Что такое гематологические исследования на лейкоз крс

ДИАГНОСТИКА ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

В зависимости от характера распространения опухолевых клеток лейкоз классифицируют на две группы – системные и опухолевые. Первая отличается системностью поражения кроветворной и лимфоидной тканей с вовлечением в процесс костного мозга, селезенки, лимфатических узлов и включает лимфоидный, миелоидный лейкозы и злокачественный гистиоцитоз [1].

Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов, но клинически он проявляется чаще всего у животных в четыре года и старше [1]. В естественных условиях к вирусу восприимчивы, кроме крупного рогатого скота, овцы, зебу и буйволы. Заражение происходит с молоком, молозивом и кровью, если не соблюдаются правила асептики и антисептики при ветеринарных (взятие крови, прививки и др.) и зоотехнических (нумерация и др.) манипуляциях у животных, с инфицированной спермой. Существенное значение в распространении болезни имеет гено- и фенотипическая предрасположенность животных к лейкозу, например, среди красной и черно-пестрой пород скота [2].

Инкубационный период при экспериментальном заражении длятся 60…750 сут, а при спонтанном – 2…6 лет. В течении лейкозов выделяют предлейкозную, начальную, развернутую и терминальную стадии болезни. С развитием патологического процесса указанные стадии следуют одна за другой. В начальный период болезни при лейкемическом течении отмечают увеличение числа лейкоцитов в периферической крови (лейкоцитоз), в дальнейшем – системное или регионарное увеличение лимфатических узлов, селезенки, нередко развивается геморрагический синдром. Характерны изменения картины крови (увеличение в крови незрелых кроветворных клеток, или лейкемия, лейкоцитоз и др.) [3].

Болезнь чаще протекает в латентной форме. Основным признаком лейкоза является нарушение нормального процесса пролиферации и дифференциации клеток кроветворной ткани. Чаще поражаются лейкобластические клетки, что приводит к интенсивной пролиферации различных типов лейкоцитов в кроветворных органах, костном мозге, селезенке, лимфоузлах. Размножающиеся клетки крови неконтролируемо распространяются по организму и попадают в различные органы и ткани. Образующиеся опухоли вызывают изменения структуры и функции пораженных органов вследствие атрофии специфических клеток. Появляются нарушения на молекулярном, клеточном и органном уровнях, что приводит к расстройству кроветворения, увеличению количества лимфоцитов. Заболеваемость составляет 3…20 %, а летальность – до 15% [3].

Диагностические исследования на лейкоз проводят серологическим, молекулярно-биологическим, гематологическим, клиническим, патоморфологическим методами, методом биопробы [5].

Для исследования в ветеринарную лабораторию доставляют: для серологических исследований - кровь от животных в возрасте 6 мес и старше в количестве 2. 3, для гематологического исследования - кровь из яремной вены в пробирку с антикоагулянтом (трилон В), срезы из пораженных органов – селезенки, лимфоузлов, печени, почек, легких для гистологических исследований (срезы посылают в свежем виде или в 10% растворе формалина) [2].

Инфицированных животных можно выявить путем постановки биопробы на овцах, которых заражают внутрибрюшинно цельной кровью [2].

Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования - реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД). Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2. 8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно [5].

Животных, сыворотки крови которых дали положительный результат в РИД, признают зараженными вирусом лейкоза, их необходимо исследовать гематологическим методом [5].

В случаях, когда линия преципитации плохо просматривается или имеется зона опалесценции вокруг лунок, реакцию следует переставить [5].

Гематологический метод исследования заключается в количественной и качественной оценке лейкоцитов в периферической крови животных, отнесенных по результатам РИД к группе инфицированных ВЛКРС.

Животных относят к категории больных по результатам однократного гематологического исследования.

Животных, подозреваемых в заболевании лейкозом, подвергают через 1 – 2 месяца дополнительному гематологическому исследованию. При повторном подтверждении диагноза их считают больными [1].

При вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с лимфатическими узлами или другими органами и тканями. Все формы лейкоза характеризуются увеличением в различной степени лимфатических узлов. При опухолевых лейкозах, а также при злокачественном гистиоцитозе лимфатические узлы бугристые, капсула сращена с паренхимой; на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы. В органах брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают диффузные или узловые опухолевые разрастания различной величины и формы. Селезенка увеличена при всех случаях системного лейкоза и в 40 – 60 % случаев лимфогранулематоза. В более поздней стадии границы между красной и белой пульпой стерты, ткань мягкой консистенции, от буро-красного до буро-коричневого цвета. В терминальной стадии может происходить разрыв селезенки [1].

