Индукторы интерферона при раке

АМИКСИН ® — современное противовирусное и иммуностимулирующее средство; способствует образованию в организме четырех видов интерферонов (альфа, бета, гамма и лямбда).

Узнать подробнее про АМИКСИН ® …

Противовирусные препараты с иммуностимулирующей активностью могут рекомендоваться как при лечении гриппа, так и других ОРВИ. С их помощью можно сократить сроки болезни и предотвратить развитие осложнений.

Прием противовирусного препарата АМИКСИН ® возможен на любой стадии простуды и гриппа по рекомендации врача.

Как принимать препарат?

В сезон простуды и гриппа прием противовирусных и иммуномодулирующих препаратов помогает снизить вероятность заболевания.

АМИКСИН ® — современный противовирусный и иммуномодулирующий препарат, используемый в комплексной терапии целого ряда вирусных инфекционных заболеваний, в том числе гриппа, ОРВИ и герпеса.

Подробнее о препарате…

Иммуномодулирующие препараты — одни из важных составляющих комплексной терапии гриппа и других ОРВИ.

Функции и механизм действия интерферона в человеческом организме

Интерферон — это белковая молекула, которая обеспечивает противовирусный иммунитет. При этом она обладает неспецифической активностью, то есть действуют не на возбудителя какого-то конкретного заболевания, а на все вирусные частицы в целом. Если сказать обобщенно, то интерферон — универсальный защитник организма, который начинает действовать еще до того, как в работу включатся остальные звенья иммунитета [1] . Препараты интерферона применяются даже в терапии онкологии: они подавляют опухолевый рост.

Клетки вырабатывают этот защитный белок в ответ на действие вирусов, бактерий, опухолевых клеток или продуктов их метаболизма. Стимулировать их выработку могут и лекарственные препараты — индукторы интерферона. Молекулы последних, попадая в кровь и межклеточную жидкость, связываются с рецепторами зараженных или поврежденных клеток. Они запускают сложный каскад реакций, приводящих к образованию специфических белков. В результате клетка перестает воспроизводить вирусные частицы, расщепляет их генетическую структуру, а поверхность этой клетки становится менее проницаемой для внутриклеточных паразитов.

Кроме действия на сами зараженные клетки, интерфероны стимулируют активность других звеньев иммунитета, контролируют воспалительную реакцию [2] и даже могут защитить организм от опухолей. Это свойство активно изучают и уже используют для борьбы с некоторыми видами рака [3] .

Молекулы интерферона отличаются между собой по генетической структуре, типу клеточных рецепторов, на которые они действуют, даже по участкам ДНК, которые кодируют их состав. Все интерфероны делят на 3 типа.

• К первому типу относят альфа-интерферон, который имеет 13 различных структурных вариантов, а также бета-, каппа-, эпсилон- и омега-.
• Второй тип представлен только одним типом, гамма-интерфероном.
• Относительно недавно, в 2002 году, был открыт и третий тип молекул, лямбда-. Это отдельное семейство интерферонов, которое отличается от всех предыдущих генетическим строением и даже типом рецепторов, с которыми они взаимодействуют. Но по своей биологической активности лямбда-интерфероны очень похожи на первый тип [4] .

Не стоит относиться к интерферонам как к панацее от всех бед. Во-первых, некоторые вирусы могут подавлять образование специфических белков внутри зараженных клеток, что значительно снижает эффективность противовирусной защиты.

Поэтому прежде чем начинать лечение препаратами интерферона, нужно внимательно изучить пользу и возможный вред от их приема.

Лекарственные средства на основе интерферона доказали свою эффективность [5] в лечении широкого круга заболеваний: герпетических инфекций, ВПЧ, острых и хронических форм вирусного гепатита, рассеянного склероза, волчанки, гриппа и многих других вирусных и бактериальных инфекций. Применяют интерферон и при терапии онкологических заболеваний, а также СПИДа. И это притом, что по меркам медицины открыли его совсем недавно. Это произошло в 1957 году при проведении опытов на мышах. Ученые обратили внимание, что животные, заразившиеся одним вирусом, становились невосприимчивы к другому вирусному заболеванию. Это явление было названо интерференцией, а вещества, которые ему способствовали — интерферонами. Оказалось, что интерфероны вырабатываются не только у мышей, но и у всех млекопитающих, в том числе у человека. Началось изучение возможности промышленного производства веществ, обладающих противовирусным эффектом.

