфоме

Лимфома – один из основных перспективных видов рака, для которых разрабатываются и тестируются новые виды иммунотерапии.

Лимфома – общее название группы раковых заболеваний крови, развивающихся в некоторых иммунных клетках. Существуют два основных вида лимфомы – лимфома Ходжкина (ЛХ) и неходжкинская лимфома (НХЛ). Около 90% случаев лимфомы приходится на НХЛ, только 10% составляют случаи ЛХ.

Лимфома Ходжкина имеет отличительные черты, включающие в себя наличие клеток Рид-Штернберга. Это крупные, опухолевые клетки с выраженными внешними характеристиками, названные по фамилиям открывших их ученых. Лимфома Ходжкина – одна из форм рака, наиболее хорошо поддающихся лечению в Израиле методом химиотерапии и иммунотерапии.

Неходжкинская Лимфома представляет собой разнообразную группу заболеваний, каждое из которых характеризуется наличием определенного вида клеток. Большинство людей с неходжкинской лимфомой имеют в составе опухоли клетки B-типа (около 85%). У других преобладают T-клетки или К-клетки (естественные киллеры). Некоторые случаи быстрорастущей неходжкинской лимфомы поддаются исцелению в самые короткие сроки. В случаях медленно прогрессирующей НХЛ лечение поможет контролировать заболевание на протяжении многих лет.

Пациенты с неходжкинской лимфомой в Израле проходят курс лечения препаратом Rituximab (моноклональное антитело) в комбинации с химиотерапией. Радиотерапия используется реже и, как правило, в случаях локализованного заболевания.

Другие типы иммунотерапии - моноклональные антитела, направленные на разрушение раковых клеток, используются для некоторых типов неходжинской лимфомы, также как и антитела, связанные с радиоактивным атомом.

Как дополнительное средство используются новые молекулярные препараты, нацеленные на важные пути клеток НХЛ. Если болезнь не отступает или рецидивирует после первичного лечения, возможно использование химиотерапии высокими дозами с последующей трансплантацией стволовых клеток.

При лимфоме Ходжкина, первым этапом лечения в Израиле как правило, назначается химиотерапия, радиотерапия или их комбинация в зависимости от стадии заболевания и типа преобладающих клеток.

Как вариант дополнительного лечения в случае неэффективности методов первой линии рассматривается трансплантация стволовых клеток. Таргетная терапия моноклональными антителами мАТ - препарат brentuximab vedotin (Adcetris) одобрена к использованию при лимфоме Ходжкина у пациентов, не отреагировавших на другие методы лечения. Препарат проходит клиническое тестирование как возможное средство для включения в терапию первой линии.

Пациент может принимать химиотерапевтические препараты в таблетках, но чаще всего химиотерапевтические препараты вводятся в виде инъекций в вену (интравенозно).

Опыт показывает, что лечение несколькими химиотерапевтическими препаратами является более эффективным, чем лечение одним препаратом. Комбинация различных химиотерапевтических препаратов увеличивает шанс эффективного воздействия препаратов, а также дает возможность вводить каждый препарат небольшими дозами, тем самым снижая риск возникновения непереносимых побочных эффектов, которые могут возникнуть при применении одного химиотерапевтического препарата большими дозами.

Курс лечения химиотерапией проходит циклами.

Биологическую терапию иногда относят к иммунотерапии, так как направлена она на то, чтобы задействовать защитные иммунные механизмы организма в борьбе с патогенами. Биологическая терапия имеет преимущества, потому что при лечении биологической терапией не многие нежелательные побочные эффекты не возникают, как это происходит при стандартном способе лечения. Существует много различных видов биологической терапии. Нижеприведенные виды биологической терапии являются многообещающими для лечения лимфом:

Будет ли пациент проходить лечение биологической терапией, зависит от подвида и классификационных характеристик лимфомы. При лечении B-клеточной лимфомы все чаще применяются моноклональные антитела, как правило, в комбинации с химиотерапией. Моноклональные антитела могут также применяться как поддерживающая терапия с последующей химиотерапией в особенности для лечения заболеваний низкой степени злокачественности.

Интерферон может быть использован для лечения индолентных лимфом низкой степени злокачественности или как смежная терапия при лечении пациентов с гепатитом, ассоциированным с лимфомами. Колониестимулирующие факторы, например, факторы роста лейкоцитов могут применяться для стимуляции роста лейкоцитов, снизившихся вследствие химиотерапии.

