Циклин д1 при раке молочной железы

Рак молочной железы (РМЖ) в структуре онкологической заболеваемости женщин занимает 1-е место. Заболеваемость РМЖ с каждым годом неуклонно растет на 1–2%, ежегодно в мире регистрируют более 1 млн новых случаев [1]. В настоящее время установлено, что РМЖ является гетерогенным заболеванием, поэтому успехи лечения и прогноза РМЖ напрямую зависят от правильной и своевременной морфологической, иммуногистохимической, молекулярно-генетической диагностики данного заболевания. В то время как таргетные методы лечения доступны для пациентов с РМЖ, у которых опухоли экспрессируют эстрогеновые и прогестероновые рецепторы или имеется гиперэкспрессия онкобелка HER-2/neu, для тройного негативного (ТН) РМЖ такого лечения не существует. ТН РМЖ составляет от 10 до 20% всех опухолей молочной железы, эти раки традиционно связывают с более плохим прогнозом течения заболевания, однако некоторые больные показывают повышенный риск смерти в течение первых 5 лет, а другие выживают в течение более 10 лет после постановки диагноза. Поиск предикторных факторов и мишеней для терапии этого подтипа РМЖ остается актуальным.

Биомаркеры клеточного цикла, в частности Циклины, ассоциированные с ними циклин-зависимые киназы и циклин-зависимые ингибиторы киназ играют важнейшую роль в развитии клеточного цикла. При опухолях различного генеза установлено, что повышенная продукция Циклина D1 способствует инициации клеточного деления, коррелирует с большей частотой метастазирования опухолей и худшей выживаемостью больных [2, 3].

Данные об уровне экспрессии Циклина D1 и его прогностическом значении в лечении РМЖ остаются противоречивыми. Часть исследований показали, что избыточная экспрессия Циклина D1 является хорошим прогностическим фактором, особенно для эстроген-позитивных пациентов, в некоторых условиях Циклин D1 может вызывать остановку роста вместо прогрессирования клеточного цикла [4, 5]. Однако другие авторы сообщают, что избыточная экспрессия Циклина D1 является предиктором плохого прогноза, Циклин D1 способствует фосфорилированию белка ретинобластомы и других субстратов путем связывания с циклин-зависимой киназой 4/6 (CDK4/6), что способствует быстрому размножению клеток [6, 7].

Цель исследования: Оценить связь уровня экспрессии Циклина D1 в ТН РМЖ с бессобытийной выживаемостью больных c учетом подтипа опухоли – c наличием признаков базального эпителия или их отсутствием.

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование проводили на парафиновых срезах операционного материала. Для выделения группы базальноподобных (БП) раков использовали ИГХ маркеры к цитокератинам 5/6 (CK5/6) и эпидермальному фактору роста 1-го типа (EGFR). БП ТН РМЖ считали раки, в клетках которых наблюдалась экспрессия СК5/6 (более 10% клеток) и/или EGFR (любое окрашивание), остальные отнесли к неклассифицированным (НК) ТН РМЖ. Чувствительность данного метода определения базальноподобных характеристик составляет 80% и 100% специфичности для базально-подобного подтипа [8]. Для характеристики экспрессии Циклина D1 вычисляли долю клеток с окрашенными ядрами в процентах от общего количества опухолевых клеток. Подсчет проводили полуколичественным методом не менее чем в 10 случайных полях зрения при увеличении х200. ИГХ-окрашивание проводили в иммуногистостейнере BenchMark ULTRA Ventana с антителами к Циклин D1 (клон EP12) Dako, 1:200; CK 5/6 (клон D5/6BH) Dako, 1:200; EGFR (клон E30) Dako, 1:50. Для статистического анализа результатов исследования использовали компьютерную программу STATISTICA 12.0 (StatSoft, США).

Результаты исследования и их обсуждение. На сегодняшний день многочисленные попытки выделения подтипов среди тройных негативных раков молочной железы привели к устойчивому выделению лишь его базальноподобного подтипа, поэтому в нашем исследовании мы ограничились выделением именно этого подтипа. На основании результатов ИГХ-исследования с антителами к СК5/6 и EGFR все ТН РМЖ распределились следующим образом: базальные характеристики были выявлены в 37 (61,7%) опухолях (БП ТН РМЖ) и отсутствовали в 23 (38,3%), последние мы отнесли к неклассифицированным (НК) ТН РМЖ (табл. 1).

