Исследование экссудата при новообразованиях

В здоровом организме в серозных полостях имеется небольшое количество жидкости, увеличение которой наблюдается при патологических процессах. Выпотные жидкости подразделяются на транссудаты и экссудаты, основное (принципиальное) отличие между которыми заключается в том, что первые образуются без вовлечения в патологический процесс серозных оболочек, а вторые – с вовлечением.

Транссудат - это жидкость, скапливающаяся в серозных полостях тела в результате влияния системных факторов на образование и резорбцию жидкости, а точнее в результате нарушения гидростатического давления (на фоне увеличения проницаемости сосудов при нарушении общего и местного кровообращения) и коллоидно-осмотического давления (вследствие гипопротеинемии и/или нарушения обмена электролитов) в крови, лимфе и серозных полостях. Чаще всего транссудат образуется при следующих патологических процессах:

повышение венозного давления при сердечно-сосудистой недостаточности, заболеваниях почек, циррозе печени (портальная гипертензия);
повышение проницаемости капиллярных сосудов, вызванное различными токсинами, повышением температуры и расстройством питания;
снижение концентрации белка в сыворотке крови (что приводит к снижению коллоидно-осмотического давления, приводящему к образованию отеков и транссудатов);
закупорка лимфатических сосудов (приводит к образованию хилезных транссудатов).

Экссудат - это жидкость, образующаяся в результате поражения серозных оболочек чаще всего из-за увеличения проницаемости расположенных в них (как правило, на фоне воспалительного процесса), а также и при нарушении лимфатического оттока из серозной полости.

Получение выпотных жидкостей (для правильной постановки клинического диагноза и оценки клинической ситуации) осуществляется при пункции серозных полостей в условиях стационара специально обученным медицинским персоналом. Выпот собирается в чистую и при необходимости стерильную посуду. Если получено большое количество выпота, то в лабораторию доставляется часть выпота, но обязательно последняя порция, так как она наиболее богата клеточными элементами. Для предотвращения свертывания выпота, что приводит к обеднению клеточными элементами, можно пользоваться антикоагулянтами (цитрат натрия, ЭДТА). Следует избегать использования в качестве антикоагулянта гепарина, так как он приводит к изменению морфологии и деструкции клеточных элементов. При проведении лабораторного исследования выпотной жидкости решается вопрос принадлежности выпота к транссудату или экссудату. При этом оцениваются физические, химические и микроскопические свойства выпота.

Экссудаты и транссудаты обладают часто различной относительной плотностью, которая измеряется с помощью ареометра (урометра). Установлено, что транссудат имеет плотность от 1,005 до 1,015 г/мл, а экссудат - выше 1,018 г/мл. В транссудате и экссудате различная концентрация общего белка, которая определяется с помощью метода с использованием 3% раствора сульфосалициловой кислоты. Поскольку обычно концентрация белка достаточно высокая, то рекомендуется предварительно развести выпотную жидкость в сто раз. В транссудате содержится белок в концентрации от 5 до 25 г/л. В экссудате концентрация белка обычно более 30 г/л.

Также в экссудате и транссудате различное содержание белковых фракций. Поэтому, рассчитав альбуминово-глобулиновый коэффициент, можно также дифференцировать выпотные жидкости. Альбуминово-глобулиновый коэффициент в диапазоне от 2,5 до 4,0 характерен для транссудата. Альбуминово-глобулиновый коэффициент в диапазоне от 0,5 до 2,0 характерен для экссудата.

Для отличия транссудата от экссудата также используют пробу Ривальта (Rivalta). В цилиндр объемом 100 - 150 мл наливают 100 мл дистиллированной воды, подкисляют ее 2 - 3 каплями концентрированной уксусной кислоты. Затем добавляют 1 - 2 капли исследуемой жидкости. Если образующееся при добавлении выпотной жидкости беловатое облачко (напоминает дым от папиросы, который тянется за падающей каплей) опускается до дна цилиндра, проба положительная. Если помутнения не образуется, или появляется слабая полоска, которая быстро исчезает (2 - 3 минуты), то проба считается отрицательной. Проба Ривальта основана на том, что в выпотных жидкостях содержится соединение глобулиновой природы серомуцин, который дает положительную пробу (то есть происходит денатурация этого белка) со слабым раствором уксусной кислоты. Также в одном из исследований было установлено, что рН реакционной среды определяет, будет ли проба положительной или нет, было показано, что если рН выше 4,6, то проба Ривальта, даже если она была положительной, становится отрицательной. Были определены белки, которые участвуют в пробе Ривальта. Эта группа белков относится системе белков острой фазы: С-реактивный белок, 1 -антитрипсин, 1-кислый гликопротеин, гаптоглобин, трансферрин, церулоплазмин, фибриноген, гемопексин.