Другие способы лечения находятся на стадии разработки, например, лекарственные препараты, действующие на молекулярном уровне и мишенью которых являются раковые клетки, различные новые моноклональные антитела и другие способы биологической терапии.

Онколог может прописать многочисленные комбинации химиотерапевтических и биологических лекарственных препаратов. Какой способ и какая комбинация терапий будут использованы при лечении, зависит от многих факторов, включая вид и стадию лимфомы, возраст (подростковый, молодой или пожилой возраст), способность организма переносить побочные эффекты вследствие химиотерапии и от того проходил ли пациент курс лечения лимфомы раннее. Онкологи часто работают сообща для того, чтобы принять правильное решение относительно комбинации химиотерапевтических и биологических препаратов, которая будет наилучшей для пациента. Благодаря такому сотрудничеству комбинации химиотерапевтических препаратов часто варьируются и могут быстро меняться, как только достигается положительный результат лечения.

Другие способы лечений

Период наблюдения означает обследование и контроль течения онкологического заболевания без проведения немедленного лечения. Часто при индолентных рецидивирующих опухолях может быть проведен период наблюдения. Лечение проводится только в случае быстрого роста опухоли, при проявлении симптомов или осложнений из-за онкозаболевания.

Трансплантация стволовых клеток обычно не применяется как первичное лечение лимфом.

Как альтернативное лечение можно рассматривать клинические испытания или интенсивное лечение, например, трансплантация стволовых клеток.

Чтобы можно было предусмотреть реакцию пациента на лечение и возможность рецидива, врачи часто используют Международный прогностический индекс (International Prognostic Index (IPI)). Индекс образуют пять факторов:

• Возраст пациента
• Стадия лимфомы неХоджкина
• Уровень энзима – лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в крови, который свидетельствует о количестве опухоли в организме
• Количество мест нахождения опухоли за пределами лимфатической системы
• Общее состояние здоровья пациента

В наше время доступно лечение при всех типах лимфомы неХоджкина.

Не всегда возможно полностью вылечить болезнь, но в случае медленно прогрессирующей лимфомы неХоджкина обычно возможно достичь ремиссию или, по крайней мере, значительно уменьшить массу лимфомы. В некоторых случаях ремиссия продолжается многие годы.

Принципы лечения медленно прогрессирующей лимфомы

Хотя благодаря лечению часто возможно достичь ремиссию, многие медленно прогрессирующие лимфомы неХоджкина через какое-то время рецидивируют (в период времени от 1,5 до 4 лет). Некоторые медленно прогрессирующие лимфомы неХоджкина рецидивируют в другой форме (как агрессивные лимфомы). Поэтому очень важно, чтобы у пациентов, которые получили лечение медленно прогрессирующей лимфомы неХоджкина, проводились регулярные проверки и обследования, как рекомендовал врач, даже тогда, когда они себя чуствуют полностью здоровыми.

У пациентов, у которых диагностирована медленно прогрессирующая лимфома неХоджкина на ранней стадии, когда затронуты одна или две группы лимфатическиз узлов (хотя это достаточно редкий случай), применяют лучевую терапию поражённых лимфоузлов. В этом случае лучевая терапия часто обеспечивает выздоровление.

Пациенты, у которых болезнь диагностируют на поздней стадии, но у которых нет симптомов, нередко не нуждаются в немедленном лечении, им рекомендована тактика ‘наблюдения и выжидания’.

У пациентов, у которых наблюдаются симптомы в момент постановки диагноза, обычно необходимо немедленное лечение. Чаще всего применяемый вид лечения - химиотерапия, часто в комбинации с применением моноклональных антител. Иногда, для лечения больших масс лимфомы, химиотерапию комбинируют с лучевой терапией. Другие используемые виды лечения – лечение при помощи только моноклональных антител или химиотерапия высокими дозами с последующей трансплантацией костного мозга.

Трудно предусмотреть, как пациент будет реагировать на лечение, но примерно у 75% пациентов с медленно прогрессирующей лимфомой неХоджкина на поздней стадии достигается ремиссия. К сожалению, у большей части этих пациентов вновь наступает рецидив. Период времени между лечением и рецидивом может отличаться, но обычно он составляет от 1,5 до 4 лет.

