Дифференциальная диагностика лейкоза крс

Лейкоз крупного рогатого скота (leukaemia in cattle) – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной причиной которой – злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходи диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли.

Этиология.Возбудителем инфекции является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС)– Bovine Leukemia virus, относящийся к семейству Retroviridae, подсемейству Oncoviridae типа С.

Эпизоотологические данные.Источник инфекции – больные лейкозом животные. В естественных условиях ВЛ КРС может передаваться пренатально и постнатально. Механизм пренатальной передачи включает передачу вирусного генома через гаметы. Постнатальная передача включает передачу вируса через молоко или при контакте. Контактная передача может быть результатом прямого воздействия контаминированных вирусом секретов или экскретов или переноса вируса насекомыми или контаминированными объектами. Так как частицы ВЛ КРС не продуцируются in vitrо, то в большинстве случаев вирус передается с инфицированными лимфоцитами. Для заражения коровы достаточно ввести внутрикожно 2500 лимфоцитов крови.

Течение и симптомы. Встречается 2 формы лейкоза – энзоотическая и спорадическая. Спорадическая форма лейкоза встречается редко и поражает животных до 3-х летнего возраста.

Имеет три формы проявления: ювинальный лейкоз характеризуется увеличением лимфоузлов и часто инфильтрацией костного мозга; тимусная форма отмечается у телят до 2-х летнего возраста и характеризуется увеличением тимуса; кожная форма встречается у телят от 1 до 3-х летнего возраста, характеризуется узелковой лейкемической инфильтрацией кожи. Энзоотический лейкоз – контагиозная болезнь с длительно латентным периодом, во время которого в крови выявляется вирус лейкоза (ВЛ КРС) и антител к нему. В основном встречается у крупных животных в возрасте 5-8 лет.

Болезнь характеризуется пролиферацией неопластических элементов, в результате чего образуются отдельные опухолевые массы или диффузная инфильтрация различных тканей и органов. В опухолевый процесс вовлекаются лимфоузлы, часто поражаются селезенка, сычуг, сердце, почки и другие органы.

Диагнозна лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые включают серологические, гематологические, гистологические и вирусологические исследования.

При проведении серологических исследований в сыворотках крови определяют наличие антител в ВЛ КРС в РИД, ИФА. Для проведения вирусологических исследований используют пораженные ткани и лимфоциты, в которых выявляют наличие провирусной ДНК с помощью ПЦР, и элементарных частиц вируса с помощью электронной микроскопии.

Гематологическими исследованиями выявляют повышенное содержание лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, слабодифференцированных лимфоидных клеток.

Дифференциальный диагноз.Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберкулеза, паратуберкулеза и бруцеллеза.

Лечениебольных лейкозом животных не проводят, их подвергают вынужденному убою.

Профилактика и меры борьбы.Для профилактики лейкоза предложен ряд рекомбинатных вакцин, а также вакцин, основанных на использовании поверхностные антигены вируса gp 51, gp 30, p24. В условиях лабораторий предложенные вакцины оказались эффективными, но пока широкого применения не получили.

Основной метод профилактики и борьбы с лейкозом в различных странах мира – своевременно проведенная диагностика и удаление из стада инфицированных животных. При инфицированности стад вирусом лейкоза свыше 20% инфицированных животных изолируют в отдельное стадо и эксплуатируют с предосторожностью. При инфицированности ВЛ КРС ниже 20% наиболее радикальный способ – выведение их из стада с последующей сдачей на мясокомбинат и замена их здоровыми животными. Но в различных странах имеются свои региональные системы оздоровления от лейкоза, основанные на диагностике и выделении из стада инфицированных животных

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

На сегодняшний день диагноз лейкоз крупного рогатого скота рекомендуется ставить на основании комплексных лабораторных исследований: серологических, гематологических, патологоанатомических, гистологических и клинических. Ранняя и точная диагностика лейкоза является основой всех профилактических и оздоровительных противолейкозных мероприятий. При первичной постановке диагноза в хозяйствах, фермах, стадах проводят диагностический убой больных животных с последующим патологоанатомическим и гистологическим исследованием.