При исследовании физических свойств выпотной жидкости определяют цвет, прозрачность, консистенцию. Цвет и прозрачность выпотной жидкости зависят от содержания в ней белка и клеточных элементов. Консистенция зависит от наличия и количества муцина и псевдомуцина. По макроскопическим свойствам и микроскопической картине различают серозные, серозно-гнойные, гнойные, гнилостные, геморрагические, хилезные, хилусподобные, холестериновые выпоты.

Серозные выпоты могут быть как транссудатами, так и экссудатами. Они бывают прозрачные иногда мутные из-за примеси фибрина и клеточных элементов (в этом случае говорят о серозно-фибринозных экссудатах), окрашены в желтоватый цвет различной интенсивности. Микроскопически в серозно-фибринозных экссудатах определяются большое количество лимфоцитов. Такие выпоты наблюдаются при различной патологии, например при туберкулезе, ревматизме, сифилисе и т.д. Серозно-гнойные, гнойные экссудаты мутные, желтовато-зеленые с обильным, рыхлым осадком. Гнойные выпоты наблюдаются при эмпиеме плевры, перитонитах и др. Гнилостные экссудаты мутные, серо-зеленого цвета с резким гнилостным запахом они характерны для гангрены легкого и других процессов, сопровождающихся распадом ткани.

Геморрагические экссудаты мутные, красноватого или буровато-коричневого цвета. При проведении микроскопии в геморрагических экссудатах отмечается большое содержание измененных или неизмененных эритроцитов, что зависит от периода заболевания. Геморрагические экссудаты часто наблюдаются как при новообразованиях, так и при заболеваниях неопухолевой природы, например при травмах, инфарктах легкого, геморрагических диатезах. Хилезные экссудаты мутные, молочного цвета при добавлении эфира просветляются. Они содержат мелкие жировые капли и наблюдаются при разрушении крупных лимфатических сосудов при травмах, абсцессах, опухолях и других патологических состояниях. При этом лимфа из поврежденных лимфатических сосудов попадает в серозную полость и определяет особенность физических, химических и микроскопических свойствах выпотной жидкости.

Хилусподобные экссудаты мутные, имеют молочный цвет и образуются при обильном распаде клеток с признаками жировой дистрофии. Добавление эфира не просветляет либо частично просветляет хилусподобные экссудаты. Такой выпот наблюдается при саркоидозе, туберкулезе, новообразованиях, атрофическом циррозе печени. Холестериновые экссудаты густые, мутные с желтовато буроватым цветом имеют перламутровый блеск. Микроскопически отмечается большое содержание лейкоцитов, кристаллов холестерина, жирных кислот и гематоидина. Подобные экссудаты образуются при осумковывании жидкостей в серозных полостях при хроническом протекании воспалительного процесса и наблюдаются при туберкулезе, злокачественных новообразованиях.

При проведении биохимического исследования выпотной жидкости необходимо одновременно производить забор венозной крови для определения градиента сыворотка/выпотная жидкость для ряда биохимических показателей. Химические свойства серозных жидкостей зависят от биохимических показателей сыворотки крови. Низкомолекулярные соединения в серозных жидкостях находятся в концентрациях близких к сывороточным, концентрация же высокомолекулярных соединений ниже в выпотных жидкостях, чем в сыворотке.

В выпотных жидкостях возможно определение любого биохимического показателя, который определяется в сыворотке крови. Биохимические показатели определяют после центрифугирования выпотной жидкости. Для дифференцировки транссудатов и экссудатов имеет значение отношения биохимических показателей выпотной жидкости к таковым в сыворотке крови (см. таблицу). Современный метод для разделения выпотных жидкостей на транссудат или экссудат включает исследование концентрации общего белка и активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в выпотной жидкости и сыворотке крови пациента ( подробнее).

Концентрация холестерина также отличается в транссудатах и экссудатах. Транссудаты содержат более низкую концентрацию холестерина, чем экссудаты. В экссудатах при злокачественных новообразованиях концентрация холестерина превышает 1,6 ммоль/л. Концентрация глюкозы в серозной жидкости совпадает с ее концентрацией в сыворотке крови. Уровень глюкозы в экссудате определяется гликолитическими свойствами микробов и лейкоцитов. Уровень глюкозы снижается в выпотных жидкостях при новообразованиях и может отражать активность опухолевого процесса. Очень низка концентрация глюкозы в экссудате является плохим прогностическим признаком. Низкий уровень лактата в выпотной жидкости указывает на неинфекционную этиологию процесса (в норме концентрация лактата в серозной жидкости составляет 0,67 - 5,2 ммоль/л). При злокачественных новообразованиях в выпотной жидкости наблюдается высокая концентрация лактата.