Распределение ТН РМЖ в зависимости от подтипа и уровня экспрессии Циклина D1

Гормонозависимый рак

Гормонозависимый рак молочной железы - у которого на оболочках клеток (при ИГХ-анализе) обнаружили гормональные рецепторы (к эстрогенам и/или прогестинам) - то есть выявлено, что женские половые гормоны стимулируют такие клетки к делению.

Назначение лекарств, которые предотвращают взаимодействие гормонов с клетками (за счёт конкурентного взаимодействия с рецепторами или нарушая синтез гормонов) - делает клетки такого рака неделящимися.

Гормонотерапия при раке

Гормонотерапия рака молочной железы (или антигормональная терапия) назначается химиотерапевтом на основании данных иммуногистохимического (ИГХ) исследования опухоли (наличие эстроеновых и/или прогестиновых рецепторов - ER и/или PR, Her2/Neu, Ki 67), и гистологического исследования (размер опухоли и признаки поражения лимфатических узлов метастазами).

Гормоночувствительность

Чувствительность опухоли к гормонам в анализе обозначается либо в баллах (от 0 до 10) или числом (от 0 до 300) или качественно: слабо, умеренно, сильно-чувствительная опухоль. Наличие у опухоли чувствительности к гормонам - хороший признак: есть ещё один способ на неё воздействовать (кроме химиотерапии). При такой опухоли гормональная терапия помогает сдерживать её рост. Выживаемость в группе пациентов с гормон-позитивной опухолью - выше, чем при гормон-негативной опухоли.

В теории, даже если до операции у Вас не были выявлены метастазы опухоли (в костях, лёгких и печени) - гарантировать этого на 100% невозможно. Там могли быть единичные опухолевые клетки, которые просто не видны при УЗИ, рентгенографии, ОСГ, КТ, МРТ, ПЭТ этих органов. Для того, чтобы они не развивались назначается гормонотерапия.

Подробнее о принципах лечения рака молочной железы смотрите ЗДЕСЬ (для специалистов)

Гормонотерапия при раке молочной железы

Зарубежные коллеги для назначения лечения применяют систему Adjuvantonline, тесты Oncotype DX и MammaPrint. В нашей стране использование данных тестов не оплачивается страховыми компаниями, а потому их выполнение может быть организовать только за счёт пациентов (стоимость аналогична той, как если бы Вы оплачивали её за рубежом). Смысл этих тестов в том, что в ряде случаев (когда по стандартам рутинно назначается химиотерапия и гормонотерапия) по результатам генетических тестов лечение может быть изменено за счёт отказа от химиотерапии только в пользу гормонотерапии или наоборот. Так бывает в 1/4 - 1/3 случаев. Подробнее о тестах Oncotype DX и MammaPrint Вы можете прочитать ЗДЕСЬ.

Результаты всех этих тестов позволяют в 1/3 - 1/4 случаев отказаться от традиционно запланированной гормонотерапии в пользу химиотерапии и наоборот.

ENDOPREDICT (ЭНДОПРЕДИКТ)

Недавно в Санкт-Петербурге появилась компания, предлагающая выполнение аналогичного, но более дешёвого аналога анализа Онкотайп-Д-Икс или Мамма-Принт: Genext. Принцип теста аналогичен. Анализы выполняются в Мюнхене. Стоимость - 140 т.р. Для анализа необходимо передать сотруднику компании парафиновый блок опухоли и заключить договор. Тел. 8(965)080-72-77, Андрей Вдовин.

Эстрогеновые рецепторы

Эстрогеновые рецепторы обозначаются ER.

На оболочках некоторых раковых клеток имеются специальные белки - рецепторы. Они могут соединяться с женскими половыми гормонами (циркулирующими в кровотоке эстрогенами). Такое соединение стимулирует опухолевые клетки к делению.

Рецепторы прогестерона

Прогестиновые рецепторы обозначаются PR. Они тоже находятся на оболочках клеток. С ними взаимодействует прогестерон, стимулируя клетки к делению.

Раковые опухоли, возникшие у женщин до наступления менопаузы, на своих оболочках чаще не имеют таких рецепторов (не чувствительны к гормонотерапии: ER-, PR- или 0 баллов), тогда как раковые клетки у женщин в постменопаузе - чаще их имеют (чувствительны к гормонотерапии, например: ER+,PR+ или 8 баллов, 280 или 300). Женские половые гормоны синтезируются не только яичниками женщины, но и надпочечниками, жировой тканью, иногда – самой опухолью. Поэтому женские половые гормоны присутствуют в организме женщины и после прекращения у неё менструальной функции.