Иммунологическая диагностика лейкоза. Одним из важных моментов в диагностике лейкоза крупного рогатого скота является выявление инфицированных животных с помощью разных серологических методов (РИД, РСК, МФА, РИА, ИФА). Постоянным и характерным признаком инфицированности животных является наличие антител к антигену ВЛ КРС. Среди них РИД (реакция иммунной диффузии) отличается достаточно высокой чувствительностью и специфичностью, простотой и легкостью постановки. Стандартный диагностический набор, выпускаемый биопромышленностью, делает эту реакцию весьма удобной для проведения массовых исследований в любой диагностической лаборатории. В настоящее время у нас в стране и в большинстве зарубежных государств РИД принята в качестве основного серологического теста для диагностики лейкоза. Вместе с тем на завершающем этапе оздоровления желательно было бы использовать и более чувствительные реакции - такие как ИФА, ПЦР. Серологический же метод, специфичен и выявляет животных на всех стадиях инфекционного процесса, вызванного ВЛ КРС, а также позволяет проводить мероприятия, направленные на ликвидацию инфекции. Основан этот метод на обнаружении в сыворотке крови антител против гликопротеидного антигена вируса лейкоза. Время с момента внедрения вируса до образования антител к ВЛ КРС, определяемых в реакции иммунодиффузии (РИД), составляет 1-1,5 месяца. Результаты серологических исследований позволяют выявить некоторые возрастные особенности. Уровень инфицированности у молодняка 6-24 месяцев, а также количество носителей антител в ВЛ КРС гораздо ниже по сравнению с более старшими возрастными группами животных. Весной серо-негативный бык-производитель в пастбищный период заражается вирусом лейкоза от серо-позитивных коров может стать источником инфекции через 3 месяца. Поэтому осенью количество инфицированных быков-производителей увеличивается. Лейкоз по серологическим исследованиям установлен среди разных пород крупного рогатого скота. Так, уровень инфицированности черно-пестрой и красной породы (бурая латвийская, красная эстонская, красная литовская, красная степная, красная датская) выше, чем среди пород шведского происхождения (бурая карпатская, костромская, лебединская, бурая кавказская). На течение лейкоза и уровень инфицированности большую роль играет сезонность. Интенсивность перезаражения у коров выше зимой, нежели летом.

Выявление больных коров гематологическим методом. Больные лейкозом - это инфицированные вирусом лейкоза с переходом у животного процесса в гематологическую или клиническую стадию лейкозного (злокачественного, т.е. опухолевого) процесса. Серо-позитивных животных с двухлетнего возраста следует (согласно инструкции по лейкозу от 9 августа 1989 г.) исследовать гематологически. Эта стадия лейкозного процесса характеризуется более постоянными изменениями количественного и качественного состава периферической крови в виде абсолютного лимфоцитоза и наличием единичных малодифференцированных клеток.

Гематологические исследования способствовали более углубленному изучению патологических процессов в организме при.

Лейкозы включают в себя лимфоидный, миелоидный, недифференцированный, неклассифицированный (гемоцитобластоз) лейкоз, злокачественный гистиоцитоз. Длительное, бессимптомное течение лейкоза у крупного рогатого скота и многочисленное поражение животных происходит в гематологической стадии. Изменения в периферической крови отражают почти все патологические процессы, протекающие в организме явно и скрыто. Морфологическое исследование крови играет большую роль при заболеваниях кроветворной системы. Сущность ее заключается в оценке двух показателей белой крови (количество лейкоцитов в 1 мкл крови и процент лимфоцитов в лейкограмме). Сравнительно значимые изменения в показателях белой крови наблюдают в связи с возрастом животных, что находит отражение в "лейкозном ключе". По нему серо позитивно реагирующих животных подразделяют на здоровых, подозрительных и больных, Лимфолейкоз характеризуется острой и хронической формой течения. По мере прогрессирования лейкозного процесса наблюдают чередование алейкемического, сублейкемического, лейкемического составов крови. Сублейкемический уровень лейкоцитоза (лимфоцитоза) характерен для начальной стадии болезни, тогда как лейкемический показатель характеризуется быстрым, прогрессивным развитием процесса с наступлением конечной стадии лейкоза. При лимфолейкозе важное диагностическое значение имеет качественный состав лимфоидных элементов крови. В начале болезни клеточные элементы представлены в основном зрелыми лимфоцитами всех трех величин (малые, средние, большие). Могут появляться ридеровские, двухъядерные формы лимфоцитов (1-1,5 %), пролимфоциты, лимфообласти 1,5 %.