Метод биопробы основан на восприимчивости животных гетерологичных видов к ВЛКРС. Овец в возрасте старше 6 мес. или кроликов любого возраста, пола, породы перед постановкой на них биопробы исследуют в РИД дважды с интервалом 2 мес на наличие антител к гликопротеидному антигену вируса лейкоза. В опыт берут животных с двукратным отрицательным результатом серологического исследования на лейкоз. При введении овцам или кроликам лейкоцитов крупного рогатого скота, инфицированного вирусом лейкоза, у них развивается инфекция, которая сопровождается появлением в крови специфических преципитирующих антител, выявляемых с помощью реакции иммунодиффузии через 14. 30 дней после заражения. Период от момента взятия крови у испытуемого животного до постановки биопробы должен составлять не более 24 ч при температуре хранения 18. 25°C. Пробу исследуемой крови считают положительной, если у овцы или кролика после введения крови или лейкоконцентрата испытуемого животного обнаруживают в сыворотке крови антитела к вирусу лейкоза [5].

Лечение лейкоза крупного рогатого скота не разработано. Инфицированных животных подвергают вынужденному убою либо изолируют. Переболевшие лейкозом животные часто приобретают иммунитет к повторному заражению.

Библиографический список

Диагностика лейкоза крупного рогатого скота [Текст]: метод.указания / В. А. Седов. - Москва: Агропромиздат, 1989. - 29 с.

Ветеринарная вирусология [Текст]: учебное пособие для студ. вузов, обучающихся по спец. 111201 - "Ветеринария": рек. УМО по образованию / П. И. Барышников. - Москва: ФОРУМ, 2009. - 96 с.

Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник для студ. вузов, обуч. по спец. 111201 "Ветеринария" / Р. Г. Госманов, Н. М. Колычев. - 2-е изд., перераб. и доп. - Москва: КолосС, 2006. - 304 с.

Частная ветеринарно-санитарная микробиология и вирусология [Текст]: учебное пособие для студ. вузов, обучающихся по направлению подготовки (специальности) - Ветеринария (квалификация (степень) "Специалист"): допущено УМО по образованию / Р. Г. Госманов [и др.]. - Уфа: БашГАУ, 2013. - 251 с.

Для начала необходимо понять, чем же чем же так опасно данное заболевание? Какой приносится вред хозяйству?

Данная статья написана в соавторстве с Владимиром Новиковым, который с 2002 года является начальником Волотовской районной ветеринарной станции Новгородской области.

Я в свою очередь попытался дать зоотехническое обоснование данной темы, Владимир разложил по полочкам все ветеринарный термины.

Лейкоз (хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, гемобластоз, лейкемия.) — хроническое заболевание опухолевой природы протекающая бессимптомно, характеризующееся злокачественным разрастанием кроветворных и лимфоидных клеток в разных органах.

В опухолевый процесс вовлекаются лимфоузлы, сычуг, селезенка, сердце, почки и другие органы.

Лейкоз КРС диагностируют практически во всех странах мира. Наиболее широко он распространен в США, в ряде стран Центральной Европы, Швеции, Странах Ближнего Востока, Африки, Австралии.

ВЛКРС (Вирус Лейкоза Крупного Рогатого Скота) был завезен из Германии с 1945—1947гг. В дальнейшем вирус лейкоза распростронялся практически во всех Субъектах РФ.

В ходе воспалительных процессов ухудшается общее состояние животного, снижается удой, нередко истощение. У больных коров снижается уровень иммунитета и, как следствие, увеличивается яловость, снижается выход телят, учащаются аборты.

Тем самым лейкоз причиняет огромный экономический ущерб, который вытекает из недополученного молока и приплода, преждевременной выбраковки скота, утилизации туш больных животных.

Гемобластоз (лейкоз) в настоящее время рассматривают как потенциальную опасность для генофонда племенного молочного скота и при отсутствии планомерной борьбы имеет к дальнейшей ликвидации маточного поголовья.

Естественно экономический ущерб от данной болезни складывается из потерь в результате выбраковки инфицированных ВЛКРС и больных животных, утилизации либо уничтожении туш, сдачи на мясо молодняка от больных коров и расходов на проведение оздоровительных мероприятий.