Гормональная терапия при раке

Механизм работы препаратов для гормонотерапии при раке молочной железы (антиэстрогенотерапия) - следующий:

Некоторые препараты для гормонотерапии (Тамоксифен, Торемифен, Флувестрант) соединяются с рецепторами на оболочках опухолевых клеток, опережая их аналогичное соединение с гормонами. Другие препараты (Летрозол, Фемара, Анастрозол, Экземестан, Гозерелин) нарушают синтез женских половых гормонов в организме женщины. В любом случае, не получая гормональную стимуляцию, опухолевая клетка доживает до своей старости и погибает без деления. Поэтому назначение препаратов для гормонотерапии - длительное, а регулярный их приём - обязателен.

Гозерелин

Тамоксифен доказал свою эффективность у женщин с сохранённой менструальной функцией. Другие препараты (ингибиторы ароматазы) - эффективны только при наступившей менопаузе (подтверждается не отсутствием месячных, а анализом крови на гормоны - тест на менопаузу). Если же менопауза не наступила, назначение других препаратов (кроме Тамоксифена) возможно только вместе с "выключением" яичников препаратом Гозерелин или их удалением.

Удаление яичников при раке молочной железы

Удаление яичников при раке молочной железы (аднексэктомия) оправдано при прогрессии онкологического заболевания (показания определяет химиотерапевт). При отсутствии прогрессии, как элемент гормонотерапии, аднексэктомию предлагают в странах, неспособных обеспечить своим гражданам надлежащий уровень современного лекарственного обеспечения: часто это бывает при невозможности предоставить пациенту Гозерелин (Золадекс) на весь курс лечения.

В случаях, когда у пациентки с раком молочной железы имеется сопутствующая гинекологическая патология (гиперплазия эндометрия, миома матки или патология яичников) - иногда, действительно, разумнее выполнить гинекологическую операцию или только аднексэктомию (по согласованию с гинекологом).

Когда начинать гормонотерапию

Гормонотерапию не проводят одновременно с химиотерапией. Дело в том, что и химиотерапия, и лучевая терапия воздействуют только на делящуюся опухолевую клетку, а гормонотерапия делает её неделящейся. Исходя из этого (для того, чтобы достичь максимальной эффективности химиотерапии и лучевой терапии) - гормонотерапию лучше начинать после завершения этих методов лечения.

Где купить препараты для гормонотерапии смотрите ЗДЕСЬ

Никто не собирается гормонотерапией делать из женщины мужчину. Борода и усы у Вас не вырастут, голос не изменится.

Как переносится гормонотерапия при раке

Гормонотерапия по сравнению с химиотерапией переносится совершенно иначе. Неприятные ощущения могут возникать в период адаптации в начале лечения (1 мес), но совсем не обязательно. При гормонотерапии нет проявлений токсичности (тошнота, рвота, кишечные расстройства). Она не требует контроля анализов крови.

Тамоксифен

За изобретение Тамоксифена была присуждена Нобелевская премия. Не стоит отказываться от его приёма, изучив инструкцию - просто этот препарат наиболее изучен.

При приёме Тамоксифена некоторые пациенты отмечали головокружение днём при его утреннем приёме. Однако, при переносе времени приёма на вечер - дневные головокружения исчезали.

Следующая проблема, иногда (а не всегда) сопутствующая приёму Тамоксифена - гиперплазия эндометрия и маточные кровотечения. Но эти кровотечения могут возникать и без Тамоксифена! В конце концов, даже 3 выскабливания при гиперплазии эндометрия и кровотечении, или даже удаление матки, но без отказа от приёма Тамоксифена - принесёт куда больше пользы в уменьшении риска возврата вашей болезни.

К сожалению, опухоль со временем может привыкнуть к назначенному Вам препарату для гормонотерапии и болезнь может вернуться. Если в арсенале у Вас будут ещё другие лекарства - вам назначат их. Если Вы уже всё попробовали - в резерве останется только химиотерапия. Не отказывайтесь самостоятельно от Тамоксифена. Оставьте это в компетенции Вашего врача.