Пациентам, которые не реагируют на лечение и пациентам, у которых развился рецидив лимфомы, подбирают другие методы терапии или комбинацию разных методов лечения.

В случае рецидива болезни лечение зависит от различных условий. Некоторым пожилым пациентам, если у них нет выраженных симптомов, рекомендуют статегию ‘наблюдения и выжидания’. Однако большей части пациентов назначают комбинированную химиотерапию, чаще всего с применением моноклональных антител.

Если медленно прогрессирующая лимфома неХоджкина рецидивирует в агрессивной форме, используется химиотерапия в высоких дозах в комбинации с трансплантацией стволовых клеток. Если нет возможности применять химиотерапию высокими дозами, тогда, вероятнее всего, будет использована паллиативная (облегчающая симптомы) химиотерапия.

Принципы лечения агрессивной лимфомы

Хотя название агрессивной лимфомы неХоджкина ‘агрессивный’ звучит пугающе, эти лимфомы часто очень хорошо реагируют на лечение. Даже если стандартное лечение первого ряда не было успешным, хороший результат можно достичь при помощи химиотерапии высокими дозами и трансплантации стволовых клеток. Вероятность полного излечения агрессивной лимфомы неХоджкина выше, чем в случае медленно прогрессирующей лимфомы неХоджкина.

Полное излечение агрессивной лимфомы неХоджкина возможно в 40% - 50% случаев. Даже у тех пациентов, которых не удаётся вылечить полностью, часто достигается ремиссия (период времени, когда не наблюдается активности болезни).

Пациентов, у которых диагностирована агрессивная лимфома неХоджкина на ранней стадии, обычно лечат комбинированной химиотерапией, которая включает несколько химиотерапевтических медикаментов и моноклональные антитела.

Часто назначают лучевую терапию – либо после химиотерапии, либо одновременно с ней. Она применяется для какой-то отдельной группы затронутых лимфатических узлов.

Хотя невозможно предусмотреть заранее реакцию пациента, при лечении агрессивной формы лимфомы неХоджкина на ранней стадии ремиссия достигается в 80% и больше случаев.

У пациентов, у которых агрессивная лимфома неХоджкина диагностируется на поздней стадии, лечение похоже на лечение ранней стадии.

Пациентам с лимфомой неХоджкина, которые не реагируют на лечение или у которых болезнь рецидивирует, необходимо дальнейшее лечение химиотерапией высокими дозами и трансплантация периферических стволовых клеток. Таким образом, контроль над болезнью возможно достичь примерно у 30% - 50% пациентов.

Если лечение лимфомы оказалось безуспешным или не является возможным, тогда целью лечения является уменьшение симптомов, т.е., паллиативное лечение.

Главные методы лечения лимфомы

• Химиотерапия
• Моноклональные антитела
• Лучевая терапия
• Наблюдение и выжидание
• Трансплантация
• Операция
• Симптоматическое лечение

Многие годы основным методом лечения лимфомы неХоджкина была химиотерапия.

Большинство клеток организма проводят большую часть своей жизни в состоянии покоя и размножаются только тогда, когда необходимо заместить повреждённые клетки. В противоположность этому, злокачественные клетки размножаются непрерывно. Лекарства химиотерапии предназначены для того, чтобы использовать это отличие и уничтожать клетки опухоли во время их размножения.

Некоторые лекарства взаимодействуют с рецепторами на поверхности клеток, а другие нарушают нормальную функцию ДНК, таким образом, прерывая размножение клеток. Часто применяют комбинацию химиотерапевтических средств, воздействующую на различные стадии процесса деления; это увеличивает возможность того, что будет уничтожена большая часть клеток опухоли.

Однако это объясняет также и то, почему лекарства вызывают побочные эффекты. Так как химиотерапия является ‘системным ’ лечением, в которое вовлекается весь организм, лекарства действуют токсически также и на нормальные клетки организма, которые часто делятся. Это клетки кожи, слизистой кишечника и волос.