Возбудителем лейкоза является вирус семейства Retroviridae, который содержит в себе РНК. Животные заражаются этим вирусом путем проникновения в организм лимфоцитов через пищеварительный тракт, кровеносную систему, слизистые оболочку и мышечные ткани.

Лимфоциты - клетки иммунной системы, разновидность лейкоцитов (белые кровяные клетки крови).

Получается, что заразиться коровы могут через совместный выпас с зараженными животными, через использование зараженного семени быков-производителей, телята через зараженное молозиво.

Спектр заражение обширен. Контагионность лейкоза незначительна. Сезонность не проявляется. Природно-географические и климатические факторы не влияют на распространение болезни.

После заражения в организме образуются специфические антитела против вирусных антигенов. Животные, которые заразились, становятся пожизненно инфицированными.

Заболевание характеризуется стадийностью. Различают три стадии развития инфекции:

1. инкубационную (инфекционная)
2. гематологическую (патологическая)
3. опухолевую

Лечение больных коров лейкозом не проводят. Их подвергают вынужденному убою.

Первая стадия протекает без видимых клинических признаков, с сохранением продуктивности и воспроизводительных качеств. Диагностируется серологическими методами исследованиями (реакция иммунной диффузии)

Ранее я писал про образование антител у животных заразившихся ВЛКРС и при помощи данного метода мы можем найти данные антитела у животного в чашке Петри.

Посередине размещаем Антиген (АГ) а по бокам сыворотка крови животных Антитела (АТ) и если будет реакция т.е РИД +, то между АГ И АТ будет линия преципитации как показана на рисунке.

Данный метод позволяет выявить лейкоз на ранних стадиях. Но Существует еще пару реакций которые позволяют на ранних стадиях обнаружить вирус лейкоза когда титр антител очень низкий и реакция имунодифузии не дает положительной реакции, к ним относят ИФА и ПЦР.

ИФА (Иммуноферментный анализ) гостированный метод. Чуствительность метода ИФА намного выше чем РИД, позволяет использовать другие биологические жидкости, например молоко.

ПЦР метод он не гостированный, но он самый точный из этих методов

Диагноз на лейкоз считают установленным, а хозяйство не благополучно по этой болезни, если серологическим методом выявлены антитела к ВЛКРС , а так же если клинические, гематологические, паталогоанатомические изменения, характерные для лейкоза, подтверждены гисталогическими исследованиями, а при жизни у этих животных специфические антитела к ВЛКРС

Ну и самое главное в чем особенно путаются владельцы животных

— Животные, у которых в крови обнаружены специфические антитела к ВЛКРС (Реакция РИД, ИФА), а так же гематологические изменения или клинические признаки, характерные для лейкоза – ЖИВОТНОЕ БОЛЬНОЕ ЛЕЙКОЗОМ.

Стоит отметить, что прямой взаимосвязи между заболеванием лейкоза животных и естественным заражением человека не установлено. Хотя по своему строению и функциональным особенностям ВЛКРС очень схож с Т-клеточным вирусом лейкоза человека.

Однако существуют определенные ветеринарно-санитарные требования к ограничению порядка использования молока и мяса животных, которые являются вирусоносителями либо ГЕМ больные.

— молоко от инфицированных животных не устойчиво к высоким температурам, обычный режим пастеризации убивает вирус за пару десятков секунд.

— мясо ГЕМ больных животных рекомендуется уничтожить

— весь КРС начиная с 6 мес. Возраста исследуется на лейкоз.

Поводя итог можно смело утверждать, что лейкоз коров остается крупной социально-биологической проблемой, потенциально опасным заболеванием для человека.

И очень важно выявлять его в стаде на ранних стадиях развития во избежание огромных экономических потерь.

Коварство такого заболевания как лейкоз заключается в его скрытости. Иногда больное животное годами является вирусоносителем, но при этом не проявляет никаких симптомов. Инфекция передается взрослым особям и молодняку КРС, у которых также медленно поражает организм. Регулярное обследование крупного рогатого скота помогает рачительным животноводам вовремя определить опасный недуг. Единственным эффективным для этого путем является взятие анализа крови.

• Вирусоносительство лейкоза
• Взятие анализа крови
• Сроки исследования крови
• Что делать, если анализ на лейкоз положительный?

Вирусоносительство лейкоза

Онкогенный лейкозный вирус РНК вызывает хроническое инфекционное заболевание у КРС под названием лейкоз. Он поражает кроветворные органы и возбуждает начало опухолевого процесса. Если разрезать тушу убитой коровы, можно заметить, что все органы внутри покрыты опухолями.