Возможно выделение и других клеток - теней Боткина-Гумпрехта, с рыхлым хроматином в ядре и цитоплазме, легко разрушающихся в связи с пониженной их устойчивостью к воздействию внешней среды. Часто их выявляют при высоком лейкоцитозе и при преобладании молодых клеток (пролимфоцитов, лимфобластов). Следовательно, морфологические исследования крови важны и с помощью их можно диагностировать больных лейкозом животных.

Необходимо исключить СЛМ и болезни, сопровождающиеся сходным с ЭЛ КРС изменениями в составе крови. СЛМ отличается от ЭЛ КРС по этиологии. Возбудителем СЛМ не является ВЛ КРС. При СЛМ не образуются антитела против ВЛ КРС, не возникает ПЛЦ, отмечается спорадическое распространение, острое и подострое течение и заболевание молодняка.

Необходимо учитывать, что многие острые и хронически протекающие болезни (туберкулез, бруцеллез, паратуберкулез, актиномикоз, некоторые инвазионные болезни, травматический перикардит, ретикулит, метриты, маститы, гепатиты и др.) нередко сопровождаются значительными изменениями крови, которые имеют защитный характер и определяется как лейкемоидная реакция организма (ЛР), отражающая функционально-реактивные изменения. Изменения крови при лейкозе носят органический характер. ЛР является временной, исчезает она с улучшением состояния животного. Для исключения указанных болезней проводят соответствующие микробиологические, серологические, аллергические, гистологические, копрологические, повторные гематологические и другие исследования.

Важным условием профилактики и борьбы с лейкозами крупного рогатого скота является своевременна достоверная диагностика и изоляция больных и подозрительных в заболевании животных.

Диагностика лейкозов осуществляется клиническими, гематологическим, серологическими, патологоанатомическим и гистологическим методами. Наибольшую значимость для своевременной локализации и предотвращения распространения лейкозов имеет ранняя диагностика при первичном установлении заболевания. В этих случаях надежность диагностики обеспечивается применением комплекса специальных приемов, комиссионных убоев, патологоанатомической экспертизы, гистологических исследований органов и тканей и эпизоотологического анализа .

Прижизненный диагноз ставят на основании клинических данных и результатов лабораторного исследования цельной крови и сыворотки крови.

В настоящее время выявление инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных осуществляют с помощью следующих методов:

• 1. Комплекса серологических реакций;
• 2. Обнаружение вируса или его антигенов.

До 1986 года в СССР единственным тестом прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота был гематологический метод, сущность которого заключается в обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабо дифференцированных клеток (родоначальных пролимфоцитов, лимфобластов), а также полиморфных, атипичных клеток кроветворных органов .

В бывшем СССР в 1965 году группой сотрудников ВИЭВ был разработан отечественный "лейкозный ключ", модифицированный в 1969 и 1976 годах.

Все "лейкозные ключи" основаны на количественных показателях лимфоидных форм лейкоцитов в единице объема крови, которые можно считать критерием заболевания животных лейкозом. Отличительной стороной применяемых в мире " ключей" является лишь степень жесткости диагностических критериев.

В гематологии принято различать лейкемическую, сублейкемическую и алейкемическую формы лейкоза. Случаи с особо высоким количеством лейкоцитов (100000 и более) называют гиперлейкемическими, а с количеством лейкоцитов ниже нормы - лейкопеническими.

Однако использование гематологического метода позволяло обнаруживать только животных с изменениями крови и морфологическими проявлениями лейкоза. Из-за вариабельности крови у молодых животных их гематологически исследовать на лейкоз начинают с 2-х летнего возраста, в то время как он у животных проявляется в любом возрасте.

В связи с этим при использовании гематологического метода диагностики в системе противолейкозных мероприятий в неблагополучном по лейкозу стаде длительное время (исследование крови на лейкоз проводят 2 раз в год при 2-3х месячной продолжительности инкубационного периода), передерживаются животные, находящиеся в стадии скрытого вирусоносительства .