Микроскопическое исследование выпотных жидкостей включает исследование нативных препаратов, подсчет цитоза в камере (при необходимости) и исследование окрашенных препаратов для дифференцировки клеточных элементов. При микроскопическом исследовании выпотной жидкости выявляют клеточные и неклеточные элементы. Среди клеточных элементов обнаруживают клетки крови (эритроциты, лейкоциты, гистоицитарные элементы), мезотелиоциты, клетки злокачественных новообразований. Среди неклеточных элементов обнаруживают клеточный детрит (осколки ядер, цитоплазмы и т.д.), капли жира, кристаллы (холестерина, гематоидина, Шарко-Лейден)а. В транссудатах в отличие от экссудатов микроскопически выявляются преимущественно лимфоциты и мезотелиоциты.

Исследование нативных препаратов имеет ориентировочный характер. Можно обнаружить и идентифицировать эритроциты, лейкоциты, опухолевые клетки, мезотелиальные клетки, кристаллические образования. Четкая дифференцировка лейкоцитов, гистиоцитарных элементов, а также мезотелиальных и опухолевых клеток возможна лишь в окрашенных препаратах (исследование выпотных жидкостей в окрашенных препаратах является основным методам микроскопического исследования). Количественное определение содержания клеточных элементов в выпотной жидкости осуществляется в камере Горяева. Для разведения выпота при необходимости пользуются изотоническим раствором хлорида натрия. При необходимости лизиса эритроцитов пользуются гипотоническим раствором хлорида натрия. Определение цитоза может быть использовано для мониторирования проводимого лечения и контроля его эффективности.

Клеточный состав выпотных жидкостей отличается разнообразием. Среди лейкоцитов наиболее часто встречаются нейтрофилы. Нейтрофилы в небольшом количестве присутствуют в выпоте любого характера. Нарастание количества нейтрофилов в выпотной жидкости указывает на неблагоприятный прогноз. При преобладании и увеличении количества нейтрофилов экссудат приобретает гнойный характер. Наличие нейтрофилов с дегенеративными признаками в экссудате, а также нарастание этих признаков свидетельствует о тяжести процесса. Фагоцитарная активность нейтрофилов - благоприятный признак. Лимфоциты в выпотных жидкостях в меньшей степени подвергнуты дегенеративным изменениям, чем нейтрофилы. Экссудаты с преобладанием лимфоцитов наблюдаются при туберкулезном поражении либо при злокачественных новообразованиях. Эозинофилы в выпотной жидкости имеют вид клеток с бисегментарными ядрами и оранжевой гранулярной зернистостью. Эозинофильный характер имеет выпот при количественном содержании эозинофилов более 10% клеточного состава. Эозинофильные выпоты могут наблюдаться при паразитарных заболеваниях, аллергических реакциях, туберкулезном процессе, новообразованиях. На начальных этапах диссеминации злокачественной опухоли по серозным полостям часто наблюдается повышение содержания эозинофилов в выпотных жидкостях. Повышение содержания эозинофилов в выпотных жидкостях наблюдается при повторных исследованиях в случае попадания в серозные полости воздуха либо крови во время проведения медицинских манипуляций или травмах, например при пункции плевральной полости, травматическом гематороксе. Появление и увеличение количества плазматических клеток в выпотной жидкости наблюдается при затяжном течении воспалительного процесса. Плазматические клетки в выпотных жидкостях выглядят так же, как в крови. В выпотной жидкости часто встречаются гистиоциты и макрофаги. Гистиоциты характеризуются разнообразной формой и размерами. Ядро имеет овальную или бобовидную форму с нежной структурой хроматина, цитоплазма может иметь цвет от серовато-голубоватого до базофильного. Макрофаги отличаются от гистиоцитов наличием в цитоплазме признаков фагоцитоза.

Мезотелиоциты - это клетки мезотелия, выстилающего серозную оболочку. Они очень реактивны. Мезотелиоциты могут присутствовать в препарате единичными или в виде скоплений. При патологических процессах могут выявляться дегенеративные, дистрофические и пролиферативные изменения мезотелиальных клеток. Мезотелиоцит имеет диаметр 12 - 30 мкм, округлую или овальную форму, ядро расположено центрально либо слегка эксцентрично, хроматин в ядре расположен равномерно, имеет мелкозернистую структуру, цитоплазма широкая, имеющая цвет от нежно голубого до синего. Клетки злокачественных ново- образований в выпотной жидкости обнаруживаются при первичном (мезотелиоме) или вторичном (прорастание или метастазирование из других органов и тканей) поражении серозной оболочки. В большинстве случаев вопрос о первичном или вторичном поражении серозных оболочек опухолевым процессом решить трудно. Достоверным для диагноза злокачественного новообразования является обнаружение комплексов клеток с выраженными признаками злокачественности. Для подтверждения характера неопластического процесса необходимо заключение цитолога.