Течение заболевания проходит три этапа, каждый из которых имеет определённые временные промежутки:

• инфекционная стадия является начальной, без проявления внешних симптомов, продуктивность и здоровье животного кажутся в норме, но в это время зараженные головы уже вирусоносители и передают белокровие сородичам. До первых признаков может пройти несколько лет;
• патологическая стадия начинается с проявления внешних признаков: угнетенного состояния, выпучивания глаз, увеличения лимфатических узлов и ряда других. В данный период болезнь можно спутать с другими (туберкулез, мастит и прочие);
• опухолевая стадия отмечается абортами стельных животных, невозможностью забеременеть, проблемами с пищеварением (понос, запор), потерей веса и снижением продуктивности. После обнаружения явных симптомов и до момента гибели взрослой особи КРС может пройти всего несколько часов, максимум дней. Телятам часто удается растянуть этот интервал до двух месяцев.

Взятие анализа крови

Поскольку лейкемия протекает незаметно, очень важно своевременно диагностировать ее для недопущения распространения. Для этого необходимо использовать достоверные способы обследования на вирусоносительство лейкоза у коров. На сегодняшний день выбор специалистов ложится на серологический метод:

1. реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД);
2. иммуноферментный анализ (ИФА).

Антитела с реакцией осаждения взаимодействуют с растворимыми антигенами вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Их находят в срок от четырнадцати до шестидесяти дней после момента инфицирования. Также после этого они могут обнаруживаться на протяжении всего существования коровы.

Ученые уверяют, что ИФА более точный метод, чем РИД. Более верно он работает на первых порах. Но предпочтительнее использовать результаты от двух тестов, чтобы не оставлять сомнения.

Исследование крови на лейкоз у коров по методу РИД начинается с взятия сыворотки крови больного животного:

Иммуноферментный анализ допускает исследование не только крови, но и молока. Большая чувствительность ИФА дает шанс более оперативно и широко изучать сыворотки крови. Метод показывает поголовье, в которых степень заразности не больше процента.

Оба указанных метод не могут различить материнские антитела у молодняка от активных. Поэтому телята проверяются, начиная с шестимесячного возраста, когда перестают обнаруживать материнские антитела, не являющиеся показательными при диагностике.

Чтобы не допустить неправильный результат, нужно соблюдать условия проведения исследования крови на лейкоз у коров:

1. у беременных буренок кровь берется за месяц до родов или после;
2. выявление других возможных инфекционных заболеваний;
3. обнаружение паразитов, избавление от них. После этого ИФА разрешается через месяц, а РИД через два месяца по завершению обработки;
4. любые вакцины применяют после взятия анализов на пробы. Либо по прошествии двух месяцев;
5. гематологическое обследование учитывает подсчет лимфоцитов в крови. Его можно инициировать телятам с полутора лет, если до этого методом РИД и ИФА были найдены антитела ВЛКСР.

Последний гематологический способ также позволяет развеять сомнения при тесте РИД.

Если по РИД результат отрицательный, а по итогам гематологической процедуры положительный, то последнюю повторяют через шестьдесят дней.

При равно положительном выводе корову отправляют на убой. А если и после повторного обследования РИД остается отрицательным в отличие от гематологического метода, животное признается здоровым.

Сроки исследования крови

Для проведения исследований в хозяйствах без карантина существуют благоприятные периоды. Владельцы крупного рогатого скота должны их учитывать, чтобы не допускать заболевания лейкемией:

Под сомнение ставится поголовье, в котором у некоторых голов РИД и ИФА показали положительный результат, подкрепленный гематологическим. Такое хозяйство называют неблагополучным, в нем проводят противолейкозные мероприятия. Коровы считаются больные лейкозом. Когда в определенном хозяйстве положительные РИД и ИФА, но без гематологических изменений и проявления симптомов, животные лишь инфицированы вирусом.

Что делать, если анализ на лейкоз положительный?

Лейкемия считается заболеванием, при возникновении которых чудес не бывает. Самоизлечиться животное не способно, а действенных лекарств еще не разработали.

Поэтому если анализы на лейкоз у коровы положительные, приходится избавляться от буренки.

Лейкоз крупного рогатого скота — это хроническая инфекционная , медленно протекающая болезнь опухолевой природы. Болезнь сопровождается поражением органов кроветворной системы, появлением повышенного количества лимфоцитов в крови, иногда опухолеобразным поражением органов и тканей организма.