Однако долгое время применение интерферонов было ограничено из-за несовершенства процедуры их получения. Выделять это вещество из крови человека-донора было сложно, дорого и неэффективно.

В 1980 году в Японии впервые использовали для производства интерферона специально выращенную культуру лимфобластных клеток. А в 1981 году в США вместо клеток человека использовали культуру дрожжевых грибков. С помощью генной инженерии в геном ввели ген, который кодирует производство молекулы интерферона. Это позволило значительно упростить производство препарата [8] .

По способу производства существует четыре основных разновидности этого препарата: лейкоцитарный, лимфобластоидный, рекомбинантный и пегилированный.

После получения такой препарат очищают и концентрируют. В него могут входить все виды интерферонов и другие биологически активные вещества. Это одновременно и плюс, и минус. Преимущество такого препарата — его высокий потенциал биологического действия. Недостаток — высокая вероятность побочных эффектов при внутримышечном введении.

Лимфобластоидный интерферон получают не от человека-донора, а из культуры лимфобластных клеток, которые также обрабатывают веществами, стимулирующими иммунный ответ. Такие препараты содержат определенное соотношение различных видов интерферона и не так часто вызывают побочные эффекты.

Пегилированные, или ПЭГ-интерфероны — это рекомбинантные белковые молекулы, соединенные с полиэтиленгликолем. Такое соединение увеличило срок действия интерферона в организме.

ПЭГ растворим в воде, не вступает в биологические реакции в организме и не вызывает иммунного ответа. При присоединении ПЭГ молекула интерферона значительно увеличивается в размерах. А это, в свою очередь, увеличивает период полувыведения препарата.

Объединить интерфероны в однородные группы по методу получения, формам выпуска и показаниям не получится. Каждый препарат имеет свои особенности применения, эффективность при определенных заболеваниях. В зависимости от степени очистки и других факторов какие-то препараты с одним и тем же видом иммуноглобулина могут применяться только местно, а какие-то можно использовать в виде инъекций.

Поэтому при выборе препарата интерферона стоит ориентироваться не только на общую характеристику группы веществ, но в первую очередь на рекомендации врача и инструкцию по применению конкретного препарата.

Интерферон в виде инъекций применяют при системных заболеваниях, таких как гепатит, опухоли или рассеянный склероз. Препарат в виде капель в нос подходит для лечения риносинуситов и профилактики ОРВИ. Капли в глаза помогут при конъюнктивите. Суппозитории можно использовать при многих заболеваниях, в том числе у детей. А гель подходит для смазывания носа или кожи.

Интерфероны защищают организм от вирусов, бактерий и опухолевых клеток. Они обладают сложным биологическим действием. Но современная медицина научилась создавать аналогичные вещества и использовать их. Однако подбор подходящего препарата — задача, которую может решить только врач.

Преимущества этого препарата — максимум выработки интерферона уже в первые сутки от начала приема и активация четырех видов интерферонов. Увеличение концентрации интерферонов в отдельных органах может достигаться уже через 4 часа.

Все индукторы интерферона обладают индивидуальными характеристиками, показаниями и противопоказаниями. Поэтому препарат нужно выбирать внимательно, только после прочтения инструкции. С особой осторожностью нужно подходить к выбору лекарства, если его нужно принимать детям. Для детей существуют отдельные формы выпуска.

И, конечно, никогда нельзя заниматься самолечением. Любые препараты нужно принимать только по согласованию с врачом.