Существует много медикаментов, применяемых для химиотерапии. Выбор химиотерапевтической программы для пациента страдающего лимфомой неХоджкина зависит от многих факторов:

• Типа лимфомы неХоджкина – является ли она медленно прогрессирующей или агрессивной, и её стадии
• Диагностирована ли лимфома недавно, и это будет первое лечение, или она рецидивировала
• Какие симптомы лимфома вызывает у пациента
• От возраста пациента и других возможных заболеваний

В некоторые программы химиотерапии включён только один медикамент, в других -применяется комбинация из двух или трёх препаратов.

Часто люди очень боятся побочных эффектов, вызываемых химиотерапией. Однако важно помнить, что:

• Не у всех пациентов развиваются побочные эффекты
• Различные медикаменты могут вызывать разные побочные эффекты, которые не суммируются
• Побочные эффекты могут быть слабо выражены и проходить сами по себе
• Многие побочные эффекты можно предотвратить или значительно уменьшить

Многие побочные эффекты вызывает воздействие химиотерапии на нормальные клетки организма. Так как химиотерапия влияет на рост и деление клеток, особенно на деление быстро растущих клеток, чаще всего страдают места, где смена нормальных клеток происходит быстрее всего:

• Слизистая оболочка пищеварительной системы, т.е., слизистая ротовой полости, пищевода, желудка и кишечника. Воздействие на эти клетки может вызвать образование язв в ротовой полости или воспаление горла, понос или запоры.
• Кожа и волосы. Воздействие на эти клетки может вызвать усиленное выпадение волос или облысение; оно обычно развивается постепенно через 2 - 3 недели после начала химиотерапии. После окончания химиотерапии волосы отрастают обычно такие же густые, как и и до терапии. У большей части пациентов через 6 месяцев опять имеется нормальное количество волос. Иногда отросшие волосы мягче и более кудрявые, чем они были раньше, и иногда их цвет отличается от первоначального, который был до терапии. Не все лекарства химиотерапии вызывают потерю волос.
• Костный мозг. В костном мозге образуются клетки крови, поэтому воздействие на него может вызвать уменьшение количества клеток крови, которое вызывает у пациентов усиленное кровотечение или образование синяков и делает их восприимчивее к инфекциям. Пациентам во время химиотерапии обязательно нужно информировать медицинский персонал о необычном кровотечении или образовании синяков, или о любых симптомах инфекции и/или лихорадке. Во время курса химиотерапии регулярно проводятся анализы крови для контроля количества клеток крови. Если количество клеток крови сильно снижается, возможно следует отложить следующий курс химиотерапии или уменьшить дозу, чтобы костный мозг успел восстановиться.
• Тошнота и рвота также являются частыми побочными эффектами химиотерапии. Так как эти побочные эффекты в большой степени зависят от используемого препарата химиотерапии и от каждого пациента индивидуально, не всегда возможно предвидеть - будут ли они, и насколько выражены они будут. У некоторых людей эти побочные эффекты не развиваются вообще. Побочные эффекты обычно развиваются в период времени от нескольких минут до пары часов после начала химиотерапии. Они могут продолжаться несколько часов или пару дней – их продолжительность индивидуальна. В настоящее время доступны новые медикаменты, эффективно устраняющие тошноту.
• Частым побочным эффектом химиотерапии является потеря аппетита, которую часто наблюдают одновременно с изменением ощущения вкуса пищи. Многие люди во время курса химиотерапии ощущают общую слабость и сонливость, некоторые становятся более раздражительными, чем обычно.
• Другие побочные эффекты вызывают усиленно образующиеся шлаки в результате гибели клеток опухоли. Одним из них является мочевая кислота. В нормальных условиях мочевая кислота растворяется в моче и выводится из организма. Так как у пациентов, получающих химиотерапию, погибает намного больше клеток, чем в нормальных условиях и образуется намного больше мочевой кислоты, чем почки способны вывести. В этом случае мочевая кислота может накапливаться в крови и кристаллизоваться в почках (образуются камни в почках). Если это не лечить, последствия могут быть достаточно серьёзными; возможна даже почечная недостаточность. Повышенное количество мочевой кислоты воздействует также на суставы, вызывая артрит.

Эти побочные эффекты обычно кратковременны и исчезают, при прерывывании терапии.