Тамоксифен не желателен при имевших место тромбофлебитах. Если у Вас варикозная болезнь ног - рассмотрите лучше вариант операции (флебэктомия или склерозирование). В конце концов, если сегодня такую операцию Вы перенесёте, то не факт, что вы перенесёте её через несколько лет (а такая необходимость может возникнуть).

Тамоксифен противопоказан при глаукоме. Обязательно скажите своему врачу, если она у Вас есть.

При сопутствующей сердечной патологии частота и степень её усугубления на фоне приёма Тамоксифена была ниже, чем на фоне приёма ингибиторов ароматазы.

У пациенток, которых синтезируется Циклин Д1 - Тамоксифен не "работает".

Анализ на Циклин Д1 можно сдать в лаборатории, тел.8 (812) 439-95-28.

Торемифен

Принципиально - это аналог тамоксифена, но не таблетированный, а в инъекциях - то есть, его невозможно "забыть" принять; он "работает", когда синтезируется Циклин Д1.

Ингибиторы ароматазы

При Her2/neu позитивных (Her2/neu3+) и гормонопозитивных (ER+ и PR+) опухолях Тамоксифен не показал должной эффективности, по сравнению с ингибиторами ароматазы.

Анастрозол иногда провоцирует обострения ревматоидного артрита. Смена его на Фемару (Летрозол) нивелирует этот побочный эффект. Анастрозол и Фемара провоцируют остеопороз и требуют параллельного назначения препаратов кальция и витамина Д (например, КальцийД3 компании Никомед), равно как и ежегодной контрольной остеосцинтиграфии.

Аналог Летрозола - Лорета (2.5 мг/1 раз в сутки), испанского производства, но гораздо дешевле.

Прогнозы при раке молочной железы СМОТРИТЕ ЗДЕСЬ

Гормонотерапия рака молочной железы (груди) при неудалённой опухоли

Иногда гормонотерапия назначается в неоадьювантном режиме при неудалённой опухоли. На фоне такого лечения положительная динамика - уменьшение опухоли - не должна обольщать пациента в пользу отказа от операции. Эффект гормонотерапии может быть нестойким, и сегодняшние оптимальные условия для операции - завтра могут быть упущены: опухоль может адаптироваться и начать расти на фоне приёма препаратов, а усугубившаяся сопутствующая патология (например - сердца) - уже не позволит выполнить операцию.

Проблемы, с которыми может столкнуться пациент при гормонотерапии рака молочной железы (груди)

Назначение гормонотерапии - не самая простая задача. Главное - не назначайте её себе сами и не выбирайте сами себе препараты. Грамотный химиотерапевт всё равно разбирается в этом лучше чем Вы. Вы должны просто информировать его о всех своих сопутствующих проблемах и довериться его решению.

Для проведения гормонотерапии есть оригинальные препараты и дженерики. Стоимость оригинальных препаратов не всегда неподъёмна. Информация об аптеках, легально продающих препараты для гормонотерапии находится ЗДЕСЬ.

Я был свидетелем фактов, когда в одном онкологическом учреждении Санкт-Петербурга назначение гормонотерапии и перевод пациентов с одного препарата на другой (это называется смена линии гормонотерапии) определялось не медицинскими показаниями (прогрессия заболевания на фоне лечения), а истечением срока годности лекарств, купленных руководителем учреждения без учёта потребности в них (вероятно, мотивированного на покупку другими причинами). Иными словами - пациентам давали только те препараты (бесплатно, по полису ОМС), у которых выходит срок годности (нарушая онкологические правила назначения гормонотерапии). В этом же учреждении (когда руководитель не обеспечил закупку препаратов в должном количестве и когда лекарства для гормонотерапии закончились уже в ноябре) - пациентам в декабре (при выявленных метастазах в кости) не назначали лечение, а рекомендовали пройти дополнительные контрольные обследования через 3 месяца (когда препараты уже появятся по закупкам нового года).

Мы стараемся обеспечить всем нашим пациентам консультацию грамотного химиотерапевта, мотивированного при назначении гормонотерапии только потребностями пациента, а не другими причинами.

Дополнительно о гормонотерапии Вы можете прочитать ЗДЕСЬ.

Если информация нашего сайта была Вам полезна - пожалуйста, оставьте свои отзывы о нём и рекомендации в интернете для других пациентов.

Специалисты Университетского Маммологического Центра регулярно повышают свой профессиональный уровень, посещают отечественные и зарубежные конференции, чтобы быть в курсе всех современных тенденций в онкологии и пластической хирургии.