На долю гриппа и ОРВИ приходится до 90–95 % всех инфекционных заболеваний. Ежегодно в мире от данных респираторных заболеваний страдает до 500 млн человек, при этом для 1,5-2 млн человек грипп и ОРВИ заканчиваются летальным исходом. Эти цифры огромные и ужасающие, однако очень наглядно показывающие, насколько важно осуществлять профилактику, а также правильное и своевременное лечение респираторных вирусных инфекций. Если же вспомнить о том, что очень часто мы игнорируем симптомы ОРВИ, перенося болезнь на ногах и не обращаясь за медицинской помощью, то становится ясным, что реальные показатели заболеваемости выше статистических примерно в 2,5-3 раза. Поэтому закономерно, что в преддверии очередного респираторного сезона на XIV Конгрессе терапевтов врачебное сообщество не могло не обсудить актуальную проблему человечества — профилактику респираторных вирусных инфекций и минимизацию рисков развития осложнений этих заболеваний.

Среди препаратов, которые назначают врачи для профилактики гриппа и ОРВИ, лидирующее место занимают индукторы интерферонов (ИФН), однако у некоторых пациентов существует настороженное к ним отношение.

Обобщая мнение своих коллег, в продолжение обсуждения высказался заведующий отделением иммунопатологии Института иммунологии доктор медицинских наук, профессор Андрец Евгеньевич Шульженко.

Он напомнил, что интерфероны влияют на все звенья процесса борьбы с вирусной инфекцией:

— Интерфероны способны уничтожать вирусы,воздействуя на все звенья вирусного процесса: увеличивают клеточную цитотоксичность (способность уничтожать вирус), синтез антител (АТ) и интерлейкинов (цитокины иммунитета), фагоцитарную активность (активация врождённого иммунитета). Преимуществами индукторов интерферонов перед препаратами ИФН прежде всего является их способность к стимуляции синтеза собственного интерферона и относительно длительная его циркуляция, благодаря которым исчезает необходимость вводить интерферон извне, что нивелирует развитие побочных реакций нативных ИФН и удешевляет процесс терапии. Помимо этого, синтез собственных ИФН сбалансирован и контролируется внутренними механизмами ограничения выработки ИФН. При всей схожести своего описания препараты этой группы абсолютно разные в пролонгации и в последствиях своего индуктивного ответа, что необходимо учитывать при назначении того или иного индуктора. Кроме того, основные моменты, на которые следует обращать внимание при назначении препаратов данной группы, — это цель назначения, обоснованность применения на разных стадиях инфекционного процесса, а также эффективность и безопасность лечения.

Отвечая на вопросы из зала относительно того, оправдана ли теория о том, что необходимо сначала вводить интерфероны, а затем, ориентируясь на достигнутый эффект, присоединять индукторы, Андрей Евгеньевич Шульженкопояснил:

Своим мнением обиндукторах интерферонов в качестве представителя врачей терапевтического профиля поделился заведующий кафедрой госпитальной терапии ММА им. И. М. Сеченова доктор медицинских наук, профессор Леонид Иванович Дворецкий.

Если препарат вышел на рынок, то это значит,что он прошёл все необходимые исследования безопасности.

В поддержку индукторов интерферонов выступил врач-кардиолог НМИЦ профилактической медицины доктор медицинских наук Михаил Михайлович Лукьянов.

В рамках своего доклада он сообщил:

— Важно отметить, что проблемы лечения респираторных вирусных заболеваний необходимо обсуждать коллегиально, с привлечением врачей разных специальностей, ведь в организме всё взаимосвязано.

Естественно, когда речь идёт о лечении ОРВИ и гриппа у пациента с сердечно-сосудистой или другой патологией, то встаёт вопрос о комплексной терапии.Ведь помимо специфических препаратов, которые пациент принимает в связи с основным заболеванием, ему необходимы средствадля профилактики респираторных вирусных инфекций, так как в период высокой эпидемической активности ОРВИ и гриппа увеличиваются и показатели смертности, связанные с обострением течения хронических заболеваний.

Своим опытом работы с препаратом поделилась врач-педиатр Марина Сергеевна Савенкова, доктор медицинских наук, профессор РНИМУ.

Конечно же, значительное внимание участники круглого стола уделили одной из основных тем, которая постоянно муссируется в средствах массовой информации и социальных сетях,—безопасности препарата.

О проведённом огромном пласте исследований по безопасности рассказала заведующая лабораторией фармакологии репродуктивной системы НИИ фармакологии и регенеративной медицины им. Е. Д. Гольдберга Томского НИМЦ РАН профессор Татьяна Геннадьевна Боровская.