Некоторые препараты химиотерапии влияют на детородность. Например, у женщин менструации могут стать нерегулярными и исчезнуть, а у мужчин может снизиться количество сперматозоидов. Хотя этот побочный эффект может быть проходящим, некоторые виды лечения могут вызвать постоянное бесплодие. Если существует такая вероятность, пациенту необходимо говорить oб этом со своим врачом до начала лечения. В некоторых случаях мужчинам необходимо обсудить возможность сдать свою сперму в банк спермы.

Также возможно постоянное длительное воздействие на сердце или чувствительные нервы, и увеличивается риск развития другого рака в будущем. Однако, всегда неоходимо оценить соотношение возможного риска и пользы от лечения и увеличение продолжительности жизни. Пациенту и врачу необходимо серьёзно обсудить эти вопросы до начала лечения.

В наше время возможно сделать очень много, чтобы предотвратить возможные побочные эффекты или имеющиеся сделать легче переносимыми.

Советы:

• Язвы во рту или горле: часто помогает полоскание рта тёплым содовым раствором. Чтобы избежать развития инфекции, после каждого приёма пищи необходимо тщательно чистить зубы мягкой зубной щёткой и зубной пастой мягкого действия. Если Вы пользуетесь протезами, вынимайте их, когда только возможно – так вы будете чуствовать себя намного удобнее
• Тошнота и рвота: современные противорвотные медикаменты очень эффективны. Их можно вводить внутривенно вместе с препаратами химиотерапии или принимать в виде таблеток. Противорвотные медикаменты эффективнее для профилактики тошноты, чем для её лечения. Таким образом, лучше всего их принимать регулярно, как назначено, даже тогда, когда нет тошноты и рвоты. Доступны различные противорвотные средства и каждому пациенту какой-то из них помогает лучше других. То есть, если кажется, что какие-то лекарства не помогают, возможно, что помогут другие.
• Потерю аппетита может вызывать тошнота, но, возможно, она возникает потому, что иногда во время химиотерапии изменяются вкусовые ощущения пищи. Помогает более частый приём пищи и небольшими порциями. Желательно избегать приготовления пищи (запах может вызвать тошноту); есть скорее прохладную или холодную пищу вместо горячей и избегать пищи с сильным ароматом. Очень важно принимать жидкость в достаточном количестве, даже когда нет аппетита
• Усталость и сонливость: если чувствуете себя так , необходимо взять отпуск и приспособить свой распорядок дня. Некоторые люди продолжают свой обычный ритм жизни

В наше время препараты химиотерапии часто комбинируют с моноклональными антителами, .

В отличие от химиотерапии и лучевой терапии, чей механизм воздействия не является таким специфичным, задача моноклональных антител – целенаправленно уничтожать только клетки лимфомы неХоджкина, не повреждая другие виды клеток.

Моноклональные антитела – относительно новый вид лекарств и их создание – одно из самых лучших достижений в лечении лимфомы неХоджкина за последние годы. Моноклональные антитела – эффективное средство для лечения некоторых чаще всего встречаемых типов лимфомы неХоджкина. Обычно их применяют в комбинации с химиотерапией, хотя в некоторых случаях - и сами по себе.

У многих пациентов моноклональные антитела улучшают эффективность других видов лечения (обычно - химиотерапии). В случае медленно прогрессирующей лимфомы неХоджкина их применение может увеличить продолжительность ремиссии, достигнутой в результате лечения. В случае агрессивной лимфомы неХоджкина доказано, что добавление моноклональных антител увеличивает возможность излечения пациента и увеличивает продолжительность жизни по сравнению со стандартной химиотерапией в чистом виде.

Существенно, что побочные эффекты, связанные с введением моноклональных антител, обычно развиваются только во время введения лекарств и уменьшаются при введении следующих доз. Применение моноклональных антител совместно с химиотерапией не увеличивает существенно число или тяжесть побочных эффектов, вызванных химиотерапией. Побочные эффекты редко наблюдаются дольше пары минут или часов, и они обычно клинически несущественны.

Лучевая терапия применяется, если болезнь затронула одну или две зоны организма. Некоторым пациентам для последующего лечения применяется химиотерапия высокими дозами.

Необходимо иметь в виду, что лучевая терапия существенно и негативно воздействует на костный мозг, поэтому после облучения может быть необходимо его восстановление. Это возможно при помощи трансплантации стволовых клеток. У некоторых пациентов страдающих медленно прогрессирующей лимфомой неХоджкина в начале может не быть симптомов и немедленное лечение может не быть необходимо; это называют тактикой ‘наблюдения и выжидания’.