Возбудитель – вирус лейкоза крупного рогатого скота. Во внешней среде — малоустойчив. При температуре 76 градусов вирус инактивируется за 16 сек, кипячение убивает вирус мгновенно. Он быстро обеззараживается 2-3%-ными растворами едкого натра, 3% растворами формальдегидами, 2 % раствор хлора и т.д.

В развитии болезни различают 3 стадии – инкубационную, гематологичекую и опухолевую.

Источник инфекции является зараженное животное на всех стадиях течения болезни. Передается с инфицированными лимфоцитами. Возможен пренатальный (от матери к плоду), постнатальный ( при совместном содержании инфицированных и здоровых животных) и комбинированный пути передачи вируса.

Передача вируса происходит через кровь, молоко, биологические жидкости, предметы, содержащие лимфоидные клетки животного, а также сперму больных лейкозом быков. Случаи передачи вируса лейкоза через кровососущих насекомых не установлены. Заражение телят происходит после рождения – через молоко. Заразившись однажды, животное остается инфицированным пожизненно.

Лейкоз причиняет хозяйствам большой экономический ущерб, связанный с:

• затратами на проведение противолейкозных мероприятий
• снижением качества и количества молочной и мясной продукции
• затратами на обеззараживание молока(пастеризация) Молоко, полученное из неблагополучных по лейкозу хозяйств, не допускается в свободную реализацию. Такое молоко можно использовать только после пастеризации или оно сдается на молокозаводы и реализуется после промышленной переработки
• вынужденная выбраковка и убой больных лейкозом животных на мясокомбинатах
• затрудняется ведение в хозяйстве племенной работы.

Возможность заражения человека лейкозом не доказана, так как существует видовой барьер.

Распространению заболевания способствует совместное содержание и пастьба здоровых и зараженных животных, выпаивание телятам молока от больных лейкозом коров, осеменение коров спермой от зараженных быков, использование в стаде быка (вольная случка).

Несоблюдение зооветспециалистами правил асептики и антисептики при проведении зооветеринарных мероприятий (биркование и мечение животных, взятие крови, лечение, исследование на стельность, оказание ветеринарной помощи)

Если сельхозпредприятия, имеющие своих специалистов, соблюдают правила закупки скота, то владельцы ЛПХ, КФХ часто их нарушают, когда покупают животных без проведения исследований на лейкоз, без оформления ветсправки формы № 4 или ветсвидетельства формы № 1 и паспортов, где указываются данные, что в течение месяца, когда животное было на карантине, проводились необходимые диагностические исследования, в том числе и на лейкоз КРС.
При покупке животных владельцы забывают о том, что они должны поставить в известность госветслужбу по месту жительства о приобретении животного, которая ставит во дворе владельца его на 1-месячный карантин, в течение которого повторные диагностические исследования, в том числе и на лейкоз.

Если в течение карантина госветслужбой у животного устанавливается лейкоз, то купивший данное животное владелец ЛПХ имеет полное юридическое право взыскать материальный ущерб, связанный с покупкой больного животного с лица, продавшего данное животное.

Отсутствие у населения и владельцев необходимых знаний о лейкозе, игнорирование существующих правил закупки часто приводят к распространению лейкоза в ЛПХ граждан. Особенно это опасно потому, что в дальнейшем реализация молока из частных подворий в несанкционированных местах торговли не поддается контролю.

Для лейкоза характерна длительность инкубационного (скрытого) периода от 2 до 6 лет.

В сельскохозяйственных предприятиях, КФХ, ЛПХ исследования на лейкоз проводят 2 раза в год (весной – перед выгоном на пастбища и осенью, при постановке скота на зимне-стойловое содержание).

В гематологической стадии лейкоза в ветлаборатории обнаруживают в клетках крови количественные и качественные изменения: увеличение числа лейкоцитов в лейкоцитарной формуле, появляются патологические и незрелые формы клеток. Такие изменения в крови говорят о том, что виру лейкоза начал свое действие, разрушая кроветворную систему организма. В третьей, последней стадии лейкоза у животного появляется клиника: ухудшение общего состояния, снижение продуктивности, нарушения в работе сердечно-сосудистой системы и, что самое характерное для лейкоза, происходит увеличение поверхностных лимфатических узлов ( предлопаточных, надвымянных и коленной складки).