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Онкогенная способность cyclin D1 уже давно установлена ​​при раке молочной железы. Усиление CCND1 было идентифицировано в подгруппе пациентов с плохим прогнозом, но имеются противоречивые данные относительно предсказательной ценности избыточной экспрессии белка cyclin D1. Это исследование было разработано для анализа экспрессии циклина D1 и его корреляции с усилением CCND1 и их прогностических последствий при инвазивном раке молочной железы. Используя технику микрочипов ткани, мы провели иммуногистохимическое исследование ER, PR, HER2, p53, cyclin D1, Ki67 и p16 в 179 случаях инвазивной карциномы молочной железы. Метод FISH был выполнен для обнаружения амплификации HER2 / Neu и CCND1. Высокая экспрессия cyclin D1 была идентифицирована в 94/179 (52%) инвазивных раковых опухолей молочной железы. Сверхэкспрессия Cyclin D1 и усиление CCND1 были достоверно связаны (p = 0,010). Сверхэкспрессия cyclin D1 коррелирует с экспрессией ER, экспрессией PR и подтипами Luminal (p 50%. Для р16 ядерное и цитоплазматическое окрашивание рассматривали и оценивали в соответствии с процентным содержанием окрашивания клеток 50%. Окрашивание HER2 анализировали в соответствии с рекомендациями Американского общества клинической онкологии и колледжа американских патологов [17]. HER2 иммуноокрашивание считалось положительным у образцов, которые получали оценку 3+, тогда как оценки от 0 до 1+ считались отрицательными. Случаи с оценкой 2+ были классифицированы как пограничные. Состояние Ki-67 было низким, если 14% или менее ядер неопластических клеток были положительными и высокими, если ≥15% ядер опухолевых клеток были положительными. Отрицательное значение p53-положительности было окрашиванием более 25% опухолевых клеток [18].

Анализ интерфазы FISH (флуоресцентная in situ гибридизация) проводили на 3-мкм тканевых срезах TMA с использованием коммерческих зондов. CCND1 амплифицировали с использованием зонда LSI Cyclin D1 (11q13) SpectrumOrange / CEP11 SpectrumGreen (Abbott Molecular, Abbott Park, Иллинойс, США) в соответствии с ранее описанными методами [19].

HER2 FISH выполняли с использованием зонда LSI HER2 / CEP17 (Leica BOND) в системе Leica BOND-III в соответствии с инструкциями производителя. Результаты HER2 FISH были классифицированы по рекомендациям ASCO / CAP для оценки HER2.

Все образцы оценивали двумя исследователями (ABOO и PMA) с использованием флуоресцентного микроскопа Leica DM 5000B. Оценка проводилась в двух опухолевых областях с по меньшей мере 25 неопластическими клетками. Для оценки CCND1 амплификация гена высокого уровня определялась как более 10 копий на ядро ​​или скопированные скопления в> 50% клеток [20]. Низкоуровневое усиление определялось как 6-10 копий в> 50% клеток [21]. Образцы с 1-5 копиями были классифицированы как не амплифицированные.

Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS 15.0 для Windows (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Категориальные переменные анализировали с помощью теста квадратного квадрата и, при необходимости, точного теста Фишера. Для определения статистической значимости считались двухсторонние значения р менее 0,05. Кривые выживания вычисляли по методу Каплана-Мейера с использованием регрессии Кокса, а разницы между кривыми оценивали с использованием логарифмического теста. Общая выживаемость (ОС) рассчитывалась с даты постановки диагноза до даты смерти или последнего наблюдения. Безрецидивная выживаемость (DFS) определялась как время от постановки диагноза до первого рецидива локализации, отдаленного рецидива или контралатерального заболевания.

Все 179 пациентов были женщинами, а их средний возраст составлял 57 лет (от 28 до 93 лет). Клинические и патологические особенности описаны в таблице 2. Большинство опухолей (96 случаев, 54%) были стадией опухоли T2, 70 случаев (39%) были T1, а опухоли более 5 см (T3) наблюдались только 13 случаев (7%). Распределение опухолей в исследовании по гистологическому классу Ноттингема показало, что 31 случай (17%) был гистологическим классом 1, 66 случаев (37%) были 2-м, а 82 случая (46%) были 3-м классом. Восемьдесят шесть пациентов имели метастатические лимфатические узлы и 86 не имели лимфатических узлов, скомпрометированных опухолями. В 7 случаях не было биопсии лимфатических узлов. Классификация в соответствии с IHC показала следующее: 68 (38%), 63 (35%), 13 (7%) и 35 (20%) повреждений были классифицированы как Luminal A, Luminal B, HER2 и Triple Negative, соответственно ( Таблица 2). Последующие данные были доступны в 158 случаях; рецидив произошел в 49 случаях, в то время как 30 пациентов умерли от этой болезни.