Перед утверждением плана лечения лучше всего подождать, пока будут известны все результаты обследований. Может показаться, что лечение откладывается без необходимости, но небольшую задержку оправдывает уверенность в том, что возможно применить самое правильное и соответствующее лечение.

Моноклональные антитела — это новейшее достижение медицины, которое применяется при лечении тяжелых заболеваний. Среди них злокачественные новообразования, аутоиммунные, системные, заболевания сердечно-сосудистой системы, некоторые инфекции и многое другое. Помимо этого, моноклональные антитела широко используются в диагностике, например, в иммуногистохимии, иммуноферментном анализе, проточной цитофлуориметрии и др. Таким образом, данная технология используется во многих отраслях современной медицины.

• Способы получения моноклональных антител
• Механизм действия моноклоналных антител
• Препараты с моноклональными антителами
• Проблемы при использовании моноклональных антител

Человечество уже давно открыло для себя действие антител — особых молекул, которые вырабатываются клетками иммунной системы для распознавания чужеродных агентов — антигенов и их уничтожения. Антитела обладают специфичностью. Это значит, что они узнают только свой антиген, причем не просто антиген, а отдельный его фрагмент — детерминантную группу. В одном антигене может быть несколько таких детерминантных групп, и к ним будут образовываться разные антитела. Более того, к одной детерминанте может образовываться сразу несколько видов антител, которые могут отличаться по структуре, степени родства и прочности связывания. Таким образом, при введении антигена в организм образуется большое количество разных видов антител, направленных исключительно на один вид антигена. Это позволяет обеспечить адекватную иммунную защиту.

Антитела образуются специальными антителообразующими клетками. Причем каждый их вид образуется отдельной группой генетически однородных клеток — клонов. Чем больше необходимо видов антител, тем больше образуется клонов. Соответственно, антитела, которые вырабатываются одним клоном клеток называются моноклональными антителами.

Раньше для производства антител применялась иммунизация животных, после которой отбиралась их плазма и использовалась для приготовления отдельных препаратов — иммунных сывороток для борьбы с различными токсинами (дифтерия, столбняк), вирусами, ядами и др. Но бывают ситуации, когда нужно конкретное антитело, направленное на конкретную детерминанту антигена. Здесь уже обычной иммунизацией не обойтись. Требуются более прицельные технологии.

Способы получения моноклональных антител

Получение моноклональных антител — это сложный многоступенчатый процесс, который проходит следующие этапы:

1. Иммунизация животных. Обычно используются мыши или крысы. Это нужно для того чтобы увеличить количество лимфобластов — клеток, продуцирующих нужные антитела и перевести эти клетки в активное состояние. После выделения из организма эти клетки не могут долго существовать в лабораторных условиях, они погибнут даже на питательных средах с содержанием ростовых факторов. Чтобы это предотвратить, их скрещивают со злокачественными миеломными клетками.
2. Подготовка миеломных клеток. Параллельно с иммунизацией животных проводят подготовку опухолевых миеломных клеток. Они, во-первых, обладают способностью синтезировать моноклональные антитела, а во-вторых, обладают неограниченным жизненным потенциалом (они бессмертны и способны к бесконечному воспроизведению). Для того чтобы миеломные клетки не погибли вне организма, их культивируют на специальных средах с использованием факторов роста.
3. Гибридизация (слияние) лимфобластов и миеломных клеток для образования гибридомы. Для этого клетки обрабатывают различными антителами, чтобы изменить строение их мембран и спровоцировать образование цитоплазматических контактов. При этом образуются разные типы клеток, имеющих двойной набор хромосом (дикарионы). Это могут быть дикарионы, образованные только лимфоцитами, или только миеломными клетками. Но для производства моноклональных антител нужны именно дикарионы, образованные лимфоцитом и миеломной клеткой — гибридные клетки.
4. Отбор гибридных клеток. Для этого используют специальные растворы, которые позволяют выжить только лимфобластным и гибридомным дикарионам. Первые в скором времени погибают, т. к. не обладают возможностью безграничного деления, а гибридомные клетки остаются жизнеспособными.
5. Реклонирование гибридомных клонов.
6. Определение и отбор гибридом, продуцирующих моноклональные антитела. Обычно для этого используется иммуноферментный анализ.
7. Массовое наращивание антител.
8. Очистка полученных антител. Степень очистки будет определяться областью применения препарата. Если это диагностика, достаточно 70-95% степени чистоты. Если препарат предполагается использовать для иммунотерапии, требуется более высокая степень чистоты. Для очистки используется аффинная и ионообменная хроматография.
9. Удаление оставшихся примесей и обеззараживание полученного препарата от вирусов и бактерий.