Кроме этого гематологический метод отличается трудоемкостью. В течение рабочего дня производительность труда специалиста, связанного с полным гематологическим исследованием (подсчет общего количества лейкоцитов а единице объема крови и выведение лейкоцитарной формулы) на лейкоз, ограничивается 22-25 животными .

В настоящее время основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический: реакция иммуннодиффузии в агаровом геле РИД). Гематологический и клинический методы используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных.

РИД в качестве диагностического теста при лейкозе используют на крупном рогатом скоте, начиная с 4-6 месячного возраста. Она отличается простотой в применении, высокой чувствительности и экономичностью. С ее помощью в сыворотке крови зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных обнаруживают специфические антитела, индуцированные вирусом лейкоза крупного рогатого скота, в виде линий преципитации. Выявление этих антител свидетельствует о персистенции вируса лейкоза крупного рогатого скота в организме крупного рогатого скота. Серопозитивнее состояние животного не коррегирует с гематологическим и опухолевым проявлениями лейкоза .

РИД выявляет зараженных животных на всех стадиях инфекционного процесса, за исключением инкубационного периода.

Нахмансон В. М. и др. (1991) пришли к заключению, что РИД обеспечивает оздоровление хозяйства от лейкоза крупного рогатого скота независимо от стадии проявления инфекционного процесса, уровня эпизоотической напряженности по лейкозу крупного рогатого скота, технологии ведения и продуктивной результативности молочного скотоводства, обеспеченности животноводческими объектами и др.

Однако РИД также имеет свои недостатки (например, выпадение серологического ответа). Установлено, что среди инфицированных животных дойного стада постоянно имеются особи, сыворотка крови которых отрицательно реагирует в РИД. Они служат скрытым источником инфекции в оздоравливаемом стаде [13].

Выпадение, серологической реакции затрудняет своевременное выявление и изолирование источника инфекции и тем самым удлиняет сроки оздоровления неблагополучных по лейкозу стад. Многие отечественные и зарубежные исследователи объясняют выпадение серологической реакции передачей антител молозивом потомству. За 2-3 недели до и после отела у коров в сыворотке крови противовирусные антитела в РИД не обнаруживают. В этот период высокий титр антинел регистрируют в молозиве и молоке инфицированных коров.

Мурватуллаев С. А. (1994) пришел к заключению, что выпадение серологических реакций при лейкозе крупного рогатого скота часто встречается. Могут отсутствовать линии преципитации как к гликопротеидному, так и к полипептидному антигенам вируса лейкоза, причем первому из них линия преципитации часто восстанавливается, а спустя некоторое время может вновь исчезать. Линия к полипептидному -24 антигену вируса лейкоза не восстанавливается. Связи между выпадением реакции и беременностью, отелом, сроком стельности не установлено. Существует закономерность между уменьшением (увеличением) числа лейкоцитов и выпадением (восстановлением) серологического ответа больного лейкозом животного .

Частое выпадение серологической реакции у больного животного свидетельствует о необходимости сокращения сроков диагностического исследования в неблагополучных стадах с 90- до 30-45 дней для своевременного выявления и изолирования источника инфекции.

Согласно действующей инструкции, исследование сыворотки крови в РИД запрещено повторное ее переисследование при положительном ее результате.

Кроме РИД, были предложены и другие серологические реакции (реакция связывание комплемента, реакция иммуннофлюоресценции, реакция радиоиммуннопреципитации, реакция нейтрализации), но широкого применения они не нашли .

ИФА - высокочувствительный диагностический тест. С его помощью выявляют антитела не только в сыворотке крови, но и в других биологических жидкостях (молоко). Это очень важно, так как этот метод позволяет оценить эпизоотическое состояние стада по пробе молока. Благодаря высокой чувствительности, быстрой постановке реакции этот современный метод можно использовать для выявления вирусоносительства на последних стадиях оздоровления неблагополучных стад .

В последние годы всё более широкое применение находят молекулярно-биологические исследования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод обладает высокой специфичностью и позволяет выявить инфицированных животных на более ранних стадиях заражения. ПЦР-диагностику нельзя пока рассматривать в качестве массового метода исследования при лейкозе, она может использоваться наряду с серологическими методами преимущественно в племенных хозяйствах на завершающей стадии оздоровления .