Еще фото

Ключевые слова: транссудат, экссудат, выпот, асцит, плеврит

Key words: transudate, exudate, effusion, ascites, pleurisy

Исследование выпотных жидкостей в настоящее время имеет высокую значимость в диагностике патологических состояний. Полученные данные этого исследования позволяют врачу-клиницисту получить информацию о патогенезе образования выпота и корректно организовать лечебные мероприятия. Однако на пути диагностики всегда возникают определенные сложности, способные привести в диагностическую ловушку. Необходимость в данной работе появилась в связи с растущей потребностью в освоении и применении метода исследования выпотных жидкостей в клинике врачами клинической лабораторной диагностики и врачами-цитологами. Поэтому внимание будет уделено как главным задачам врачей-лаборантов – дифференцировать выпот на транссудат и экссудат, так и важнейшей задаче врачей-цитологов – верифицировать клеточный компонент жидкости и сформулировать цитологическое заключение.

Examination of effusion fluids currently has a high significance in the diagnosis of pathological conditions. The findings of this study allow the clinician to obtain information on the pathogenesis of effusion formation, and to correctly organize medical interventions. However, on the path of diagnosis, there are always certain difficulties that can lead to a diagnostic trap. The need for this work has emerged in connection with the growing need for mastering and applying the method of examining exudate fluids in the clinic by physicians of clinical laboratory diagnostics and cytologists. Therefore, attention will be paid, as well as the main tasks of laboratory assistants - to differentiate the effusion to transudate and exudate, and the most important task of cytologists is to verify the cellular component of the fluid and formulate a cytological conclusion.

Сокращения: ЭС – экссудат, ТС – транссудат, Ц – цитология, МК – мезотелиальные клетки.

История вопроса

В данной работе предпринята попытка осветить основы и суть лабораторного исследования выпотных жидкостей.

Общая характеристика

Выпотными жидкостями называются компоненты плазмы крови, лимфы, тканевой жидкости, которые накапливаются в серозных полостях. По общепринятому убеждению, выпот – это жидкость в полостях тела, а в тканях по тому же принципу скапливается отечная жидкость. Серозные полости тела – это узкий промежуток между двумя листками серозной оболочки. Серозные оболочки – это пленки, происходящие из мезодермы, представленные двумя листками: париетальным (пристеночным) и висцеральным (органным). Микроструктура париетального и висцерального листка представлена шестью слоями:

2. пограничная мембрана;

3. поверхностный волокнистый коллагеновый слой;

4. поверхностная неориентированная сеть эластических волокон;

5. глубокая продольная эластическая сеть;

6. глубокий решетчатый слой коллагеновых волокон.

Мезотелий – однослойный плоский эпителий, состоящий из плотно прилегающих друг к другу полигональных клеток. Несмотря на свою эпителиальную форму, мезотелий имеет мезодермальное происхождение. Клетки весьма разнообразны по своим морфологическим свойствам. Можно наблюдать двуядерные и трехъядерные клетки. Мезотелий постоянно секретирует жидкость, выполняющую скользяще-амортизационную функцию, способен к крайне интенсивной пролиферации, проявляет характеристики соединительной ткани. На поверхности МК находится множество микроворсинок, увеличивающих поверхность всей оболочки серозной полости приблизительно в 40 раз. Волокнистый слой соединительной ткани листков серозных оболочек определяет их подвижность. Кровоснабжение серозной оболочки висцерального листка осуществляется за счет сосудов того органа, который она покрывает. А для париетального листка основой системы кровообращения является широкопетлистая сеть артерио-артериолярных анастомозов. Капилляры располагаются сразу под мезотелием. Лимфоотток от серозных оболочек хорошо развит. Лимфатические сосуды сообщаются с серозными пространствами благодаря особым отверстиям – стоматам. По причине этого даже незначительная закупорка дренажной системы может привести к накоплению жидкости в серозной полости. А анатомические свойства кровоснабжения располагают к быстрому возникновению кровотечения при раздражении и повреждении мезотелия.

Клиническая лабораторная диагностика выпотных жидкостей

При лабораторном исследовании решается вопрос принадлежности выпота к транссудату или экссудату, оцениваются общие свойства (макроскопический вид жидкости): цвет, прозрачность, консистенция.

Жидкость, скапливающаяся в серозных полостях без воспалительной реакции, называется транссудатом. Если жидкость собирается в тканях, то имеем дело с отеком (edema). Транссудат может накапливаться в перикарде (hydropericardium), брюшной полости (ascites), плевральной полости (hydrothorax), между оболочками яичка (hydrocele).Транссудат обычно бывает прозрачным, почти бесцветным или с желтоватым оттенком, реже слегка мутноватым из-за примеси слущенного эпителия, лимфоцитов, жира и др. Удельный вес не превышает 1,015 г/мл.

Образование транссудата может быть вызвано следующими факторами.

