Пцр на вирус лейкоза

Обнаружение в крови кошки ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в организме животного есть этот вирус и в данный момент выделяется в окружающую среду (т.е. животное является источником заражения для других животных).
Обнаружение в крови кошки ПЦР-про- ДНК Вирусного лейкоза кошек, говорит о том, что в крови животного есть этот вирус и животное может быть как носителем этого вируса, так и выделять вирус в окружающую среду.
Если ПЦР-РНК Вирусного лейкоза кошек, не обнаружен в крови, то это не говорит об отсутствии вируса в организме, говорит только о том, что в данный момент кошка не выделяет вирус лейкоза в окружающую среду.
С уважением,
Екатерина Лаврова,
зав. ОМД и ИФА
Лаборатория "Шанс Био"

Данный анализ будет доступен к заказу осенью этого года.

С уважением,
Кинкладзе М.Д.
директор по качетсву
Лаборатория "Шанс Био"
-----------------------------------
Для наиболее достоверной диагностики вирусной лейкемии кошек лучше всего использовать метод ПЦР, т.к. он наиболее чувствительный.

Но необходимо подходить комплексно, т.е. определять провирусную ДНК в крови, РНК в крови и РНК в слюне.

С уважением,
Зайцев+

1. Достоверность результатов анализов слюны, слезы на влк стоит под большим вопросом по результатом проведенных исследований специфичности и чувствительность нескольких таких тест систем, поэтому этот анализ не рекомендован вовсе. Когда сделают нормальный тест, опубликуют и проверят - тогда его станут использовать.
2. Не знаю зачем, я не сдаю.
3. Я не знаю, ловит ли он рнк вируса или нет. ДЛя этого нужно провести вакцинацию кошек именно этой вакциной и провести им серию пцр рнк исследований в течение какого-то периода, чтобы ответить на вопрос, может ли вакцинацию давать такой результат тест. С контрольной группой. При чем именно этой лаборатории. Никто этого не делал.. Поэтому остается только гадать.
В теории это могло бы давать положительный результат, но это не значит, что так есть на практике. Пишут, что результат ELISA у привитых кошек отрицательный.

Для диагностики я использую разные варианты в зависимости от пациента и вероятности наличия у него влк вовсе. Я стараюсь отправлять анализы в разные лаборатории, чтобы определить для себя лучший вариант. Однако, пока эти попытки также противоречивы..
Многое зависит вообще от анамнеза и вероятности заболеть инфекцией, от других признаков, а не от лаборатории.
Известно, что результаты иммуноферментных тестов (у нас ветэксперт используется как экспресс скрининг) коррелируют с результатами высокоспецифичных и чувствительных ELISA анализов (тоже можно сдать в МСК в нескольких лабораториях), есть исследования, что это так. Поэтому я им доверяю, меня они устраивают как скрининг. Однако при необходимости подтвердить диагноз, что бывает тоже часто, я сдаю ELISA и пцр в другие лабы.

Кошка с ПЦР + может быть незаразна, если у нее регрессивная инфекция.
Кошка с + ИФА И ELISA скорее всего заразна, так как имеет много вируса, обнаруживаемого таким методом. Но перейдя в регрессию она становится незаразной.
Такие данные об этом)
Отрицательный пцр точно не говорит о том, что кошка не выделяет вирус. ПЦР может быть ложноотрицательным запросто. ВЛК и ВИК очень часто мутирующие вирусы, которые анализ может не обнаружить просто из-за изменения последовательности генов вируса вследствие мутаций, которые с ними происходят только так)
Являются ли РНК ПЦР + кошки заразными или незаразными я не знаю. Нет нигде таких данных, не знаю, откуда такие выводы) Кровь заразна, если анализ не ложный. Положительный анализ на рнк вируса же не говорит о том, что инфекция поразила слюнные железы и вирус выделился со слюной и кошка заразна? Он просто нашел вирус и все.

Вот ещё хорошая статья

1.6 Диагностика
1.6.1. Прямые методы обнаружения

Вирусная лейкемия кошек (лимфосаркома, лейкемия, лейкоз) — это заболевание, поражающее гемолимфопоэтическую систему кошек.