По вопросу эффективности и безопасности препарата также выступила врач — клинический фармаколог доктор медицинских наук, профессор Галина Григорьевна Кетова.

В завершение круглого стола из зала прозвучал последний вопрос:

— Как бы вы охарактеризовали разбалансировку интересов РФ и Запада? В РФ наблюдается высокая популярность индукторов интерферонов в терапии и профилактике ОРВИ и гриппа, но в Америке и западноевропейских странах к ним нет такого интереса.

На этот вопрос ответил профессор Андрей Евгеньевич Шульженко:

— Зарубежные коллеги очень серьёзно занимаются исследованиями препаратов, воздействующих на иммунную систему, в частности индукторами интерферонов.

Главное отличие в том, что фармакологи и учёные из Европы и США уже длительное время находятся в поиске препаратов, способных обеспечить точечное воздействие на иммунитет ( конкретный рецептор, фермент, субстрат и т. д.). Но они ищут препараты с абсолютно точной доказательной базой. Индукторы же интерферонов, сколько бы мы ни говорили об их положительной стороне, не имеют доказательной базы на мировом уровне, потому что не соответствуют тем стандартам, которые сегодня существуют в Европе и США.

На этой уверенной ноте круглый стол, вызвавший столь бурный интерес врачей самых разных специальностей, завершился, обеспечив всех исчерпывающей информацией о возможностях и перспективах использования индукторов интерферонов.

• Здоровье
• Статьи
• Медицина
• Форум

• Rating
• Full Article
• Comments

Лечение человеческим амнионпродуцируемым или лейкоцитарным интерфероном больных острой лейкемией и различными солидными злокачественными опухолями в поздней стадии оказалось благоприятным; отмечено ослабление симптомов заболевания, нормализация гемопоэза и ряда других физиологических показателей, активация иммунологической реактивности организма и т. д. Отсутствие адекватных контролей не позволило авторам сделать вывод об эффективности проводимой терапии и лишь свидетельствовало о прекрасной переносимости и практической нетоксичности препаратов гомологичного интерферона. К более определенному заключению относительно эффективности интерферона при лечении больных лейкемией приходят на основании своих исследований Фалкофф, наблюдавшие явное увеличение продолжительности жизни у 7 из 28 леченых больных.

Можно допустить, что человеческий интерферон является таким же выраженным противоопухолевым агентом, как и мышиный, однако исследователи полагают, что полное перенесение экспериментальных данных в клинику еще преждевременно. По мнению Кесселя, диффузные, не капсулированные злокачественные новообразования типа лейкемий могут рассасываться в процессе лечения интерфероном; подобные же надежды в отношении крупных солидных опухолей представляются менее оправданными, поскольку возникают трудности, связанные с доступом интерферона к клеткам-мишеням (внутривенные инъекции частично решают эту проблему) и выведением продуктов распада опухоли. В связи с этим, по мнению исследователей, использованию интерферона в онкологической клинике должно предшествовать хирургическое удаление основной массы опухоли с последующим уничтожением ее остатков и (или) метастазов бластомы с помощью лечения интерфероном.

Подводя итог рассмотренного аспекта клинического использования интерферона, можно сказать, что только дальнейшие тщательные исследования на больных со злокачественными новообразованиями определят перспективы применения его в онкологической клинике.

Другой аспект использования системы интерферона в клинической практике основан на достаточно утвердившихся представлениях о том, что степень продукции интерферона клетками и тканями в ответ на внесение индуктора интерфероногенеза свидетельствует о реактивности целостного организма или отдельных его систем.

Клиницистам хорошо известно, насколько прогноз течения заболеваний, в частности онкологических, зависит от динамики клеточно-гуморальных показателей иммунитета. Чем быстрее восстанавливается у больного реактивность лимфоцитов и чем меньшая концентрация блокирующих антител сохраняется в сыворотке крови, тем больше оснований не опасаться быстрого рецидивирования и метастазирования опухоли. В связи с этим, а также с известной ограниченностью методов оценки клеточного иммунитета в условиях клиники внимание исследователей привлекла предложенная В. Д. Соловьевым и Т. А. Бектемировым интерфероновая реакция лейкоцитов (ИРЛ), основанная на известной способности суспензий человеческих лейкоцитов продуцировать интерферон в ответ на инфицирование их in vitro различными индукторами.