Ядерное окрашивание белка Cyclin D1 наблюдалось в более чем 50% клеток в 94 случаях (52%), между 10-50% клеток в 52 случаях (29%) и 50% клеток. F-G ядерное и цитоплазматическое окрашивание в большинстве ядер инвазивной карциномы молочной железы. Усиление гена CCND1 оценивали FISH. D-кластеры усиления CCND1, H- усиление CCND1 нижнего уровня.

Усиление CCND1 было обнаружено в 34 случаях с двумя различными образцами: высокое усиление наблюдалось в 17 случаях (9%), с более чем 10 сигналами на ядро, тогда как другие 17 демонстрировали низкое усиление. Для остальных 145 опухолей (81%) FISH не наблюдала усиления CCND1. Усиление CCND1 достоверно коррелировало с более высоким уровнем опухоли (p = 0,038), высокой экспрессией белка Ki-67 (p = 0,002) и подтипом Luminal B (p = 0,002): 13 из 17 случаев (76,5%) с высоким усилением были Luminal B (таблица 3). Статистических корреляций не обнаружено с размером опухоли, вовлечением лимфатических узлов, ER, PR, усилением HER2, p53 или p16.

Не A: не усиленный, низкий A: усиление ≤10 сигналов на ядра, высокое A: усиление> 10 сигналов

Сверхэкспрессия белка Cyclin D1 и усиление CCND1 были достоверно связаны (p = 0,010); все случаи с высоким усилением (17/17) и 15/17 случаев с низким усилением показали экспрессию ядерного белка. Все случаи, которые были отрицательными по отношению к циклину D1 иммуногистохимией и в большинстве случаев (19/21) с низким выражением ( 50% клеток (таблица 4).

Что касается других маркеров, ядерная экспрессия p16 наблюдалась у 69% (124) образцов карциномы молочной железы: 62 случая с экспрессией между 10-50% клеток и 62 случаями в более чем 50% клеток. Ядерная экспрессия р53 наблюдалась в 84 случаях (47%) со следующим распределением: 21 случай в группе типа Luminal A, 30 в группе Luminal B, 6 в группе HER2 и 27 случаях в группе Triple Negative. Девяносто три образца (52%) показали высокий показатель пролиферации (Ki-67> 15%). Ген HER2 (FISH) не амплифицировали в 152 случаях (85%) и амплифицировали в 27 случаях (15%).

Мы наблюдали корреляцию между положительностью p53 и тройным отрицательным подтипом (p 50% клеток (p 50% ядер) значительно коррелировала с более коротким DFS (p = 0,029) в случаях Luminal A. Пациенты с опухолями с высоким усилением CCND1 (> 10 копий) имели повышенный риск рецидива по сравнению с пациентами без амплификации или с низкой амплификацией в опухолях (HR = 2,5, 95% ДИ, 1,2-4,9, p = 0,01). Во всей серии не было существенной разницы в ОС между случаями с усилением CCND1 и случаями без усиления. Когда мы отдельно проанализировали прогностическую импликацию амплификации CCND1 в RE-позитивных и -негативных опухолях, мы обнаружили, что высокая амплификация давала худшую ОС в RE-положительных случаях (p = 0,026), но не RE-негативные случаи.

Усиление CCND1 было предсказано для DFS. Высокое выражение cyclin D1 затронуло DFS в случаях Luminal A.

Классификация молекулярного подтипа коррелирует с OS и DFS (HR = 1,7; 95% ДИ, 1,2-2,7, p = 0,006 и HR = 1,4; 95% ДИ, 1,1-1,8, p = 0,02 соответственно). Статистически достоверной корреляции между экспрессией p16 и какой-либо из функций выживания не обнаружено. Случаи с p53-положительными опухолями имели более короткие ОС (HR = 3,5, 95% ДИ, 1,13-10,88, p = 0,019), чем отрицательные.