1. Увеличением венозного давления, которое имеет место при недостаточности кровообращения, заболеваниях почек, циррозе печени. Транссудация является результатом увеличением проницаемости капиллярных сосудов в результате токсического поражения, гипертермии, расстройствами питания.
2. Уменьшением количества белка в крови, осмотическое давление коллоидов уменьшается при снижении альбумина плазмы крови менее 25 г/л (нефротический синдром различной этиологии, тяжелые поражения печени, кахексия).
3. Закупоркой лимфатических сосудов. В этом случае образуются хилезные отеки и транссудаты.
4. Нарушением обмена электролитов, главным образом повышение концентрации натрия (гемодинамическая сердечная недостаточность, нефротический синдром, цирроз печени).
5. Увеличением продукции альдостерона.

Одной фразой охарактеризовать образование транссудата можно так: транссудат возникает, когда гидростатическое или коллоидно-осмотическое давление изменяется в той мере, что жидкость, фильтрующаяся в серозную полость, превышает объем реабсорбции.

Экссудатами называются жидкости, которые накапливаются в полостях тела в результате воспалительного процесса. Образование экссудата вызывается микрофлорой (бактерии, грибы), вирусами, паразитами, попаданием в полость желчи, секрета желудка, поджелудочной железы, содержимого желудочно-кишечного тракта, диссеминацией клеток опухоли по серозным полостям.

Макроскопические характеристики экссудатов позволяют отнести их к следующим видам.

1. Серозный экссудат может быть прозрачным или мутным, желтоватым или бесцветным (что определяется присутствием билирубина), разной степени мутности (рис. 1).

2. Серозно-гнойный и гнойный экссудат – мутная, желтовато-зеленая жидкость с обильным рыхлым осадком. Гнойный экссудат встречается при эмпиеме плевры, перитоните и др. (рис. 2).

3. Гнилостный экссудат – мутная жидкость серо-зеленого цвета с резким гнилостным запахом. Гнилостный экссудат характерен для гангрены легкого и других процессов, сопровождающихся распадом ткани.

4. Геморрагический экссудат – прозрачная или мутная жидкость, красновато- или буровато-коричневого цвета. Количество эритроцитов может быть различным: от небольшой примеси, когда жидкость имеет слабо-розовую окраску, до обильной, когда она сходна с цельной кровью. Наиболее частой причиной геморрагического выпота является новообразование, однако геморрагический характер жидкости большого диагностического значения не имеет, поскольку наблюдается и при ряде неопухолевых заболеваний (травма, инфаркт легкого, плеврит, геморрагический диатез). В то же время при злокачественных процессах с обширной диссеминацией опухоли по серозной оболочке может быть серозный, прозрачный выпот (рис. 3).

5. Хилезный экссудат – мутная жидкость молочного цвета, содержащая во взвешенном состоянии мельчайшие жировые капли. При добавлении эфира жидкость просветляется. Такой выпот обусловлен попаданием в серозную полость лимфы из разрушенных крупных лимфатических сосудов, абсцессом, инфильтрацией сосудов опухолью, филяриозом, лимфомой и др. (рис. 4).

6. Хилусоподобный экссудат – молочно-мутная жидкость, появляющаяся в результате обильного распада клеток с жировым перерождением. Так как кроме жира данный экссудат содержит большое число жироперерожденных клеток, добавление эфира оставляет жидкость мутной или просветляет ее незначительно. Хилусоподобный экссудат характерен для выпотных жидкостей, появление которых связано с атрофическим циррозом печени, злокачественными новообразованиями и др.

7. Холестериновый экссудат – густая желтоватого или буроватого цвета с перламутровым оттенком жидкость с блестящими хлопьями, состоящими из скоплений кристаллов холестерина. Примесь разрушенных эритроцитов может придавать выпоту шоколадный оттенок. На стенках пробирки, смоченной выпотом, видны слепки кристаллов холестерина в виде мельчайших блесток. Такой характер имеет осумковавшийся выпот, который длительно существует (иногда несколько лет) в серозной полости. При определенных условиях – обратном всасывании из серозной полости воды и некоторых минеральных компонентов экссудата, а также при отсутствии притока жидкости в замкнутую полость – экссудат любой этиологии может приобрести характер холестеринового.

8. Слизистый экссудат – содержит значительное количество муцина и псевдомуцина, может встречаться при мезотелиоме, слизеобразующих опухолях, псевдомиксоме.

9. Фибринозный экссудате– содержит значительное количество фибрина.

Встречаются также смешанные формы экссудата (серозно-геморрагический, слизисто-геморрагический, серозно-фибринозный).

В нативной выпотной жидкости необходимо провести исследование цитоза. Для этого сразу после пункции жидкость забирают в пробирку с ЭДТА, чтобы предотвратить ее сворачивание. Цитоз, или клеточность (в данном методе определяется только количество ядросодержащих клеток) проводят по стандартной методике в камере Горяева или на гематологическом анализаторе в режиме подсчета цельной крови. За количество ядерных клеток принимают значение WBC (white blood cell, или лейкоцитов) в тысячах клеток на миллилитр жидкости.

