Хромосомные перестройки при острых лейкозах ольшанская

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Зотова Е. В., Лукьянова А. С., Вальчук М. А., Рымар М. М., Кароль Ю. С.

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ,, том IX, № 2, 2013

Зотова Е. В.1, Лукьянова А. С.1, Вальчук М. А.1, Рымар М. М.1,

Кароль Ю. С.1, Мишарина Ж. А.2, Логинский В. Е.1

ХРОМОСОМНЫЕ ПЕРЕСТРОЙКИ ПРИ ОСТРЫХ ЛИМФОБЛАСТНЫХ ЛЕЙКОЗАХ

Цель исследования — оценить диагностическое и прогностическое значение цитогенетических перестроек у больных ОЛЛ.

Материал и методы. Обследовано 19 больных в возрасте от 23 до 82 лет. Диагноз ОЛЛ устанавливали на основании результатов клинико-гематологических, цитологических и им-мунофенотипических исследований. Образцы лейкемических клеток от больных получали путем аспирационной биопсии костного мозга и при венепункции. Использовали общепринятый метод 24- и 48-часового культивирования клеток костного мозга и/или периферической крови in vitro. Обработку клеток проводили по общепринятой методике, которая включала действие колхицина, гипотонизацию, фиксацию и приготовление препаратов. Анализ метафазных хромосом проводили с применением G-методики дифференциальной окраски. Проводили анализ не менее 20 метафазных пластинок. При анализе и описании кариотипа руководствовались критериями International System for Human Cytogenetic Nomenclature — ISCN, 2009. В части случаев дополнительно применен метод FISH с соответствующими метками.

Результаты. Цитогенетические аномалии различного характера наблюдали у 14 (74 %) из 19 обследованных пациентов. В образцах, полученных от 5 (26 %) больных, обнаружен нормальный кариотип. Полученные результаты анализа кариотипа позволили распределить пациентов с ОЛЛ на три группы риска. Первая группа включала 8 пациентов с неблагоприятными цитогенетическими маркерами, а именно 2 случая с комплексным кариотипом (> 3 аномалий), 2 случая с t(4;11)(q21;q23) и 4 случая с t(9;22)(q34;q11). У 3 из 4 больных с t(9;22)(q34;q11) наличие этой перестройки было подтверждено методом FISH с меткой BCR/ABL DC DF. Вторая группа — 9 пациентов, у которых не было обнаружено значимых цитогенетических маркеров. Это группа с промежуточным или неопределенным прогнозом. В ее состав вошли 4 больных ОЛЛ с редкими (i(7)(q10), t(8; 14)(q24;q11), t(8;14)(q24;q32)) или нетипичными хромосомными аберрациями (ins(1;10)(q22;q23q26)) и с нормальным кариоти-пом (5 случаев). В третью группу вошли 2 пациента с благоприятными цитогенетическими маркерами (гиперплоидный кариотип).

Распределение больных на группы риска позволило подобрать оптимальную тактику их лечения, а именно: интенсивность проводимой терапии, необходимость, назначения ингибиторов тирозинкиназы при ОЛЛ с t(9;22), необходимость проведения трансплантации костного мозга при ОЛЛ с t(4; 11) и t(9;22). Ингибиторы тирозинкиназы были добавлены к высокодозной полихимиотерапии у 2 из 4 обследованных больных Ph-позитивным ОЛЛ, что в одном случае позволило улучить результаты лечения — достичь полной ремиссии с общей выживаемостью в течение 24 месяцев. У больной с t(4;11) проведена трансплантация костного мозга, что позволило быстро достичь ремиссии с длительным периодом безрецидивного выживания (28 мес.).

Выводы. Цитогенетические аномалии различного характера обнаружены у 14 (74 %) из 19 больных ОЛЛ, что совпадает с данными литературы. На основании анализа кариотипа больные классифицированы на группы риска: группа больных с неблагоприятными цитогенетически-

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ

ми маркерами, группа промежуточного риска без значимых маркеров прогноза и группа с благоприятными факторами прогноза, что позволило подобрать оптимальную тактику их лечения.