Возбудитель лейкемии кошек — РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, подсемейства Oncornavirinae, рода онковирусов, типа С, вида онковируса кошек (FeLV).

Вирус может быть проявлен в 2 формах — эндогенной (непатогенной) и экзогенной (патогенной).

Возбудитель вирусного лейкоза кошек опасен для особей всех пород, включая диких. Заражение происходит при контакте через слизистые оболочки респираторных путей и органов ЖКТ, кровь, плаценту инфицированной матери, а также во время грудного кормления.

В некоторых случаях данный вирус не проявляет себя годами, в то время как другие вирусы могут стремительно атаковать организм животного.

Лимфоидный лейкоз у кошек имеет 4 формы проявления:

• вилочковая,
• полицентрическая,
• алиментарная
• подлинная лейкемия.

Наиболее распространены тимусная лимфосаркома и лимфатическая лейкемия. Кроме того, вирус вызывает ретикулосаркому и гранулоэритромонозную лейкемию.

Существует три вида штаммов вируса лейкемии кошек:

• FeLV-A — угроза иммунной системы
• FeLV-В — развитие опухолей
• FeLV-С — вызывает анемию

Симптомы вирусного лейкоза кошек различны и зависят от штамма. Визуально можно отметить:

• Анемичные или иктеричные слизистые оболочки
• Лимфаденопатию
• Хроническое течение респираторных инфекций
• Необъяснимая потеря аппетита, веса (даже при сохраненном аппетите)
• Ухудшение качества шерсти
• Слабость, вялость
• Периодическая гипертермия
• Желудочно-кишечные расстройства
• Стоматит

Для диагностики вируса лейкоза кошек проводится два типа тестов крови: иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунофлуоресценция (МФА). Также проводится ПЦР диагностика. Желательно использовать сразу все возможные варианты диагностики, так как возможен вариант ложноотрицательного результата.

Если котенок дал положительный результат на вирус лейкоза кошек в возрасте до 16 недель, рекомендуется пройти повторное тестирование после того, как ему исполнится более 16 недель, поскольку результат может оказаться положительным из-за колострального иммунитета.

Вирус лейкемии кошек является вредоносным. Как только поставлен диагноз этого заболевания, кошка заразна и является носителем вируса.

Патологоанатомические изменения:

Наблюдаются следующие макроскопические симптомы при злокачественной форме:

• кахексия
• анемия
• увеличение селезенки
• незначительное увеличение лимфатических узлов немного увеличены
• костный мозг однородно окрашен в светло-красный цвет с серым оттенком.

В настоящее время специфического лечения лейкоза кошек нет. В случае появления других заболеваний в назначении их лечения всегда необходимо учитывать вирус лейкоза в организме, так как некоторые действия, как и сами эти заболевания, могут спровоцировать его агрессивное течение.

В случае возникновения онкологического проявления лейкоза (лимфомы) необходимо проводить химиотерапию. Данный диагноз ставится на основе цитологического или гистологического материала (пораженные органы, лимфатические узлы, костный мозг).

Профилактические меры

Не допускать скученного содержания животных в одном помещении. Вновь приобретенных кошек следует помещать в карантин, проводить исследования на возможные скрытые инфекции.

В случае, если питомец находится на свободном выгуле, можно рассмотреть вариант вакцинации. Но вакцинации подвергаются только те животные, которые проверены на отсутствие лейкоза методом ИФА и ПЦР минимум 2-3 раза с интервалом 3-4 недели. Вакцинация не дает 100% гарантии, поэтому лучше избегать контакта с потенциальными носителями.

Лейкемия кошек

Лейкемия кошек – вирусное заболевание, вызываемое ретровирусом, который часто называют его английской аббревиатурой FeLV (Feline Leukemia Virus, вирус лейкемии кошек). Как и все ретровирусы, он обладает специфическими ферментами, позволяющими ему выполнять транскрипцию и интеграцию провирусной РНК и ДНК в геном инфицированной клетки.