После определения цитоза жидкость можно центрифугировать с получением осадка для микроскопического исследования. Надосадочная жидкость, или супернатант, также может исследоваться на содержание белка, глюкозы и т.д. Однако не все биохимические параметры могут быть определены из жидкости с ЭДТА, поэтому рекомендовано также вместе с взятием выпота в пробирку с антикоагулянтом одновременно брать жидкость и в чистую сухую пробирку (например, центрифужную или для биохимического исследования). Отсюда следует, что для исследования выпотной жидкости в лаборатории необходимо получить материал как минимум в двух емкостях: пробирке с ЭДТА и в чистой сухой пробирке, а жидкость должна помещаться туда непосредственно сразу после эвакуации ее из полости тела.

Исследование осадка производится в лаборатории врачом-лаборантом или врачом-цитологом. Чтобы осадить выпотную жидкость, необходимо ее центрифугировать при 1500 об/мин в течение 15–25 минут. В зависимости от вида выпота образуется различный осадок по количеству и качеству (может быть сероватым, желтоватым, кровянистым, однослойным или двухслойным, изредка трехслойным). В серозном прозрачном выпоте осадка может быть крайне мало, его характер мелкозернистый, цвет серовато-белый. В мутном гнойном или хилезном выпоте с большим количеством клеток осадок образуется обильный, крупнозернистый. В геморрагическом выпоте с большой примесью эритроцитов образуется двухслойный осадок: верхний слой в виде белесоватой пленки и нижний в виде плотного скопления эритроцитов. А при разделении осадка на 3 слоя верхний чаще представлен компонентом разрушенных клеток и детрита. При приготовлении мазков на предметных стеклах материал из осадка берется из каждого слоя и приготавливается не менее 2-х мазков. При однослойном осадке рекомендовано изготавливать не менее 4-х стекол. При скудном количестве осадка готовится 1 мазок с максимальным количеством материала в нем.

Высушенные на воздухе при комнатной температуре мазки фиксируются и окрашиваются азур-эозином по стандартному методу (Романовского-Гимзы, Паппенгейма-Крюкова, Лейшмана, Нохта, Райта и т.д.).

Дифференциальная диагностика транссудатов и экссудатов

Чтобы дифференцировать транссудат от экссудата, можно пользоваться несколькими методами, в основе которых лежит определение физических и биохимических параметров жидкости. Различие основано на содержании белка, типе клеток, цвете жидкости и ее удельном весе.

Транссудат, в отличие от экссудата, — выпот невоспалительного происхождения, причем это жидкость, которая накапливается в полостях тела в результате влияния системных факторов регуляции гомеостаза на образование и резорбцию жидкости. Удельный вес транссудата ниже, чем у экссудатов, и составляет менее 1,015 г/мл против 1,015 и более у экссудатов. Содержание общего белка у транссудатов составляет менее 30 г/л против значения, превышающего 30 г/л у экссудатов. Существует качественная проба, позволяющая верифицировать транссудат от экссудата. Это широко известная проба Ривальта. Она вошла в лабораторную практику более 60 лет назад и занимала важное место в диагностике выпотных жидкостей вплоть до развития биохимических методов и их упрощения и доступности, что сделало возможным перейти от качественного метода пробы Ривальта к количественным характеристикам содержания белка. Однако сейчас многими исследователями предлагается использовать пробу Ривальта для быстрого и достаточно точного получения данных о выпоте. Поэтому необходимо немного описать эту пробу.

В узкий цилиндр со слабым раствором уксусной кислоты (100 мл дистиллированной воды + 1 капля ледяной уксусной кислоты) добавляют по каплям исследуемую выпотную жидкость. Если эта капля, падая вниз, дает тянущуюся за ней полоску помутнения, то жидкость является экссудатом. Транссудаты положительную пробу не дают или дают слабо положительную кратковременную реакцию помутнения.

В табл. 1 приведены параметры, определение которых позволяет верифицировать транссудат от экссудата.

Табл. 1. Дифференциальные характеристики транссудатов и экссудатов

Показания к исследованию экссудатов и транссудатов
Производство пробных проколов с диагностической целью в настоящее время имеет место главным образом при плевральных выпотах. Тем не менее возможность исследования выпота и из брюшной полости и из околосердечной сумки может встретиться нередко в результате прокола или разреза, предпринимаемого с лечебной целью.

Что касается экссудата в полости плевры, то здесь пункция производится у большинства больных, относительно которых возникает подозрение на наличие выпота, ибо исследование выпотной жидкости может дать ценные диагностические указания. С другой стороны, отсутствие жидкости при проколе в случаях, где предполагалось ее наличие, также имеет важное значение.