В настоящее время идет тенденция отказа в использовании антител животных для лечебных целей. Во-первых, они являются чужеродными агентами для организма и могут спровоцировать аллергические реакции, вплоть до анафилаксии, что напрямую угрожает жизни пациентов. Во-вторых, иммунная система человека, распознавая такие антитела как чужеродные, будет пытаться их инактивировать, что снизит эффективность противоопухолевого лечения. Получить человеческие моноклональные антитела вышеописанным методом не представляется возможным, ввиду следующих проблем:

• Иммунизация человека различными антигенами неэтична.
• Даже если получить иммунизированные лимфоциты человека, будут проблемы на этапе их слияния с клетками миеломы мыши — полученные гибридомы будут нестабильны.
• Клеточные линии миеломы человека, которые можно было бы эффективно использовать в рамках биотехнологий для получения антител, пока получить не удалось.

В этой связи необходимо было искать новые технологии получения антител. Решением проблемы стали гибридные, гуманизированные и одноцепочечные антитела, производство которых подразумевало применение гибридомной технологии, кратко описанной выше, и технологии рекомбинантной ДНК.

Механизм действия моноклоналных антител

Моноклональные антитела широко используются в лечении заболеваний, у которых в патогенезе замешан иммунный компонент. С их помощью лечат псориаз, аутоиммунные заболевания, ревматоидный артрит, рассеянный склероз. Большие перспективы эти технологии получили и в онкологии в рамках таргетной терапии. При этом, их эффект основан на различных механизмах, которые рассмотрены ниже.

В качестве примера изменения клеточных сигналов можно привести рецепторы факторов роста. Некоторые злокачественные клетки имеют на своей поверхности большое количество рецепторов к факторам роста, активирующим каскад реакций, направленный на усиление размножения клетки. Чем больше таких рецепторов, тем активнее протекает этот процесс. Если блокировать рецептор с помощью моноклонального антитела, он не сможет связаться с лигандом (фактором роста), и соответственно каскад этих реакций не будет запущен. Клетка не будет так активно размножаться и в конце концов погибнет.

Этот механизм реализуется следующим образом. Антитело связывается с антигеном, находящимся на поверхности злокачественной клетки, что приводит к активации многоэтапной системы комплемента (механизма иммунного ответа). Конечным этапом этих реакций является образование особого белка С 9, который перфорирует клеточную мембрану раковой клетки, что в конечном итоге приводит к ее гибели.

Препараты с моноклональными антителами

Препараты на основе моноклональных антител уже два десятилетия входят в протоколы противоопухолевого лечения некоторых злокачественных новообразований. В 2008 году ВОЗ были приняты рекомендации относительно непатентованных названий таких препаратов:

1. Их название должно заканчиваться на маб, от английского monoclonal antibody.
2. Для указания источника получения моноклонального антитела должны использоваться следующие подосновы:
3. • -аксо — гибридное антитело.
   • -о — мышиное антитело.
   • -кси — химерное антитело.
   • -у — человеческое антитело.

В настоящее время используется два вида противоопухолевых моноклональных антител:

• Неконъюгированные антитела — они оказывают непосредственное действие на процессы, которые приводят к гибели злокачественной клетки.
• Конъюгированные антитела — они связаны (конъюгированы) с токсинами или изотопами. Токсины и изотопы обладают уничтожающим действием на злокачественные клетки, а антитело обеспечивает их прицельную доставку к клеткам-мишеням.

Эти препараты используются чаще всего. Их целью является определенный рецептор на поверхности злокачественной клетки.