Эта особенность позволяет ему находиться в организме в течение очень длительного времени. По окончании латентного периода у животного могут наблюдаться разнообразные клинические признаки (анемия, гипертермия, опухоли). Часто возникают вторичные инфекции, так как этот вирус является иммунодепрессивным. Применяется симптоматическое лечение, при необходимости могут использоваться иммуномодуляторы, но в настоящее время мер, способных уничтожить вирус, не существует. Лучшим средством для защиты, как популяций кошек, так и отдельных особей, являются вакцинация и раннее выявление заболевания.
Введение

Вирус лейкемии кошек (иногда его называют вирусом лейкоза) впервые выявлен в 1964 году. Он распространен по миру повсеместно и вызывает у кошек различные заболевания, в том числе тяжелые иммунодефициты, злокачественные опухоли и лейкозы. Несмотря на использование вакцин, он остается одной из серьезных причин заболеваемости и смертности животных, в частности, в условиях высокой скученности (питомники и гостиницы для кошек). Лейкемия кошек не является зоонозным заболеванием.
Этиология

Вирус лейкемии кошек, обычно называемый ВЛК (по-английски FeLV), относится к семейству Retroviridae, представители которого отличаются характерной структурой, и, главное, способом размножения. Этот РНК-содержащий вирус с помощью переносимого им фермента (обратная транскриптаза) выполняет транскрипцию своего генома в провирусную ДНК и способен таким образом встраиваться в хромосомы инфицированных клеток.

ВЛК, способный вызывать возникновение опухолей и лейкоза, относится к роду Gammavirus. Как и все ретровирусы, он состоит из оболочки, окружающей матрицу, и капсида, содержащего две одинаковые молекулы РНК и вирусные ферменты: это обратная транскриптаза, интеграза и протеаза.

РНК вируса содержит 4 гена, которые определяют действие вируса. Ген gag кодирует внутренние белки вируса (матрица, капсид), ген env — белки внешние (оболочка), ген pol — обратную транскриптазу и интегразу, а ген pro — протеазу вируса. Из составляющих вирус белков и гликопротеинов особенно важное значение для диагностики и лечения заболевания имеют два:
— белок р27, входящий в состав капсида (если он обнаруживается в сыворотке или клетках, это свидетельствует об инфицировании вирусом лейкемии кошек);
— гликопротеин оболочки gp70, отвечающий за проникновение вируса в клетку. По этой причине gp70 является главной мишенью при разработке вакцин, тем более, что он обладает высокой антигенной стабильностью.

В оптимальных условиях (умеренная температура и довольно высокая влажность) вирус может просуществовать до 48 часов. Он инактивируется традиционными дезинфицирующими средствами.
Эпидемиология

Способы передачи вируса лейкемии кошек могут быть различными. Он может проникнуть в организм при укусе или спаривании, но чаще всего он передается орально-назальным путем. Действительно, ВЛК присутствует в слюне, слезах, сперме, моче и испражнениях. Возможна вертикальная передача от матери к котятам либо через молоко, либо вследствие продолжительных контактов или даже трансплацентарным путем.

Наиболее часто в литературе упоминаются случаи инфицирования вирусом ВЛК питомников и гостиниц для кошек, и существует предположение, что особенно восприимчивы к нему породистые кошки. В результате проведенных информационных кампаний, ликвидаций очагов инфекции и вакцинаций частота заболеваний в ряде популяций кошек значительно уменьшилась. В настоящее время лейкемия в основном встречается у кошек, живущих в домах с садами, где между кошками часто происходят неконтролируемые контакты.

Представляется, что распространенность инфекции составляет от 3 до 4% для любой популяции кошек. Но когда исследования проводят среди больных кошек, то, в зависимости от метода изучения, она может достигать от 7 до 21%. Большинство инфицированных кошек моложе 2 лет. Это объясняется большей восприимчивостью молодых особей. Тем не менее, котята младше 6-8 недель, родившиеся от иммунизированных матерей, обычно защищены материнскими антителами и в этом случае период максимальной чувствительности находится между возрастом от 1,5 до 4 лет.