Преимущество этого метода состоит в том, что он позволяет провести точный количественный учет способности лейкоцитов к продукции белка (интерферона) и тем самым определить уровень физиологической активности лимфоидной ткани, от которой во многом зависит реактивность целостного организма. Большой вклад в исследование клинического значения ИРЛ внесли работы В. Д. Соловьева, Г. П. Шульцева, Т. А. Бектемирова и др. Исследователями, в частности, было установлено, что у больных ревматизмом, ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, бронхиальной астмой, туберкулезом легких, лимфогранулематозом выработка интерферона лейкоцитами ниже нормы в 10 и более раз.

В. Д. Соловьев и др., Т. А. Бектемиров, Г. П. Шульцев и др. установили, что показатели лейкоцитарного интерферона претерпевают существенные изменения при внутренних заболеваниях с резко измененной реактивностью. Сказанное в большой мере относится к эндокринным заболеваниям, поскольку гормоны, регулируя различные процессы обмена веществ, оказывают существенное влияние на функциональное состояние тканей и реактивность организма в целом. Исследованиями В. Р. Клячко и др. установлено, что нарушение обмена веществ, обусловленное как гипер-, так и гипофункцией эндокринных желез, приводит к понижению образования интерферона лейкоцитами.

Многочисленные данные, полученные разными исследователями, свидетельствуют о том, что по мере улучшения состояния больных, подвергающихся лечению, возрастают титры интерферона, продуцируемого их лейкоцитами; ухудшение состояния совпадает с уменьшением титров интерферона. Сказанное позволило исследователям рекомендовать ИРЛ не только для оценки специфической иммунореактивности, но и для определения неспецифической реактивности организма; Г. П. Шульцев и др. не исключают, что она может быть использована и для оценки эффективности лечения.

В наблюдениях, проведенных В. К. Винницкой на базе клиники онко-гинекологии Киевского рентген-радиологического и онкологического института МЗ УССР стремились изучить с помощью ИРЛ реактивность регионарной лимфоидной ткани онкогинекологических больных и определить пригодность этой реакции для прогностических целей. Параллельно с постановкой ИРЛ (в собственной модификации) проводилось также цитоморфологическое исследование ткани лимфатических узлов, удаленных во время оперативного лечения больных. Исследования показали, что во всех случаях пред-клинических форм рака шейки матки, а также в случаях выраженных форм заболевания шейки и тела матки отмечалась четкая корреляция между степенью выраженности клеточной реакции со стороны лимфоидно-ретикулярного аппарата лимфатических узлов и интерферон-образующей активностью выделенных из них лимфоцитов.

Следует отметить, что крайне низкая интерферон-образующая способность лимфоцитов, вплоть до полной ее потери, наблюдалась в случаях метастатического поражения исследуемых лимфатических узлов: в этих случаях титры продуцируемых интерферонов были равны нулю. При изучении функциональной активности регионарной лимфоидной ткани больных, подвергнутых комбинированному лечению (оперативное вмешательство с предшествующим облучением), имело место практически полное отсутствие реакции лимфоидной ткани на патологический очаг; клеточная инфильтрация проявлялась очень слабо, в. лимфатических узлах были выраженные очаги некроза и некробиоза, титры продуцируемого интерферона практически были равны нулю.

Обсуждая полученные данные, следует отметить, что титры продуцируемого лимфоцитами интерферона, как уже говорилось, коррелируют с клинико-морфологическими изменениями, отражающими уровень реактивности регионарной лимфоидной ткани. Хотя мы еще не располагаем данными отдаленных наблюдений больных, указанная корреляция свидетельствует о том, что ИРЛ регионарных лимфатических узлов может иметь прогностическое значение.

Подытоживая все вышесказанное, следует заключить, что система интерферона имеет немаловажное значение в жизнедеятельности клетки, в ее реакции на различного рода физиологические и экстремальные воздействия. Накопленный в настоящее время фактический материал не дает еще возможности сделать однозначные выводы относительно механизма действия интерферона и той конкретной роли, которую он играет в развитии патологического процесса вообще и злокачественной трансформации в частности, однако факт причастности этого белка к защитно-репаративным процессам клеток неоспорим.