При многофакторном анализе размер опухоли, лимфатический узел, амплификация CCND1 и экспрессия р53 были связаны с более короткой ОС, а экспрессия cyclin D1 (> 10%) была связана с более длинной ОС (таблица 6). Размер опухоли, лимфатический узел и усиление CCND1 были связаны с более коротким DFS.

Прогностическое и прогностическое значение циклин D1 избыточной экспрессии при раке молочной железы остается спорным. Сообщалось, что экспрессия белка Cyclin D1 является прогностическим маркером в карциноме молочной железы, и большинство исследований показали, что избыточная экспрессия является хорошим прогностическим фактором, особенно для ER-положительных пациентов [14,15,22]. Однако другие авторы [12,13] сообщили, что чрезмерная экспрессия циклина D1 является предиктором плохого прогноза; cyclin D1 способствует фосфорилированию белка ретинобластомы (Rb) и других субстратов путем связывания с циклинзависимой киназой 4/6 (CDK4 / 6), чтобы быстро пролиферировать клетки.

Обнаружение сверхэкспрессии циклина D1 с помощью иммуногистохимии было зарегистрировано у 35-81% карцином молочной железы в соответствии с нашими результатами. В нашей серии 52% случаев были cyclin D1 положительными в более чем 50% клеток. Мы наблюдали положительную корреляцию между отсутствием экспрессии cyclin D1 и уровнем опухоли и пролиферацией, что приводит к агрессивному течению заболевания. Cyclin D1 играет решающую роль регулятора клеточного цикла, способствуя прогрессированию через фазу G1-S [14], и, следовательно, можно было бы ожидать, что усиление экспрессии cyclin D1 будет связано с более крупными опухолями с более высокими скоростями пролиферации [23] экспрессия cyclin D1 связана с более низким гистологическим классом [11,21,24,25]. Mylona и др. [23] предложили взаимодействие между циклином D1, гистон-ацетилазами и Rb, так что ацетилирование Rb приводит к выходу клеточного цикла и вызывает остановку роста.

Сообщается, что экспрессия Cyclin D1 коррелирует с экспрессией ER [26], что согласуется с нашими выводами о том, что гиперэкспрессия cyclin D1 коррелирует с экспрессией ER и PR и с подтипами Luminal. Эти результаты подтверждают критическую роль циклина D1 в индуцированном эстрогенами раке молочной железы, поскольку действие эстрогена опосредуется посредством транскрипционной активации циклина D1 и c-Myc [16,22,27].

Предполагается, что усиление CCND1 активно участвует в инициировании и прогрессировании опухоли путем активации прото-онкогена. В настоящем исследовании 18% случаев имели усиление CCND1, что соответствует предыдущим сообщениям [23,28]. Значительные ассоциации наблюдались между генной амплификацией и высоким уровнем опухоли (p = 0,038), высокой экспрессией белка Ki-67 (p = 0,002) и подтипом Luminal B (p = 0,002), все маркеры худшего прогноза. Существовала сильная корреляция между амплификацией гена CCND1 и экспрессией белка cyclin D1 (p = 0,010); все случаи с копиями в 10 г показали избыточную экспрессию.

Наша серия подтверждает, что чрезмерная экспрессия cyclin D1 (более 10% клеток) оказывает благоприятное влияние на OS (HR = 0,33, 95% ДИ, 0,12-0,89, p = 0,029), но не DFS: Luminal A с высокой экспрессией циклина Белок D1 имел более короткую DFS (p = 0,029). В других исследованиях сообщалось, что чрезмерная экспрессия cyclin D1 значительно связана с более длинными ОС, также не показала существенной разницы в DFS [25]. Пациенты с гиперэкспрессирующими опухолями cyclin D1 выживают дольше, но с метастатическим заболеванием после рецидива, возможно, из-за резистентности к тамоксифену, вызванной гиперэкспрессией cyclin D1 [29].

Другие гены в области 11q13, например. MYEOV, ORAOV1, FGF19, FGF4, INT2, CTTN, EMSY и GARP1 были идентифицированы как гены-драйверы и могут быть совместно усилены с помощью CCND1 31. EMSY кодирует белок, который связан с тропой BRCA2; его активация может функционировать как суррогат для потери BRCA2, придавая фенотип, подобный опухолям BRCA2. EMSY может быть потенциальным предиктором устойчивости к тамоксифену. Более того, усиление 11q13 включает в себя удаление q-плеча, дистального к усиленной области; в этом регионе содержится ряд генов, участвующих в репарации ДНК. Интересно, что CHK1 (11q24) является одним из ключевых регуляторных факторов контрольной точки повреждения ДНК, а совпадение делеции CHK1 и CCND1-амплификации связано с высоким уровнем опухоли при инвазивной карциноме молочной железы [20].