Техника производства прокола плевры
Для производства прокола плевры применяется 10-граммовый шприц Record и игла длиной около 10 см, достаточно толстая, безукоризненно острая. Выбор места - в зависимости от особенностей случая.

Прокол производится следующим образом. Больной сидит на койке или на столе в перевязочной (чтобы после пункции его можно было сразу уложить, если понадобится). Руки рекомендуется положить на голову, так как при этом получается расширение межреберных промежутков. Определяется место прокола - там, где больше всего выражена тупость и отсутствует дыхание. Обычно пункция производится в VIII или IX межреберье между linea axillaris posterior и linea scapularis. Намеченный участок смазывается йодом. Игла надевается на шприц. Прокол делается в межреберье над верхним краем нижележащего ребра (во избежание повреждения сосудистого пучка, располагающегося по нижнему краю ребра). При прохождении иглы в полость плевры получается своеобразное ощущение, как будто игла после известного напряжения попала в свободное пространство. Нередко исследующий чувствует, что игла довольно долго, с трудом, проталкивается через плотный слой; это ощущение характерно для плевритов, сопровождающихся образованием толстых отложений фибрина и утолщением плевры (так называемые шварты). Полученный экссудат собирается в цилиндр или стакан, а та часть его, которая предназначается для бактериологического исследования, отливается в стерильную пробирку.

Определение общих свойств экссудатов и транссудатов
Цвет жидкости меняется в зависимости от характера выпота и может быть бледно-желтым, зеленоватым, буроватым, буровато-красным, молочно-белым и т. д.

Прозрачность также зависит от характера выпота, т. е. от количества взвешенных в нем форменных элементов. При стоянии в серозных экссудатах появляется сгусток фибрина - в зависимости от количества его то в виде легкого облачка, то - паутинки, то, наконец, большого студенистого свертка, в который может превращаться весь выпущенный выпот.

Консистенция выпота может быть жидкой, полужидкой, густой, студенистой - опять-таки в зависимости от характера его.

Запах в большинстве случаев отсутствует, иногда же встречается гнилостный сероводородный запах, обусловленный присутствием Bact. coll.

Характер выпота определяется путем оценки указанных выше свойств с последующей проверкой при микроскопическом исследовании. По своему характеру экссудаты делятся на: 1) серозные (вернее - серо-фибринозные), главной составной частью которых является сыворотка крови, 2) серозно-гнойные, 3) гнойные, 4) гнилостные, 5) геморрагические, 6) хилезные и хилюсоподобные беловатые, молочновидные экссудаты; хилезные экссудаты получаются вследствие излияния в плевральную полость лимфы при нарушении целости грудного протока; при отстаивании их на поверхности образуется сливкоподобный слой; развитие хилюсоподобных экссудатов зависит от жирового перерождения находящихся в нем форменных элементов.

Физико-химическое исследование экссудатов и транссудатов
Определение удельного веса имеет существенное значение, так как является одним из способов отличить экссудат от транссудата. Удельный вес транссудата колеблется в пределах 1005-1015, тогда как удельный вес экссудатов выше 1015 (обычно выше 1018). Определение производится ареометрическим путем, обычно при помощи урометров. Этот способ требует значительного количества жидкости, которого может иногда не оказаться. В таких случаях можно пользоваться способом Детре (Detre), для которого достаточно 0,5-1,0 см3 жидкости.

Способ основан на том принципе, что капля исследуемой жидкости, опущенная в раствор более легкого удельного веса, опустится в нем на дно, в более концентрированном растворе всплывет и, наконец, в равном по концентрации растворе будет плавать в глубине его. Для определения удельного веса по этому методу в ряд пробирок наливаются растворы поваренной соли различной крепости. Исследуемая жидкость подкрашивается одной каплей метиленовой синьки и набирается в капиллярную пипетку. Затем, держа кончик пипетки по возможности близко к уровню раствора, спускают по одной капле в каждую из пробирок. При этом окажется, что в одних пробирках капля погрузится на дно, в других - всплывет, в равном по концентрации растворе будет плавать, не подымаясь и не опускаясь. Удельный вес раствора поваренной соли в этой пробирке укажет на удельный вес исследуемой жидкости.

Определение количества белка должно производиться во всех случаях, так как оно способствует определению характера полученного выпота: в экссудатах, жидкостях воспалительного характера, белка содержится больше, чем в транссудатах. Обычно считают, что жидкость, содержащая больше 2,5% белка, должна быть сочтена за экссудат, меньше 2,5%-за транссудат. Однако необходимо помнить, что этот диагностический признак не может считаться абсолютным: в некоторых случаях в транссудатах белка встречается до 4%, а с другой стороны заведомые экссудаты содержат иногда белка меньше 2,5%.