Посмертная диагностика лейкоза крупного рогатого скота состоит из гистологического исследования и патологоанатомического вскрытия. Патологоанатомическая диагностика основана на обнаружении в кроветворных органах изменений, являющихся следствием избыточного разрастания ткани. Патологоанатомические изменения лейкозного характера регистрируют при вынужденном убое животных с клиническими признаками лейкоза. При гематологической стадии лейкоза патологоанатомические изменения у крупного рогатого скота устанавливают не у всех животных.

Наиболее частой формой лейкоза крупного рогатого скота являются лимфоидные лейкозы и лимфосаркомы (гематосаркомы). Ряд исследователей описали миелоидные формы лейкоза и лимфогрануломатоз.

В соответствии с действующей инструкцией по профилактике и оздоровлению крупного рогатого скота от лейкоза диагноз на лейкоз считается установленным при наличии одного из таких показателей .

• 1. Положительного результата серологического исследования по РИД;
• 2. Характерных патологоанатомических признаков заболевания;
• 3. Положительного результата гистологического исследования патологического материала.

Основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический - реакция иммуннодиффузии в агаровом геле. Гематологический и клинический методы исследования используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных. Патологоанатомические исследования устанавливают степень поражения органов, а гистологическим - морфологические формы лейкоза.

При выявлении у крупного рогатого скота изменений белой крови необходимо провести дифференциально-диагностические исследования, исходя из того, что подобные нарушения возможны при некоторых инфекционных и незаразных болезнях. Следует отметить, что дифференциальную диагностику легче осуществлять в тех хозяйствах, где ветеринарные специалисты вооружены многолетними знаниями эпизоотической ситуации и анамнестическими данными о характере преобладающих незаразных болезней крупного рогатого скота.

К числу хронических заразных болезней крупного рогатого скота, при которых наблюдаются изменения крови, требующие дифференциации с целью исключения лейкоза, относится туберкулез, паратуберкулезный энтерит, бруцеллез, актиномикоз, бабезиоз, фасциолез и др.

Дифференциация туберкулеза достигается прежде всего аллергическими, бактериологическими, серологическими (РИД) и патологоморфологическими исследованиями. При туберкулезе наблюдаются лейкоцитозы или лейкопении, сопровождающиеся нейтрофилией. При благоприятном течении туберкулеза отмечают умеренный непродолжительный лимфоцитоз .

При бруцеллезе, сопровождающемся гнойно-некротическими процессами, регистрируют нейтрофилию со сдвигом лейкоцитарной формулы влево. Чаще всего у крупного рогатого скота протекает с нормальными показателями белой крови. При дифференциальном диагнозе учитывают данные эпизоотологии и результаты серологических исследований на лейкоз и бруцеллез.

При паратуберкулезе могут наблюдаться лейкопении и лимфопении .

Актиномикоз исключают клиническим исследованием. Лимфоузлы (подчелюстные, в области глотки, гортани и реже вентральной части шеи) при актиномикозе характеризуются плотностью пораженной ткани, флюктуацией, абсцедированием с образованием фистулезных ходов на разрезе .

Из незаразных заболеваний от лейкоза крупного рогатого скота следует дифференцировать маститы, пневмании, ретикулоперикардиты, эндометриты, болезни печени и прочие .

Хронические заболевания без гнойно-воспалителъных проявлений сопровождаются в большинстве случаев нормальными показателями периферической крови, иногда наблюдаются повышенные количества лейкоцитов и изменения в лейкоцитарной формуле с наличием эозинофилии, нейтрофилии или моноцитоза. В редких случаях при одновременном сочетании двух или более хронических заболеваний нелейкозной природы у животных может отмечаться умеренный лимфоцитоз при нормальном или повышенном количестве лейкоцитов .

Также лейкозы следует дифференцировать между собой: гемацитобластоз, миелолейкоз, лимфолейкоз, гематосаркомы, злокачественный гистиоцитоз, лимфосаркоматоз, ретикулосаркоматоз, лимфогранулематоз. Эти формы можно различать при исследовании мазков крови: лейкоцитарная формула и степень зрелости клеток переферической крови

В практике нередко приходится дифференцировать лейкоз от опухолей, которые макроскопически (отдельные или мужественные узлы) или микроскопически (диффузная или тотальная пролиферация клеток, сглаживание структуры тканей органов) имеют сходство с лейкозом (Лемеш В. М. и др. 1987 г).