CCND1-амплифицированные опухоли представляют собой отдельную сущность в подтипах RE +, Luminal B и карцином тяжелой карциномы молочной железы с более коротким DFS и плохим результатом. Примечательно, что эти опухоли также чрезмерно экспрессируют cyclin D1; поэтому иммуногистохимический анализ нецелесообразно идентифицировать эту агрессивную подгруппу с плохим прогнозом.

Недавно Ахлин и др. Сообщили об ассоциации экспрессии высокого цикла C1 с высокой пролиферацией и худшем прогнозе раннего рака молочной железы в ER-позитивных опухолях [32], но не ER-негативных случаях. Когда мы анализировали ER-положительные и ER-негативные случаи отдельно, худшая OS была обнаружена в ER-позитивных случаях с высокой экспрессией cyclin D1. В ER-негативных случаях не наблюдалось никакой значительной ассоциации. Соответственно, Lamb et al [33] сообщили, что чрезмерная экспрессия циклина D1 увеличивает миграцию и более агрессивное поведение в ER-позитивных линиях клеток рака молочной железы, тогда как в ER-отрицательных клеточных линиях происходит обратное, поддерживающее различные эффекты экспрессии cyclin D1 в ER-положительном и ER-негативные клетки. В ER-отрицательном раке молочной железы пролиферация клеток может быть активирована путем тщательного дерегулирования ниже по течению от pRb-узла с избыточной экспрессией cyclin E [34]. Выражение с высоким циклином E вызывает хромосомную нестабильность и часто ассоциируется с проявлениями агрессивных заболеваний.

Потеря р16 часто описывалась в нескольких раках, и ее инактивация может способствовать прогрессированию рака и неблагоприятному прогнозу. Роль р16 при раке молочной железы человека остается спорным. В предыдущих исследованиях рака молочной железы была обнаружена ассоциация отрицательной активности, высокой степени и пролиферации ER с избыточной экспрессией p16. Отрицательность ER также была связана с базальноподобным фенотипом [35]. В соответствии с этими сообщениями мы наблюдали, что сверхэкспрессия p16 является маркером с высоким уровнем опухоли и связана с отсутствием экспрессии cyclin D1 и Triple Negative подтипа. Мы наблюдали связь между экспрессией p16 и высокими уровнями Ki-67 независимо от состояния p53, как и Sugianto et al [36]; однако наше исследование не может найти роль р16 в пролиферации и агрессивности в р53-негативных опухолях, вероятно, потому, что только 8 из 35 тройных негативных случаев в нашей серии были отрицательными. Хотя экспрессия p16 оказалась маркером агрессивной морфологии в нашей серии, мы не наблюдали связи с какой-либо функцией выживания. Было описано несколько расхождений в роли р16 в выживании рака молочной железы; некоторые авторы сообщили о значительной связи между высокой экспрессией p16 и повышенной выживаемостью, связанной с раком молочной железы, и DFS [22], тогда как другие ассоциировали экспрессию p16 с низкой выживаемостью [37].

Таким образом, наши результаты показывают, что чрезмерная экспрессия циклина D1 связана с типами рака молочной железы с хорошими прогностическими признаками (ER, PR, низкое сорт), но, по-видимому, играет разные прогностические роли в разных молекулярных подтипах. Усиление гена CCND1 предсказывает более короткую DFS и плохой результат. Расхождения в прогностической ценности белка и гена могут быть связаны с различными функциями циклина D1 в разных фазах клеточного цикла; механизм является сложным и не опосредуется одним путем или продуктом гена [28]. Экспрессия cyclin D1 регулируется на уровне транскрипции несколькими путями; активированный Ras способствует транскрипции CCND1, тщательно проводя киназный путь, включающий Raf1, MAPK и ERK. PTEN блокирует прогрессирование клеточного цикла посредством понижающей регуляции цикла D1. При некоторых условиях циклин D1 может индуцировать остановку роста вместо прогрессирования клеточного цикла [23], и поэтому мы предполагаем, что экспрессия белка должна анализироваться в контексте молекулярных подтипов.

Мы в долгу перед пациентами, которые внесли свой вклад в это исследование.