Таким образом, хромосомные перестройки служат не только одним из главных факторов прогноза течения болезни, но являются основой для выбора более эффективных схем лечения ОЛЛ.

Острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) — гетерогенная группа гемобластозов, развивающихся из самых молодых клеток лимфатического ряда. Эта группа состоит из отдельных подгрупп, каждая из которых в свою очередь гетерогенна.

Клоны клеток с хромосомными аномалиями обнаруживают примерно у 70—80 % пациентов, причем более чем в 30 % случаев это гипердиплоидные клоны, в 10 % — гиподиплоидные, в остальных — псевдодиплоидные.

Острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) гораздо чаще наблюдается у детей и лиц молодого возраста, чем у пожилых. Средний возраст взрослых пациентов составляет около 30 лет. Мужчины болеют чаще, чем женщины.

Прогноз острого лимфобластного лейкоза у взрослых значительно хуже, чем у детей. Это коррелирует с возрастными различиями в частоте характерных аномалий кариотипа, т. е. при остром лимфобластном лейкозе у детей значительно чаще, чем у взрослых, встречаются хромосомные изменения, более благоприятные в прогностическом отношении, и наоборот — реже наблюдаются нарушения кариотипа, ассоциированные с плохим прогнозом. Особенно ярко возрастные различия проявляются при сравнении особенностей кариотипа острого лимфобластного лейкоза у детей и взрослых старше 60 лет.
Определенные особенности кариотипа важны для уточнения диагноза и прогнозирования ответа на терапию.

Хромосомные нарушения, наиболее характерные для острого лимфобластного лейкоза, представлены в таблице. Их частота вычислена S. Heim и F. Mitelman после объединения данных, полученных в разных цитогенетических лабораториях мира — всего около 6000 наблюдений. В таблице приведены не все, а только самые распространенные хромосомные аномалии, обнаруженные при остром лимфобластном лейкозе, но и они демонстрируют выраженную цитогенетическую гетерогенность этого заболевания. Большинство повторяющихся (неслучайных) аномалий наблюдается редко.

Необходимо отметить, что отдельные изменения кариотипа обнаруживают как при остром лимфобластном лейкозе, так и при других лимфоидных опухолях, другие изменения — исключительно при остром лимфобластном лейкозе. К первым относятся, в частности, перестройки хромосомных районов 14q11, 14q32, делеции длинного плеча хромосомы 6 и короткого плеча хромосом 9, 12 и 17. С другой стороны, t(9;22)(q34;q11), t(4;11)(q21;q23), t(1;19)(q23;p13) характерны для ОЛЛ, но не для других лимфопролиферативных заболеваний.

Еще одно общее замечание: В-клеточные лейкозы (в том числе и острые), а также лимфомы отличаются от Т-клеточных по спектру хромосомных изменений. Так, для новообразований В-клеточной природы характерны перестройки, затрагивающие локусы иммуноглобулиновых генов: гена Н-цепей иммуноглобулинов (14q32), L-цепей к (2р12) и h (2q11). В новообразованиях из Т-клеток нередко наблюдаются перестройки, затрагивающие гены Т-клеточных рецепторов (хромосомные участки 14q11, 7р15, 7q34).

Частоты основных хромосомных перестроек, характерных именно для В- или Т-клеточных острых лимфобластных лейкозах, а также гены, вовлеченные в эти перестройки, приведены в таблицах.

Уже отмечалось, что частота отдельных характерных нарушений кариотипа различается при остром лимфобластном лейкозе у детей и взрослых. Это подтверждают данные таблице. Приведем конкретные примеры сначала по структурным изменениям, а затем по числовым.

Структурные аномалии: t(9;22) значительно чаще наблюдается у взрослых, a t(12;21) — у детей, причем первая крайне неблагоприятна в прогностическом отношении, а вторая — наоборот, предвещает хороший ответ на лечение в подавляющем большинстве случаев. Такие структурные аномалии, как перестройки хромосомного района 11q23, ассоциированные нередко с плохим прогнозом, часто наблюдаются у детей до 6 мес, их частота с возрастом понижается; у пожилых людей они редки.