Чаще всего в таких случаях диагностируются опухоли из волокнистой соединительной ткани, железистого эпителия, нейрофибромы.

Лейкоз крупного рогатого скота — хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основным признаком которой является злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания. В результате происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли.

Болезнь регистрируется почти во всех странах мира и наносит значительный экономический ущерб. Особую актуальность она приобрела из-за близкого родства ее возбудителя с вирусом Т-клеточного лейкоза человека.

К вирусу восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, зебу, буйволы и, по некоторым данным, лоси.

Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Retroviridae, подсемейству Oncovirinae, роду Oncovirus. Вирионы сферической формы, размером 40—90 нм и состоят из нуклеотида (сердцевины) с кубическим типом симметрии и липопротеидной оболочки, образующей на поверхности выступы. Нуклеотид содержит диплоидный геном, представленный двумя односпиральными линейными молекулами РНК.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус неустойчив к факторам внешней среды. Инактивируется при высоких температурах (56 °С и выше), УФ-излучении, под действием ультразвука. Повторные размораживания и оттаивания разрушают вирус. Дезинфицирующие растворы (формальдегид, едкие щелочи, хлорная известь и т. д.) в обычных концентрациях действуют на него губительно. Вирус чувствителен к жирорастворителям (эфиру, хлороформу, ацетону и т. д.).

Антигенная структура и активность. Вирионы вируса содержат наружные гликопротеидные и внутренние полипептидные антигены. Гликопротеидные антигены обладают гемагглютинирующей активностью и индуцируют образование вируснейтрализующих антител, которые защищают животных от инфицирования. Полипептидные антигены индуцируют образование преципитирующих

и комплементсвязывающих антител. Кроме того, преципитирующие антитела синтезируются и к гликопротеидному антигену и обнаруживаются у инфицированных животных в более ранние сроки в РДП.

Антигенная вариабельность и родство. В антигенном отношении штаммы вируса лейкоза крупного рогатого скота родственны, но отличаются от ретровирусов и вирусов других родов по антигенным свойствам, морфогенезу, синцитиобразованию, образованию в монослойных культурах клеток, свойством ревертазы. На основании этих различий вирус лейкоза рекомендуют отнести к особой группе, именуемой как тип Е.

Культивирование вируса. В лабораторных условиях вирус размножается в краткосрочных субкультурах лейкоцитов крови и перевиваемых культурах клеток животных различных видов (крупного рогатого скота, овец, летучих мышей, обезьян, собак и т. д.) и человека. Наиболее чувствительны — монослойные культуры клеток селезенки на ранних пассажах.

Репродукция вируса в культуре клеток не вызывает нарушения монослоя, а сопровождается образованием многоядерных клеток (синцитиев) уже в ранних пассажах. Это свойство вируса (синцитиобразование) было использовано в диагностическом методе по выявлению инфекционного вируса и вируснейтрализующих антител.

Гемагглютинирующая активность. Вирус агглютинирует эритроциты мышей при pH 6,0 и 4 °С.

Экспериментальная инфекция. Ее можно воспроизвести на новорожденных телятах и овцах, которым инокулируют разными способами (внутриперитонеально, подкожно, внутримышечно, аэрозольно) нативные лейкоциты или краткосрочные культуры клеток от больных лейкозом коров, или вируссодержащую культуральную жидкость. После длительной инкубации (от нескольких месяцев до нескольких лет) развивается характерная клиническая картина лейко — и лимфоцитоза, которая заканчиваются опухолевой стадией болезни и гибелью.

При экспериментальном заражении коз, свиней, кроликов наблюдается длительное выявление вирусспецифических антител без клинических проявлений болезни.

Клинические признаки. Различают две формы клинического течения болезни: энзоотическую и спорадическую.

Энзоотический лейкоз поражает взрослых (5—8 лет) животных и протекает с длительным латентным периодом (до нескольких лет), который характеризуется стойким лимфолейкозом без клинических признаков болезни. Терминальная стадия сопровождается снижением массы тела, молочной продуктивности, увеличением лимфоузлов и заканчивается смертью. Экономический ущерб очень высокий.