Определение производится так же, как и в моче, по способу Роберте-Стольникова или по способу Эсбаха (см. стр. 485). Обычно пользуются последним; при этом исследуемый выпот должен быть разведен предварительно в 10 раз, так как альбуминометр Эсбаха рассчитан на очень малое содержание белка (в промилле, а не в процентах).

Проба Ривальта ( Rivalta ). Выше упоминалось, что по количеству белка еще нельзя судить о природе выпота. Существенную помощь в этом отношении может оказать реакция, открывающая особое белковое тело, присущее только экссудатам, так называемый серозомуцин. Реакция основана на том, что белковое тело выпадает из раствора в уксусной кислоте. Методика состоит в следующем. В прозрачный более или менее высокий сосуд (цилиндр) наливается очень слабый раствор уксусной кислоты (2 капли крепкой уксусной кислоты на 100 см3 воды). Затем в этот раствор опускается по каплям исследуемая жидкость. Если падающие капли целиком растворяются в уксусной кислоте, исследуемая жидкость является транссудатом; если же они оставляют на своем пути ясный белый след в виде облачка, жидкость содержит серозомуцин, выпадающий из раствора, и должна была сочтена за экссудат.

Микроскопическое исследование экссудагов и транссудатов
Для изучения клеточного состава полученной жидкости она подвергается центрифугированию. Для первого препарата капля осадка берется на предметное стекло, накрывается покровным и рассматривается под малым и большим увеличениями. Уже при таком ориентировочном исследовании можно установить наличие тех или иных форменных элементов и их количество. Однако диференцировать различные виды лейкоцитов при этом трудно, поэтому приготовляют второй окрашенный препарат. Для этого капля осадка размазывается равномерно на предметном стекле, высушивается на воздухе, фиксируется метиловым спиртом или смесью спирта с эфиром и окрашивается той или иной кровяной краской - чаще всего Романовского - Гимза - в течение 15-20 минут. Такой препарат рассматривается под иммерсионной системой, которая обеспечивает возможность детального изучения клеток.

Изучение клеточного состава выпота - цитодиагностика - имеет серьезное диагностическое значение.

Эритроциты в небольшом количестве встречаются во всяком выпоте. Значительная часть их может быть отнесена за счет травмы, которая наносится при проколе. Характерно для эритроцитов такого происхождения расположение их в виде монетных столбиков. Большое количество эритроцитов наблюдается при геморрагических выпотах (цинга purpura, новообразования, haematothorax на почве травмы).

Лимфоциты в большом количестве наблюдаются при туберкулезных плевритах; нередко они занимают под микроскопом чуть не сплошь все поля зрения, резко преобладая над другими клеточными элементами. Они же наблюдаются при плевритах другой этиологии в периоде выздоровления. Небольшое количество их встречается и в транссудатах.

Нейтрофилы характерны для нетуберкулезных плевритов, при которых в разгаре заболевания они резко преобладают над другими видами клеток. Но и в начальном периоде туберкулезных плевритов они могут встречаться в большом количестве, лишь позднее, к 7-10-му дню, уступая место лимфоцитам.

Эндотелиальные клетки иногда в огромном количестве содержатся в жидкостях невоспалительного характера - транссудатах, в которых располагаются часто целыми пластами по 8-10 клеток. В экссудатах обычно их немного. Изредка в экссудатах, обусловленных новообразованием, можно встретить огромные клетки с множественными вакуолями в протоплазме, иногда жирно перерожденные с одним или несколькими ядрами, в которых хорошо заметны 2-3 ядрышка. Эти клетки характерны для злокачественных новообразований, но далеко не всегда встречаются при них.

Бактериологическое исследование экссудатов и транссудатов
Бактериоскопия . В серозных экссудатах туберкулезного происхождения бактериоскопически обнаружить туберкулезную палочку можно крайне редко. Поэтому бактериоскопическое их исследование не имеет значения. Экссудаты же при острых кокковых плевритах, особенно гнойные, обязательно окрашиваются по Граму и исследуются под микроскопом в поисках возбудителя.

Посев . Почти все пунктаты обычно исследуются бактериологическим путем посева на соответствующие среды. Производятся посевы на туберкулезную палочку и на обычные возбудители воспаления, из которых чаще всего встречаются стрептококки, стафилококки, диплококки. По отношению к серо-фибринозным экссудатам необходимо помнить, что посев должен быть произведен по возможности скоро, пока не успел образоваться сгусток фибрина, который может увлечь за собой туберкулезные палочки. Результаты посева на туберкулезную палочку определяются только через 1-3 месяца.
Заражение животных. В случаях, где необходимо точное установление туберкулезной этиологии заболевания, при отрицательных данных бактериоскопического исследования и посева производится заражение морских свинок. Результат заражения может быть установлен через длительный срок (от 3 недель до нескольких месяцев).