Оздоровление поголовья от вирусного лейкоза крупного рогатого скота проводят разными способами, в зависимости от процента заражения и статуса хозяйства. Все методы оздоровления сводятся к периодическим систематическим исследованиям поголовья с изоляцией больных животных, их убоем, частичной заменой стада.

Методы диагностики лейкоза КРС

Николай ДВОЕГЛАЗОВ, канд. вет. наук, старший научный сотрудник лаборатории лейкоза ИЭВСиДВ СФНЦА РАН

Методы диагностики лейкоза КРС

Прежде всего, напомним, что лейкоз КРС относится к так называемым медленным инфекциям. Группа данных заболеваний имеет ряд характерных проявлений: необычно продолжительный инкубационный период (годы), медленно прогрессирующий характер течения процесса, необычность поражения органов и тканей и неизбежный летальный исход.

При лейкозе выделяют несколько стадий развития болезни. Для каждой из них разработаны свои методы диагностики, которые, с одной стороны, позволяют определить конкретную стадию у животного, с другой – говорить о том, что обнаруженные изменения относятся именно к лейкозу КРС. Если смотреть от момента инфицирования, то выделяют следующие стадии: инкубационную, гематологическую и опухолевую (или терминальную).

Методы диагностики бывают: прижизненные и посмертные. К прижизненным относятся клинический, гематологический, серологический и генно­молекулярный. При падеже или вынужденном убое у животных могут находить характерные для лейкоза изменения при помощи патоморфологических и гистологических исследований.

Начнем рассмотрение методов в хронологическом порядке – по мере того, как они возникали. О болезни узнали (первые случаи регистрировали еще в конце 19 века) потому, что на фермах крупного рогатого скота начал происходить падеж, а в тушах находили изменения внутренних органов и тканей (патоморфологический метод). При попытках понять причины падежа отметили, что до смерти у таких животных внешне есть некоторые отклонения от нормального состояния: увеличенные лимфоузлы, экзофтальм, сильное исхудание и др. (клинический метод). В течение 70 лет исследователи могли регистрировать только подобные проявления болезни, не понимая их причины. Значительно позже, в середине прошлого столетия, обнаружили взаимосвязь между клиническими признаками и изменениями в крови. При лейкозе они имели свою специфику, позволяющую отличать данное заболевание от других патологических состояний инфекционной и незаразной природы (гематологический метод). Спустя еще пару десятилетий, после установления вирусной природы лейкоза и обнаружения противовирусных антител, были разработаны первые методы, которые позволяли выявлять инфицированных животных до появления каких­либо видимых проявлений болезни (серологические методы). А также методы, позволявшие обнаруживать непосредственно сам вирус, – генно­молекулярные, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Далее раскроем суть методов подробнее.

Патоморфологический метод

При вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину пораженных органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с кроветворными или лимфоидными (костный мозг, лимфатические узлы, селезенка), а также другими органами и тканями.

В зависимости от степени распространения опухолевых разрастаний в организме лейкозы подразделяются на системные и опухолевые. При системных лейкозах поражаются одновременно все органы гемо­ и лимфопоэза (лимфатические узлы, селезенка, костный мозг). При опухолевых характерна изначальная очаговость поражения лимфоидной ткани, и в первую очередь лимфатических узлов.

Наиболее распространенными формами лейкоза у крупного рогатого скота являются лимфоидный лейкоз и лимфосаркома, реже встречается лимфогранулематоз и очень редко остальные формы болезни.

При лимфоидном лейкозе у животных в 100 % случаев в опухолевой процесс вовлечена селезенка. Капсула ее обычно напряжена, фолликулы гиперплазированы. В селезенке и лимфатических узлах наблюдаются стирания рисунка за счет диффузной пролиферации лимфоидных клеток различной степени дифференциации. Лимфатические узлы в той или иной степени увеличены. На разрезе поверхность саловидная, серо­белого цвета, часто с очагами кровоизлияний и некроза.

При опухолевых формах лейкоза селезенка и костный мозг остаются обычно без изменений. Лимфатические узлы часто имеют асимметричное увеличение. Капсула шероховатая, сросшаяся с соседними органами и тканями. Поверхность разреза серо­белого, серо­желтого цвета, часто с обширными очагами кровоизлияния и некроза. Постоянно выявляют плотные опухолевые образования различной величины и формы, которые образуют иногда большие конгломераты.

При неклассифицируемом лейкозе регистрируются новообразования в тазовой полости.