Традиционно предполагают, что сопротивляемость значительно увеличивается с возрастом. Тем не менее, анализ случаев заражения среди кошек старше 6 лет показывает, что взрослые особи сохраняют чувствительность к инфекции, в особенности когда они подвергаются значительному и повторяющемуся воздействию вируса.
Патогенез

Инфекция характеризуется существенно различающимися между собой стадиями, которые определяют клинический аспект болезни и возможную контагиозность пораженных кошек. В зависимости от состояния иммунитета кошки в момент инфицирования, заболевание может пройти весь цикл патогенетического развития или же, напротив, на одном из этапов вирус будет блокирован.
Течение заболевания

Попав в организм оральным или назальным путем, вирус активно размножается в местных лимфоидных тканях (миндалевидных железах и заднеглоточных лимфатических узлах). Инфицированные лимфоцитарные и моноцитарные клетки попадают в кровеносную систему и через несколько дней после инфицирования наступает этап виремии, которую сложно обнаружить с помощью сывороточных тестов.

Вирус, таким образом, разносится к различным тканям и, в том числе, к костному мозгу, где может поразить стволовые клетки крови любой линии. Встраивание ДНК провируса в хромосомы инфицированных клеток, характерное для ретровирусов, может происходить только в клетках, находящихся в состоянии активного деления. Эта фаза наступает через 2-4 недели после первичного инфицирования и может продолжаться до 4 месяцев.

Поскольку виремия слабо выражена, экскреция также незначительна, и поэтому кошки заразны лишь в слабой степени. Инфицированные стволовые клетки производят также инфицированные кровяные клетки, которые при циркуляции создают стойкую виремию. Вирус при этом распространяется к эпителиальным тканям самых разных систем и органов, таких как пищеварительный тракт, почки, мочевой пузырь, верхние дыхательные пути, носоглотка и слюнные железы, откуда в большом количестве и экскретируется. Кошка, у которой виремия выражена в течение длительного времени, постоянно выделяет вирус в окружающую среду.
Индивидуальные вариации

В зависимости от статуса иммунной системы кошки инфекция может быть пресечена на том или ином этапе. В имеющихся публикациях приведены очень неоднородные данные, что связано, в частности, с различиями лабораторных методов, использованных авторами для определения уровня стойкой виремии. Примерно в трети случаев иммунная система действует очень эффективно и нейтрализует вирус сразу после его проникновения в организм или на этапе первой фазы виремии. Кошки, следовательно, выздоравливают, а вырабатываемые организмом антитела, судя по всему, защищают их очень эффективно.

Примерно в трети случаев иммунная система не может помешать вирусу попасть во вторичные центры активного размножения. Такие кошки становятся латентными носителями вируса. Примерно половина из них сумеют уничтожить вирус окончательно, тогда как у другой половины может произойти реактивация вируса, которая переведет их в состояние стойкой виремии.

Принято считать, что если реактивация не произошла в течение года после инфицирования, она становится крайне маловероятной. В последней трети случаев иммунная система кошек оказывается неспособной контролировать вирус. У этих кошек возникает стойкая виремия после первого проникновения вируса в кровоток. 85% таких кошек умирают в течение трех с половиной лет, и средняя продолжительность жизни составляет 21 месяц.
Клинические признаки

Дегенеративные болезни
Данные заболевания являются следствием инфицирования стволовых кроветворных клеток. Поражению подвергаются красные и белые тельца, а также тромбоциты. В результате развиваются анемии, формы псевдопанлейкопении и нарушения коагуляции.

Иммунодепрессия
Иммунная система подавлена. Ослаблены синтез антител, функции макрофагов и цитотоксические способности. В связи с этим наблюдается появление вторичных инфекций. Не обнаружено связи между инфекцией ВЛК и вирусом иммунодефицита кошек, но клинические проявления усиливаются. Признано, что большинство кошек умирает скорее именно от вторичных инфекций, чем от опухолевых форм. Таким образом, симптоматическое лечение от вторичных инфекций жизненно важно для кошек с таким типом поражения.

Опухолевые формы
Наиболее частыми новообразованиями являются лимфосаркомы. Существует несколько форм таких опухолей: опухоли пищеварительного тракта (у пожилых кошек), тимусные (у кошек моложе 4 лет), многоочаговые или другие. Лейкозы более редки, но они могут затронуть все стволовые клетки.