Дальнейшие исследования на клеточном, субклеточном и молекулярном уровне помогут точнее определить механизмы участия интерферона в формировании резистентности клетки к процессу злокачественной трансформации.

Ключевые слова: двухспиральная РНК, циклоферон, интерферон, культура клеток НЕр-2, ядро, ядрышко, ДНК

Проведено цитологическое исследование интерферона, а также естественных и синтетических индукторов интерферона: лейкоцитарного человеческого интерферона, двухцепочечных низкомолекулярных РНК фагового и дрожжевого происхождения и синтетического индуктора интерферона – циклоферона, который является препаратом акридонового ряда на трансформированную линию рака гортани человека в процессе культивирования. Последний хорошо зарекомендовал себя при лечении целого ряда заболеваний различной этиологии [3]. Индукторы интерферона способны индуцировать выработку эндогенного интерферона и характеризуются низкой токсичностью, что делает их перспективными препаратами при лечении онкологических заболеваний [1,9]. При этом действие этих препаратов проявлялось на уровне нуклеинового обмена [10,14,18]. Они широко применяются в клинике, однако биологические особенности их, в частности в области влияния на генетический аппарат клеток, изучены недостаточно. Эти препараты являются перспективной группой противораковых соединений широкого спектра действия, в основном за счет индукции интерферона, к которому добавляется еще и цитотоксическое их действие [5,17].

Материал и методы

В работе использовали перевивную клеточную культуру рака гортани человека НEр-2. Клетки культивировались в среде EAGLE MEM, с добавлением глутамина и 10% бычьей сыворотки. Посевная доза 1х105 клеток/мл. Клетки представлены лабораторией U 322 INSERM “Retrovirus et maladies associees” Марсель и Институтом полиомиэлита, Москва. Монослой получали через 24 и 48 часов после начала пассирования. В часть флаконов с покровными стеклами через 24 часа после посева вводили Na+-дс-РНК, в другую _ Ca2+-дс-РНК , в третью _ ничего не добавляли (контроль). Стекла изымали через 24 часа (контроль), 48 и 72 часа. В часть флаконов через 48 часов от начала посева вводили циклоферон в концентрации 12,5мкг/мл, в другую – вводили стандартный нативный интерферон в дозе 1000 Ед/мл, в третью (контроль) – ничего не добавляли. Покровные стекла из флаконов изымали через 48 часов (контроль), 72 и 96 часов от начала посева. Все препараты фиксировали в 96% этиловом спирте в течение 30 минут, а затем окрашивали фуксином по Фельгену на ДНК в течение 1,5 часов после гидролиза в 5н НС1 при 220С в течение 60 минут [7]. Количественное определение комплекса ДНК-фуксин, площади и периметра ядра и каждого из ядрышек в отдельности и суммарно производили на микроскопе-фотометре SMP-05 (Opton), оснащенном компьютером и видеокамерой, телевизионным методом на максимуме поглощения (l 575 нм). Перед сканированием изображения ядер и ядрышек (с вовлечением околоядрышкового хроматина) оконтуривали (объектив:100/1,30). В качестве эталона ДНК использовали лимфоциты периферической крови доноров, выявляли распределение ядер клеток культуры по плоидности (%) и определяли соотношение эу- и анэуплоидных клеток. Значения исследованных параметров выражали в условных единицах. Определяли плотность монослоя (число клеток, приходящихся на единицу площади) на всех сроках культивирования и при действии дс-РНК, интерферона и циклоферона параллельно, количество мертвых клеток среди них (в %), пролиферативную активность клеток на разных сроках культивирования (в %), среднее число ядрышек в ядрах (в %) и распределение ядер по числу ядрышек в них (в %) [6]. Достоверность различий средних значений оценивали по t - критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Как видно из табл. 1, плотность монослоя культуры клеток НЕр-2 в контроле в течение трех суток культивирования увеличивается в среднем на 11%.