Спорадический лейкоз встречается редко и в экономическом отношении малоактуален. Поражается молодняк до трех лет. Болезнь протекает в трех формах: ювенальной, тимусной и кожной.

Патологоанатомические изменения. Они специфичны и характеризуются диффузной инфильтрацией различных тканей клетками кроветворных органов и образованием опухолевых масс во внутренних органах (костном мозге, тимусе, селезенке, лимфоузлах, сердце, сычуге, почках, матке, скелетных мышцах). Лимфоузлы и селезенка увеличены, бугристые, с очагами некроза и кровоизлияниями.

Локализация вируса. Вирус локализуется в лимфоидных клетках разных органов, хотя обнаружить его удается только в молозиве и молоке. В инфицированных клетках естественно и экспериментально зараженных животных вирус сохраняется пожизненно (персистирует). В инфицированных лимфоцитах в форме провируса (непродуктивное состояние) вирус защищен от действия вируснейтрализующих антител и может передаваться потомству во время деления клеток. Провирус может изменять экспрессию генов клетки, что приводит к ее трансформации и развитию опухолевой стадии лейкоза.

Источник инфекции — больные животные. Основной путь передачи инфекции в естественных условиях через контаминированные вирусом инъекционные иглы, хирургические инструменты и т. д. при проведении санитарно-ветеринарных мероприятий. Кроме того, вирус может передаваться трансплацентарно (хромосомная или экстрахромосомная трансмиссия) от матери к плоду, алиментарно через молоко и молозиво, а также половым путем через инфицированную сперму. Распространяться инфекция может кровососущими насекомыми.

Диагностика. Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований, которые играют решающее значение.

Взятие материала. От больных и подозрительных на лейкоз животных берут кровь. Для гематологических исследований ее берут из яремной вены с антикоагулянтом. Для серологических исследований используют сыворотку крови от животных в возрасте 6 мес и старше. Транспортируют в термосе со льдом.

От трупов берут кусочки пораженных органов: селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца, сычуга, матки, скелетных мышц. Транспортируют в свежем виде или в растворе консерванта (10%-ном формалине) в термосе со льдом.

Лабораторная диагностика. Проводят гематологические, гистологические и специфические исследования.

Гематологический метод основан на подсчете лейкоцитов периферической крови и выведении лейкоцитарной формулы. Для этого используют электронный счетчик или камеру Горяева. Из проб крови, где установлен лимфолейкоз, готовят мазки и подсчитывают клетки белой крови в зависимости от их морфологии.

У больных лейкозом повышено содержание лейкоцитов за счет клеток лимфоцитарного ряда, а также слабодифференцированных ретикулярных и антигенных (опухолевых) клеток.

У подозрительных на лейкоз животных гематологические исследования повторяют через равные интервалы (2—3 мес).

Для гистологических исследований из кусочков пораженных органов готовят специальные срезы и окрашивают гематоксилин-эозином. У больных лейкозом наблюдают диффузную инфильтрацию клетками лимфоидного ряда разной степени зрелости, склеротические изменения и некрозы.

Помимо этого для подтверждения диагноза могут проводить индикацию и идентификацию вируса.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Используют серологические реакции, из которых наиболее чувствительны РДП и ИФА. Они позволяют обнаружить специфические антитела у инфицированных животных, начиная с 6-месячного возраста и старше. Это объясняется тем, что телята, выпаиваемые молозивом и молоком инфицированных коров, получают материнские антитела, которые сохраняются до 6 мес.

РДП (РИД). Для постановки реакции используют диагностический набор, содержащий необходимые компоненты (специфический антиген и сыворотку к нему, отрицательную сыворотку). Реакцию ставят микро — или макро методом по общепринятой методике, используя 0,8%-ный агар на трис-буфере. Учет проводят через 48 ч. Животные, сыворотки крови которых положительно прореагировали (полоса преципитации между испытуемой сывороткой и антигеном) в РДП, считаются зараженными лейкозом.