К этому типу препаратов относится ритуксимаб — первое моноклональное антитело, которое было одобрено для применения в клинической практике. Его используют для лечения CD20+ В-клеточных лимфом. Рецептор CD20 есть на В-лимфоцитах, как здоровых, так и опухолевых, но он отсутствует на других тканях и клетках, в том числе на стволовых. Поэтому при воздействии ритуксимаба хоть и погибает популяция В-лимфоцитов, но потом она восстанавливается за счет нетронутых стволовых клеток. Причем восстанавливаются именно здоровые клетки.

Неконъюгированные антитела могут помечать злокачественные клетки и делать их видимыми для иммунной системы. Таким способом работает алемтузумаб, который связывается с CD52+ лимфоцитами и привлекает к ним внимание иммунитета.

Также к неконъюгированным моноклональным антителам относятся ингибиторы рецепторов факторов роста. Факторы роста — это специальные молекулы, которые запускают деление клетки. Для того чтобы запустить этот процесс, фактор должен связаться со специальным рецептором, расположенным на мембране клетки, что приведет к каскаду соответствующих реакций. Такие рецепторы есть и у здоровых клеток, и у злокачественных, но у злокачественных их может быть очень много, что позволяет таким клеткам делиться быстрее. Блокирование рецепторов с помощью антител приводит к нарушению этого процесса деления и клетки уже не могут бесконтрольно размножаться. К таким препаратам относится трастузумаб, цетуксимаб и др.

К неконъюгированным антителам относятся и ингибиторы ангиогенеза — образования кровеносных сосудов. Ангиогенез очень важен для злокачественных опухолей, чтобы получать большее количество кислорода и питательных элементов, поэтому опухоли инциируют его образование с помощью специальных химических сигналов. Моноклональные антитела либо блокируют передачу этих сигналов, либо разрушают уже созданную внутри опухоли сосудистую сеть. Это приводит к нарушению ее питания и остановке роста. К группе этих препаратов относится рамуцирумаб, бевацизумаб и др.

Конъюгированные моноклональные антитела связывают с цитотоксическими или радиотоксическими веществами, что позволяет прицельно воздействовать разрушающим агентом на злокачественные клетки. В качестве примера такого препарата можно привести ибритумомаб (Зевалин), в котором моноклональное антитело против CD20 (как мы помним, это маркер В-лимфоцитов) соединено с радиоактивным изотопом — иттрием-90. Препарат применяется для лечения В-клеточных лимфом. В качестве другого препарата можно привести Кадсилу — препарат, в котором антитело трастузумаб конъюгировано с ингибитором микротрубочек DM1, оказывающим цитотоксический эффект. Применяют его для лечения рака молочной железы.

Проблемы при использовании моноклональных антител

Несмотря на, казалось бы, огромные перспективы в лечении онкологических больных, применение моноклональных антител не является панацеей и тоже имеет ряд проблем:

• Препараты на основе моноклональных антител биологически и биохимически нестабильны. Особенно это касается конъюгированных антител. Это требует особых условий производства, хранения и транспортировки.
• Антитела плохо проникают внутрь опухоли.
• Они могут вызывать иммунный ответ против себя, что блокирует их действие. У 75% пациентов, которым вводились мышиные антитела, наблюдалось образование нейтрализующих антител, что снижало эффективность лечения.
• Препараты на основе моноклональных антител оказывают токсическое действие. Конечно, оно не такое выраженное как у цитостатиков, но в ряде случаев токсичность настолько высокая, что требует отмены препарата.
• Наиболее важным моментом является высокая специфичность моноклональных антител и высокая гетерогенность опухолевых клеток. Не все раковые клетки имеют молекулы мишени, на которые направлено действие препарата. Соответственно, они ускользают от его действия и остаются нетронутыми. Постепенно масса этих клеток накапливается и опухоль становится резистентной к данному методу лечения.

Чтобы улучшить результаты лечения, разрабатываются новые виды моноклональных антител. Одним из вариантов являются биспецифические антитела, которые направлены сразу на две молекулярные мишени, например, блинатумомаб — препарат, направленный сразу на две клеточные мишени В-лимфоцита — CD 19 и CD22. Он повышает узнаваемость злокачественных клеток даже после их трансформации в другие виды лейкоза.

В любом случае моноклональные антитела — это новое и высокоперспективное направление в современной онкологии. Разработка современных, более совершенных технологий помогает решать имеющиеся проблемы и делает лечение пациентов эффективнее и безопаснее.