Таблица 1

Популяционные показатели культуры НЕр-2 в контроле и при воздействии на нее Na+- и Ca2+-дс-РНК, циклоферона и интерферона

При изучении особенностей клеточной реакции на действие различных дс-РНК, циклоферона и интерферона оказалось, что при введении Na+-дс-РНК плотность монослоя уменьшается более чем в три раза, при введении Ca2+ -дс-РНК через 48 часов культивирования число клеток на единицу площади монослоя уменьшается примерно на 14%, а к 72 часам восстанавливается до показателей в контроле [6]. При действии интерферона и циклоферона к 96 часам она уменьшается на 20 и 34% соответственно. Значения этого параметра определяются интенсивностью размножения клеток и их гибелью. Пролиферативная активность клеток в контроле в течение трех суток культивирования возрастает на 35%, затем уменьшается в среднем на 27%, в то время как при действии всех испытуемых биологически активных веществ митотическая активность клеток резко подавляется, что особенно выражено в культуре, обработанной Na+-дс-РНК, интерфероном и циклофероном. Этo свидетельствуeт об ингибирующем воздействии этих веществ на пролиферативную активность клеток. В контроле число мертвых клеток в процессе культивирования уменьшается, в то время как при действии дс-РНК число их увеличивается примерно в два раза, а при действии циклоферона и интерферона процент мертвых клеток увеличивается в десятки раз (табл.1). В контроле среднее число ядрышек на ядро не меняется,тогда как при действии обоих видов дс-РНК уменьшается незначительно, а при действии циклоферона и интерферона уменьшается на 33 и 75% соответственно. Снижение среднего количества ядрышек связано с изменением характера распределения в популяции ядер по числу ядрышек в сторону увеличения ядер с малым их числом. Так, во всех экспериментах частично или полностью исчезают ядра с 4 и 5 ядрышками. При этом изменяется и распределение клеток по числу ядрышек в них (рис.1): так если в контроле

Рис. 1. Распределение ядер клеток культуры НEр-2 по числу ядрышек в контроле и при действии

дс-РНК (I), интерферона и циклоферона (II).

I ряд: черные столбики – контроль; заштрихованные _ Na+-дс-РНК; белые _ Ca 2+ -дс-РНК;

II ряд: черные столбики – контроль; заштрихованные – интерферон; белые – циклоферон

1-, 2-ядрышковые клетки составляют примерно 42%, то при введении дс-РНК и циклоферона увеличиваются в среднем на 58-64%, а при действии интерферона – на 67-127%. Если многоядрышковость рассматривать как показатель функциональной активности клеток, то эти данные свидетельствуют о подавлении активности клеток под действием исследуемых веществ, наиболее выраженном при введении интерферона, что согласуется со снижением содержания ДНК в ядрышке и зоне околоядрышкового хроматина и уменьшением поверхности ядрышек во всех случаях, однако наиболее выраженном при действии интерферона. Эти данные хорошо согласуются с результатами исследований А.М. Малышевой и сотрудников, в которых применялся метод определения активности ядрышковых организаторов и пролиферативный потенциал гепатоцитов при изучении действия биологически активных препаратов для лечения токсического цирроза печени [8]. По мнению авторов, этот метод объективно отражает степень напряженности рибосомального синтеза и пролиферативной активности клеток. Определение среднего количества ДНК на ядро выявило его увеличение в течение четырех суток культивирования в среднем на 60%, в то время как при действии испытуемых биологически активных веществ содержание ДНК в ядрах уменьшается с разной степенью интенсивности: наиболее сильно – на 150% уменьшается содержание ДНК при действии Na+-дс-РНК и Ca2+-дс-РНК, а меньше всего изменяется при действии циклоферона и интерферона (табл.2). При этом содержание ДНК в ядрышках и околоядрышковом хроматине меняется незначительно как в процессе культивирования, так и при действии биологически активных веществ.