Нарушения репродуктивной функции
Кошки, находящиеся в состоянии виремии, транспланцентарным путем заражают эмбрионы, вызывая их гибель и становясь бесплодными. Если котята не умирают в матке, то рождаются с виремией и быстро погибают.

Другие формы
Наблюдаются невропатии с анизокарией или парезами.
Наконец, иммунные расстройства могут проявляться в форме выработки иммунных комплексов, что приводит к разнообразным последствиям (гломерулонефрит, гемолитическая анемия…)
Характер поражений

Характер поражений напрямую связан с рассмотренными выше формами. Картина часто осложняется вследствие вторичных инфекций. В литературе имеются данные о том, что увеличение среднего объема эритроцитов при анемии вне зависимости от того, является она регенеративной или нет, очень напоминает инфекцию ВЛК. Вместе с тем, количество лимфоцитов у кошек в состоянии виремии зачастую снижается.
Диагностика

Клиника
Вирус ВЛК провоцирует развитие самых разнообразных заболеваний (различных инфекций, нарушений функции воспроизводства, лимфосарком, анемии, нефрита…), ни одно из которых не является специфичным. Поэтому лейкемию кошек необходимо подозревать при наличии любой хронической или рецидивирующей болезни.

Дополнительные исследования
Вследствие того, что у кошек, сумевших справиться с ВЛК, антитела в крови могут присутствовать в течение длительного времени, тогда как у инфицированных кошек иммунная реакция нарушена, использование серологических анализов в качестве средства диагностики или выявления заболевания исключается.

Дополнительные исследования основаны на обнаружении капсидного белка р27, который в избытке вырабатывается во время фазы размножения ВЛК и вследствие этого выделяется в кровь. Антиген р27 легко обнаруживается в сыворотке, плазме или цельной крови с использованием наборов для экспресс-диагностики, основанных на методе ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуномиграции.

Это превосходные инструменты с очень хорошей чувствительностью и избирательностью при условии точного соблюдения указаний изготовителя (температура реактивов, фазы промывки) во время их использования. Наиболее достоверные результаты получают при исследовании сыворотки. Тем не менее, при оценке результатов нужно принимать во внимание патофизиологические данные (преходящая виремия…), а также возможные ограничения используемых тестов (опасность ложноположительного результата, когда тесты проводят без подозрения на эпизоотию или клинику по причине слишком низкого уровня распространения заболевания).

Поэтому следует без колебаний повторить показавшийся сомнительным тест с использованием вновь взятого образца и запросить дополнительный лабораторный анализ (иммунофлуоресцентный, ПЦР) для подтверждения положительного теста, в частности, если по его результатам принимается решение о судьбе животного (возможность эвтаназии). К дополнительным анализам требуется прибегать также в случае отрицательного результата при наличии у кошки подозрительных клинических признаков.

В любом случае, кошку можно считать не зараженной только при наличии двух отрицательных результатов обследований, выполненных с 16-недельным интервалом. Признать кошку находящейся в состоянии стойкой виремии можно только в том случае, если два теста, выполненные с промежутком в 16 недель, дадут положительный результат.

Лабораторная диагностика
Иммунофлуоресцентный анализ является лабораторным методом, позволяющим обнаружить белок р27 внутри гранулоцитов и тромбоцитов, если для исследования используют свежие образцы цельной крови. Метод способен выявить слабую виремию (когда антигены присутствуют в основном внутри клеток), не поддающуюся обнаружению методиками ИФА. Он также может быть выполнен на образце костного мозга.

ПЦР позволяет обнаружить часть генетического материала ВЛК. При латентной форме инфекции возможен ложноотрицательный результат при анализе крови и положительный – при тестировании образцов костного мозга. Вне зависимости от применяемых методов диагностики признать у кошки наличие стойкой виремии следует только в случае получения двух положительных результатов. Первый положительный результат предполагает изоляцию животного в ожидании окончательных результатов.