В остальных органах и тканях (печени, почках, органах пищеварения, матке, скелетной мускулатуре), которые вовлекаются в опухолевой процесс на поздних стадиях развития заболевания, отмечают диффузные или очаговые серо­белые разрастания различной формы и величины.

Гистологический метод

Суть его в том, что в кусочках органов и тканей больного животного обнаруживают характерные для лейкозного процесса изменения в виде диффузных или очаговых разрастаний из размножающихся, нарушивших нормальное созревание и дифференцировку, кроветворных клеток. При разных формах лейкоза также дополнительно обнаруживают ряд специфичных для них признаков, позволяющих проводить дифференциацию.

Клинический метод

Симптомокомплекс при лейкозе крупного рогатого скота обусловлен функциональными нарушениями и морфологическими изменениями в органах и тканях и зависит от опухолевого поражения той или иной системы органов, а полнота их проявления – от стадии течения лейкозного процесса. В предлейкозном состоянии и в начальной стадии болезни клинические симптомы обычно отсутствуют, сохраняются продуктивность и воспроизводительная функция животного. Первые клинические признаки появляются в развернутой стадии лейкоза и прогрессируют по мере его развития. Переход гематологической (субклинической) стадии в клиническую часто происходит после отела, при интоксикации, вторичной инфекции, на фоне стрессовых воздействий.

Помимо органов кроветворения, часто в патологический процесс вовлекаются другие внутренние органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. Поэтому в клинических симптомах можно выделить специфические, характеризующие лейкоз, и неспецифические, отображающие функциональное нарушение той или иной системы органов вследствие их опухолевых поражений.

Неспецифические симптомы представляют собой расстройства общего характера, которые могут наблюдаться при многих болезнях. Чаще всего они выражаются в ухудшении общего состояния животного, плохом усвоении кормов, отсутствии аппетита, снижении удоя, быстрой утомляемости, недомогании и прогрессирующем исхудании. При поражении желудочно­кишечного тракта наблюдается расстройства пищеварения, ослабление сердечной деятельности, цианоз и желтушность слизистых оболочек, нарушение дыхания, отеки в области подгрудка, живота, вымени и подчелюстного пространства.

При сдавливании нервных стволов конечностей или прорастании лейкозной опухоли в спинномозговой канал отмечается хромота на одну или обе задние конечности и слабость, животное с трудом встает или вообще не поднимается.

Поражение мочевого пузыря или преддверия влагалища сопровождается затруднением выделения мочи, а поражение матки – абортом и яловостью.

Характерные симптомы выражаются в увеличении поверхностных (предлопаточных, околоушных, подчелюстных, надколенных, надвыменных и др.) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфатических узлов, селезенки и печени, в появлении опухолевых разрастаний в различных частях тела, органах и орбитах глаз. Последние обусловливают нередко экзофтальмию (пучеглазие) с нагноением глазного яблока. Довольно часто наблюдается последовательное поражение лимфатических узлов, поэтому размеры их варьируют от грецкого ореха до детской головы.

При лейкозе нередко обнаруживают узлы, которые в норме не прощупываются (околоушные, дополнительные надвыменные, шейные и отдельные подкожные, расположенные в различных частях тела). В области голодной ямки, на грудной клетке, в подгрудке, на ребрах, лопатке обнаруживают мелкие, размером до голубиного яйца подкожные лимфоузлы.

К специфическим клиническим симптомам относится и увеличение селезенки, границы которой легко установить при перкуссии. Степень поражения селезенки зависит от формы болезни. При лимфолейкозе селезенка может быть увеличена в несколько раз и достигать массы 25 кг. Сильное увеличение селезенки сопровождается высоким лимфоцитозом в периферической крови, иногда наблюдают разрыв капсулы и внезапную смерть животного от внутреннего кровотечения.

Клиническую стадию лейкоза часто обнаруживают зимой, в конце стельности и в начале лактации. Это объясняется снижением резистентности организма.

Лейкоз у крупного рогатого скота протекает в большинстве случаев хронически. Острое и подострое течение болезни наблюдается лишь в 5­10 % случаев. Поэтому удельный вес клинических симптомов в диагностике лейкозов невелик.

Наряду с энзоотическим лейкозом крупного рогатого скота имеет место и лейкоз молодняка с нередким опухолевым поражением зобной железы. При этом наблюдают затрудненное дыхание, хрипы и слизистое истечение из носовой полости. Диагноз ставят по увеличенным лимфоузлам.