Числовые изменения: клоны клеток с числом хромосом более 50 прогностически благоприятные, встречаются у детей значительно чаще, чем у взрослых: 25—30 и 5 % соответственно.

Числовые изменения кариотипа имеют большое значение для прогнозирования острого лимфобластного лейкоза. Уже отмечалось, что вариант острого лимфобластного лейкоза со значительным увеличением числа хромосом (более 50) имеет относительно благоприятный прогноз: 80—90 % больных переживает пятилетний срок с момента постановки диагноза, однако выявление некторых структурных перестроек в клетках лейкозного клона с такими числовыми нарушениями может ухудшить прогноз.

В отличие от острого лимфобластного лейкоза с гипердиплоидными клонами лейкозы, ассоциированные с гиподиплоией, имеют обычно плохой прогноз: только 30 % больных остается в живых по истечении 2 лет от момента постановки диагноза. Еще более неблагоприятен прогноз при острых лейкозах с так называемым окологаплоидным числом хромосом, при которых каждая клетка содержит 26—28 хромосом. В таких клетках вместо большинства хромосомных пар остается по одному гомологу; сохранено по два гомолога только в 10-й, 14-й, 18-й и 21-й парах.

Неблагоприятен прогноз и в случаях с околотетраплоидными клонами. Следует отметить, что окологаплоидный и околотетраплоидные клоны клеток редко наблюдаются при остром лимфобластном лейкозе — не более 1—2 % случаев.

Остановимся на отдельных структурных аномалиях кариотипа, характерных для острого лимфобластного лейкоза.

Е.В. Флейшман, О.И. Сокова, А.В. Попа, Григорий Анатольевич Цаур , Л.Н. Константинова, О.М. Плеханова, М.В. Стригалева, Е.С. Нохрина, В.С. Немировченко, О.Р. Аракаев

• Кафедра иммунохимии
• Химико-технологический институт

Результат исследований : Вклад в журнал › Статья

• 76.00.00 МЕДИЦИНА И ЗДРАВООХРАНЕНИЕ

• Перечень ВАК

Цитировать

• APA
• Author
• BIBTEX
• Harvard
• Standard
• RIS
• Vancouver

Результат исследований : Вклад в журнал › Статья

T1 - ПЕРЕСТРОЙКИ ХРОМОСОМНОГО РАЙОНА 11Q23 ПРИ ОСТРЫХ МИЕЛОИДНЫХ ЛЕЙКОЗАХ У ДЕТЕЙ

AU - Флейшман, Е.В.

AU - Цаур, Григорий Анатольевич

AU - Константинова, Л.Н.

AU - Плеханова, О.М.

AU - Стригалева, М.В.

AU - Немировченко, В.С.

N2 - Цель. Изучить особенности кариотипа с участием района 11q23, возрастные различия в частоте обнаружения этих хромосомных маркеров при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ) у детей, а также определить их прогностическое значение при использовании протоколов лечения, принятых в ведущих детских гематологических клиниках России. Методы. Хромосомный анализ клеток костного мозга и периферической крови выполнен до начала лечения у 395 детей в возрасте от 0 до 16 лет с первичным ОМЛ. Лечение проводилось в детских гематологических клиниках г. Москвы и Московской области, а также в Областной детской клинической больнице № 1 г. Екатеринбурга. Для оценки прогностического значения различных аномалий хромосомного района 11q23 (ген MLL) было отобрано 300 пациентов, лечившихся по сходным современным программам. Для определения частоты перестроек 11q23/MLL при ОМЛ у пациентов разного возраста были обследованы не только дети, но и взрослые пациенты (n = 212). Результаты. При ОМЛ частота изменений хромосомного района 11q23 превышала 40 % у детей 0-2 лет и понижалась с возрастом, составляя у пациентов старше 40 лет всего 2 %. Отмечена выраженная гетерогенность изменений кариотипа с перестройками 11q23/MLL. Обнаружены как многочисленные транслокации с различными участками других хромосом, так и делеции 11q23. Кроме того, наблюдались разнообразные числовые и структурные дополнительные аномалии кариотипа. Показатели 10-лет -ней безрецидивной (30,4 ± 6,7 %) и общей (35,1 ± 7,0 %) выживаемости при ОМЛ с изменениями района 11q23 (n = 61) были значительно хуже, чем у пациентов группы промежуточного риска (n = 103) - 48,9 ± 5,8 и 43,8 ± 7,5 % соответственно (p = 0,035). Они близки к показателям группы высокого риска (n = 44) - 35,9 ± 8,1 и 38,3 ± 7,6 % соответственно. Не удалось подтвердить данные литературы о том, что t(9; 11) является более благоприятной, а t(6; 11) и t(10; 11 ) менее благоприятными прогностическими маркерами, чем все другие транслокации района 11q23. Наши результаты не подтверждают и негативное влияние на прогноз хромосомных маркеров, дополнительных к транслокациям района 11q23. Заключение. Детей с ОМЛ, у которых обнаружены аномалии хромосомного района 11q23, следует включать в группу высокого риска при лечении по протоколам, применяемым в ведущих гематологических центрах России.