Таблица 2

Динамика содержания ДНК (ед.плоидн.), площадь и периметр ядер и ядрышек в

процессе культивирования клеток перевивной линии НЕр-2 в контроле и при воздействии на нее Na+- и Ca2+-дс- РНК, циклоферона и интерферона

Важно отметить,что распределение ядер по плоидности в контроле и при действии интерферона меняется незначительно, в то время как при действии Ca2+-дс-РНК и циклоферона число полиплоидных ядер культуры НЕр-2 увеличивается в среднем в 1,5-2 раза, в основном за счет значительного возрастания количества тетраплоидных ядер и почти полного исчезновения октаплоидных ядер. Наряду с этим во всех группах обнаруживается большое число ядер с “промежуточными” значениями количества ДНК, в частности между 2с и 4с, что скорее всего обусловлено прохождением клетками S-фазы клеточного цикла или даже задержкой во второй ее половине. Возможно, появление клеток со значениями ДНК между 4с и 8с является результатом блока 4с клеток в G2 - фазе или прохождения фазы синтеза, но уже в следующем цикле без завершения предыдущего делением, о чем свидетельствует наличие в популяциях 8с клеток (рис.2). Учитывая, что объектом исследования были клетки трансформированной культуры НЕр-2, высокий процент анэуплоидных клеток как в контроле, так и в опытах можно объяснить выраженной вариабельностью клеток данной культуры, число хромосом которой колеблется вокруг 77 [12,16]. Полученные результаты действия биологически активных веществ свидетельствуют, что все они вызывают уменьшение числа анэуплоидных клеток, наиболее выраженное при действии Ca2+-дс-РНК и циклоферона (в среднем в 2-3 раза). Блок клеток в G2-фазе и формирование полиплоидных клеток при одновременном снижении пролиферативной активности обычно связывают с переходом клеток к дифференцировочным процессам.

Рис. 2. Распределение ядер клеток культуры НEр-2 по плоидности в контроле и при действии

дс-РНК (I), интерферона и циклоферона (II).

Остальные обозначения те же, что к рис. 1

Таким образом, полученные результаты говорят об ингибирующем в целом воздействии испытанных естественных и синтетических индукторов интерферона, а также лейкоцитарного человеческого интерферона на пролиферацию и другие стороны жизнедеятельности культуры клеток НEр-2 и демонстрируют различную степень выраженности этих сдвигов, что хорошо согласуется с литературными данными о подавлении пролиферативной активности клеток при действии интерферона и циклоферона на клетки аденокарциномы и лимфобластомы человека в культуре [2,11,17]. Об этом свидетельствуют и данные об уменьшении площади ядрышек во всех исследованных случаях, что также согласуется с литературными данными о том, что ядрышки являются возможным локусом для регуляции пролиферации и дифференцировки клеток [4,13,15].

Несмотря на отсутствие знаний о многих звеньях в цепи молекулярных событий, вовлекаемых в процессы запуска пролиферации и дифференцировки под действием индукторов интерферона и человеческого интерферона, наиболее общие процессы реализации этих программ в первом приближении могут быть представлены в следующей последовательности: под влиянием препаратов происходит активация митохондриальных и цитоплазматических ферментных систем, в том числе активируются внутриклеточные мембранные ферменты – циклазы, которые обуславливают накопление в клетках циклического аденинмонофосфата (цАМФ) и циклического гуанинмонофосфата (цГМФ). Последние активируют ряд цАМФ- и цГМФ-зависимых протеинкиназ, которые в свою очередь запускают важнейшие для клеток метаболические процессы, такие как рост, размножение и дифференцировка.

Следовательно, можно заключить, что индукторы интерферона – вещества природного или синтетического происхождения, способные индуцировать в организме человека продукцию эндогенного интерферона, обладающего определенным преимуществом перед препаратами экзогенного интерферона: при введении в организм препаратов – интерфероногенов вырабатывается интерферон, не обладающий антигенностью, не возникает негативных эффектов, присущих препаратам экзогенного интерферона. Синтез индуцированного интерферона в организме сбалансирован и подвергается контрольно-регуляторным механизмам, обеспечивающим защиту организма от пресыщения интерфероном. Однократное введение индукторов интерферона обеспечивает относительно длительную циркуляцию эндогенного интерферона.

С медицинской точки зрения все вышеперечисленные препараты, подавляя размножение и стимулируя дифференцировку клеток, тем самым понижают уровень злокачественности популяции в целом.