При отсутствии тяжелых симптомов усыплять кошку с подтвержденным диагнозом нет необходимости. Как альтернативу следует рассмотреть возможность ее окончательной изоляции от других кошек группы или передачу новому владельцу, у которого кошек нет.
Лечение

Более 80% кошек, зараженных вирусом лейкемии, погибают от последствий иммунодепрессии. Это обстоятельство свидетельствует в пользу симптоматического лечения животных, которое позволит в большинстве случаев продлить больным лейкемией кошкам жизнь с обеспечением ее хорошего качества. Лечение включает главным образом антибиотикотерапию, направленную на борьбу с вторичными микробными инфекциями, и, при необходимости, переливания крови для лечения анемии.

К продаже разрешен омега-интерферон для кошек, который также можно применять при данном заболевании. Его применение может снизить интенсивность проявления симптомов и продлить жизнь животных. С разной степенью успеха применялись антивирусные препараты (аналоги нуклеозидов), предназначенные для человека, такие, как AZT.
Профилактика

Борьба с распространением инфекции
Изоляция котят в возрасте до 16 недель (особенно чувствительных к первичным инфекциям) является одним из эффективных методов профилактики. Физически изолировать кошек, что могло бы снизить риск заражения в доме, где содержится несколько животных (некоторые — со стойкой виремией), все-таки задача трудновыполнимая. Такой план борьбы с вирусом может быть реализован в питомниках и других местах массового содержания кошек.

Они основаны на повторении (каждые 12-14 недель) тестов по выявлению заболевания в сочетании с немедленной изоляцией кошек, для которых получены положительные результаты. Вместе содержат только тех кошек, чьи результаты в 2 последовательных тестах признаны отрицательными. Недостатком такого плана ликвидации инфекции является то, что при этом будут изолированы и кошки с преходящей виремией. При поступлении нового животного необходимо также выполнить два теста с интервалом в 16 недель и в течение этого времени содержать животное в карантине.

Санитарные мероприятия
Вирус чувствителен к высокой температуре, мылу и прочим обычным дезинфицирующим средствам, поэтому необходимо регулярно стирать подстилки и чистить миски животных.

Вакцинация
Особенности биологического цикла ретровирусов и опасность возврата к вирулентности делают трудноосуществимым использование вакцин на основе живого ослабленного штамма. Существует три вида вакцин: цельноклеточные на основе инактивированного вируса, субъединичные и на основе живого возбудителя, неспособного к размножению [рекомбинантные]. Вакцины на основе инактивированного вируса состоят из цельных вирусов, выращенных в клеточной культуре.

Субъединичные вакцины готовят либо из инактивированного фильтрата (содержащего, в частности, белок gp70) инфицированных клеток, либо из иммуногенного белка (р45 негликозированная фракция белка gp70), создаваемого с применением генной инженерии. Эти две группы вакцин применяют совместно с каким-либо стимулятором иммунитета.

В вакцине на основе живого носителя использован ослабленный штамм оспы канареек (canarypoxvirus), в геном которого встроены гены gag (кодирующий белки капсида) и env (кодирующий гликопротеин оболочки gp70) вируса ВЛК. После инъекции вирус инфицирует клетки кошки, но он не способен в них размножаться. Тем не менее, он вызывает выработку антител против ВЛК, которые эндогенным путем попадают на поверхность клеток вследствие гистонесовместимости, обеспечивающей иммунизацию клетки-хозяина.

Эту вакцину применяют без адъювантов. Основанная на живой культуре, она позволяет одновременно инициировать выработку гуморального и клеточного иммунитета. Вне зависимости от типа вакцины в программу вакцинации для котят в возрасте 8-9 недель включены две инъекции, с интервалом 3-4 недели, с последующим ежегодным повторением. Вакцинация является эффективной мерой и позволяет защитить большинство животных от стойкой виремии.

Прививка для кошек от лейкоза с латентной инфекцией или со стойкой виремией не приводит к каким-либо нежелательным последствиям. Тем не менее, рекомендовано (особенно, если вакцинацию впервые делают взрослым кошкам) убедиться в том, что животные не заражены, поскольку вакцинация кошек со стойкой виремией будет бесполезной и создаст ложное впечатление защищенности. Напротив, вакцинацию от других заболеваний следует продолжать с тем, чтобы возместить иммунный дефицит у кошек со стойкой виремией.

Вакцинация может помочь искоренить ВЛК в популяции кошек, но при этом не следует забывать об элементарных правилах санитарной профилактики.