ИФА. Применяют для обнаружения специфических антител в сыворотках крови, молоке и молозиве. Используются диагностические наборы для непрямого и конкурентного вариантов ИФА. Данный метод в 100 раз чувствительнее РДП и позволяет проводить широкомасштабные исследования по эпизоотическому лейкозу в стадах крупного рогатого скота.

Другие серологические методы уступают по чувствительности (% выявляемости) РДП и ИФА, поэтому могут рекомендоваться в качестве дополнительных. К ним относятся реакции латексагглютинации (РЛА), непрямой гемагглютинации (РНГА), непрямой иммунодиффузии (РИФ), а также встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ).

Индикация и идентификация вируса. В диагностике лейкоза крупного рогатого скота они имеют скорее дополнительное значение и используются менее широко. С этой целью применяют ПЦР для обнаружения вирусного генома (провирусной ДНК), выделение вируса в культуре клеток и его индикацию в месте синцитиобразования, электронно-микроскопический метод, реакции бласттрансформации лейкоцитов (РБТЛ), а также обнаружение вирусных антигенов методом радиоиммунологического анализа (РИА).

ПЦР. Реакция позволяет обнаружить провирусную ДНК в патологическом материале через две недели после заражения. В диагностический набор входят праймеры, соответствующие участкам определенных генов некоторых структурных белков. Чувствительность данного набора достаточно высокая и позволяет выявлять до десяти копий ДНК в 1 мкг исследуемой пробы.

Тест синцитиобразования (ТСО). Основан на выделении инфекционного вируса в субкультурах и перевиваемых культурах клеток лимфоцитов, где он размножается с образованием многоядерных клеток (синцитиев), которые выявляются при окрашивании монослоя.

Электронно-микроскопический метод. Позволяет обнаруживать вирусные частицы в препаратах, полученных из краткосрочных культур клеток лейкоцитов крови, зараженных вирусом лейкоза, и из перевиваемых культурах клеток, сокультивируемых с инфицированными лимфоцитами. Вирионы обнаруживают в основном в межклеточном пространстве и на внешней мембране лимфоидных клеток. Они имеют ультраструктуру, характерную для онковирусов типа С.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Основана на способности лимфоцитов трансформироваться в переходные клеточные формы в питательной среде (в присутствии фитогемагглютинина) при определенном режиме культивирования (36 °С, 72 ч). Такие же процессы происходят in vivo у клинически здоровых животных. В препаратах, полученных в результате культивирования и окрашенных по Романовскому—Гимзе, определяют количество трансформированных лимфоцитов на 1000 учтенных клеток и выражают показателем бласттрансформации. В норме у клинически здоровых коров он составляет в среднем 60 % (40—90 %). Диагноз на лейкоз считается подтвержденным, если этот показатель не выше 35 %.

РИА. Метод конкурентного радиоиммунного анализа позволяет обнаруживать вирусные антигены в краткосрочных культурах лимфоцитов крови инфицированных животных. Основан на конкуренции вирусного антигена, выделенного из зараженных клеток, с контрольным (специфическим) антигеном, меченным изотопом, за связывание со специфическими антителами. Метод — наиболее чувствителен и специфичен.

Дифференциальный диагноз. Лейкоз крупного рогатого скота дифференцируют от актиномикоза, туберкулеза, паратуберкулеза и бруцеллеза.

Иммунитет и специфическая профилактика. Вакцины против лейкоза крупного рогатого скота нет, но исследования в этой области продолжаются. В основном, они идут по двум направлениям: созданию вакцины на основании культурального вируса и разработки рекомбинантной вирусвакцины. Достижение первого направления исследований — получение культурального вируса с использованием перевиваемых культур клеток (LK-15, FLK и др.), выбор эффективного инактиванта (формальдегида, этиленимина и его производных), который обеспечивает сохранение антигенной активности и полностью устраняет инфекционность вируса, и, наконец, проведение испытаний опытных серий полученного препарата на естественно-воприимчивых животных (телятах).

Что касается генно-инженерных разработок, то на сегодняшний день в качестве вирусного вектора используют осповакцину, содержащую рекомбинантные гены, кодирующие наружные антигены вируса лейкоза. После адаптации таких штаммов к культурам клеток (NP-2) получена живая культуральная рекомбинантная вакцина, опытные серии которой испытаны на телятах и овцах.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.