В редких случаях лейкоз может протекать в кожной форме. На теле животного появляются узелковые припухлости по 2,5 см в диаметре, хорошо заметные на шее, спине, крестце и бедрах. Через несколько месяцев происходит инфильтративное поражение внутренних органов, и животное погибает.

Таким образом, характерные клинические признаки, а также опухолевые поражения органов брюшной и тазовой полостей, устанавливаемые ректальным исследованием, являются достоверными диагностическими признаками лейкоза. Неспецифические симптомы, отражающие опухолевые поражения внутренних органов, только в сочетании с показателями крови приобретают диагностическое значение.

Гематологический метод

Этот метод является одним из основных, позволяющих достоверно поставить прижизненный диагноз на лейкоз. Метод заключается в подсчете количества лейкоцитов в единице объема крови и качественной оценке лимфоидных элементов – лимфоцитов. Изменения оцениваются по лейкозному ключу, составленному с учетом возраста животных. В крови отмечают резкое увеличение уровня лейкоцитов, преимущественно за счет лимфоцитов.

Необходимо отметить, что гематологическому исследованию подвергаются только животные, в сыворотке крови которых серологическим методом обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.

Животных, находящихся в гематологической стадии лейкоза, часто называют больными или гембольными. Таким образом, проводя различие между инфицированными животными с изменениями в крови и без них. Однако подобное разделение более чем условно, потому что и те, и другие являются носителями вируса и никогда от него не освободятся (на данном этапе развития ветеринарной науки) и при этом выступают источниками инфекции для здоровых животных. Следовательно, нахождение таких животных в стаде несет постоянную угрозу для свободных от вируса животных.

Серологические методы

Методы основаны на выявлении в сыворотке крови животных при помощи специальных компонентов тест­систем антител к антигенам вируса лейкоза. Специфические антитела появляются в крови через 1­2 мес. после заражения животного вирусом лейкоза и сохраняются пожизненно.

Существует два основных серологических метода – реакция иммунодиффузии или диффузной преципитации в геле агара (РИД, РДП) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте от 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных – за 30 суток до отела или через 30 после него.

Данные методы обладают высокой специфичностью и достаточной чувствительностью, для того чтобы производить объективную оценку эпизоотической ситуации по лейкозной инфекции, а также осуществлять с их помощью оздоровительную работу на сельхозпредприятиях.

ИФА по отношению к РИД имеет ряд преимуществ: является более высокочувствительным, что позволяет с его помощью выявлять большее число инфицированных животных (дополнительно к РИД может выявлять животных с низким содержанием антител в крови); в ИФА можно наряду с сывороткой крови исследовать молоко, молозиво или сухостойный секрет; может быть автоматизирован; вся постановка занимает несколько часов в отличие от 3 дней, требующихся для проведения РИД.

Генно­молекулярный метод

ПЦР представляет собой метод, проходящий in vitro, при котором происходит экспоненциальное увеличение специфического фрагмента последовательности ДНК. ПЦР позволяет обнаруживать геном как вируса (РНК), так и провирусной ДНК (встроенной в геном клеток хозяина) на самых ранних стадиях инфицирования, еще до появления в организме первых специфических противовирусных антител. Первые ПЦР исследования, направленные на выявление ВЛКРС­провируса у крупного рогатого скота, провели H.M. Naif et al. в 1990 году. Также метод позволяет выявлять животных с низкими, для выявления серологическими методами, титрами антител и у толерантных животных – такие животные появляются при внутриутробном заражении плода в первый триместр стельности, они являются вирусоносителями и источником болезни, но сами не вырабатывают антител против вируса лейкоза (ВЛКРС).

Заключение

На современном этапе борьбы с лейкозом для диагностики заболевания широко применяются серологический и гематологический методы. В отдельных регионах применяют ПЦР. И только повсеместное использование методов ранней диагностики позволяет избегать встречи с клиническими и патоморфологическими проявлениями данного заболевания, которые еще каких­то 50–60 лет назад можно было увидеть довольно часто. Использование только гематологического метода не позволяет осуществлять оздоровительную работу в стаде, т.к. он служит исключительно для выявления животных повышенного риска перехода в опухолевую стадию. Поэтому эффективная борьба с лейкозом должна строиться на своевременной серологической и молекулярной диагностике с разделением стада на группы здоровых и инфицированных особей, с постепенной элиминацией последних.