AB - Цель. Изучить особенности кариотипа с участием района 11q23, возрастные различия в частоте обнаружения этих хромосомных маркеров при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ) у детей, а также определить их прогностическое значение при использовании протоколов лечения, принятых в ведущих детских гематологических клиниках России. Методы. Хромосомный анализ клеток костного мозга и периферической крови выполнен до начала лечения у 395 детей в возрасте от 0 до 16 лет с первичным ОМЛ. Лечение проводилось в детских гематологических клиниках г. Москвы и Московской области, а также в Областной детской клинической больнице № 1 г. Екатеринбурга. Для оценки прогностического значения различных аномалий хромосомного района 11q23 (ген MLL) было отобрано 300 пациентов, лечившихся по сходным современным программам. Для определения частоты перестроек 11q23/MLL при ОМЛ у пациентов разного возраста были обследованы не только дети, но и взрослые пациенты (n = 212). Результаты. При ОМЛ частота изменений хромосомного района 11q23 превышала 40 % у детей 0-2 лет и понижалась с возрастом, составляя у пациентов старше 40 лет всего 2 %. Отмечена выраженная гетерогенность изменений кариотипа с перестройками 11q23/MLL. Обнаружены как многочисленные транслокации с различными участками других хромосом, так и делеции 11q23. Кроме того, наблюдались разнообразные числовые и структурные дополнительные аномалии кариотипа. Показатели 10-лет -ней безрецидивной (30,4 ± 6,7 %) и общей (35,1 ± 7,0 %) выживаемости при ОМЛ с изменениями района 11q23 (n = 61) были значительно хуже, чем у пациентов группы промежуточного риска (n = 103) - 48,9 ± 5,8 и 43,8 ± 7,5 % соответственно (p = 0,035). Они близки к показателям группы высокого риска (n = 44) - 35,9 ± 8,1 и 38,3 ± 7,6 % соответственно. Не удалось подтвердить данные литературы о том, что t(9; 11) является более благоприятной, а t(6; 11) и t(10; 11 ) менее благоприятными прогностическими маркерами, чем все другие транслокации района 11q23. Наши результаты не подтверждают и негативное влияние на прогноз хромосомных маркеров, дополнительных к транслокациям района 11q23. Заключение. Детей с ОМЛ, у которых обнаружены аномалии хромосомного района 11q23, следует включать в группу высокого риска при лечении по протоколам, применяемым в ведущих гематологических центрах России.

JO - Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика

JF - Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика

Е.В. Флейшман 1 , О.И. Сокова 1 , А.В. Попа 1 , Г.А. Цаур 2,3,4 , Л.Н. Константинова 1 , О.М. Плеханова 2 , М.В. Стригалева 2 , Е.С. Нохрина 2 , В.С. Немировченко 1 , О.Р. Аракаев 2,3

Для переписки: Елена Вольфовна Флейшман, д-р мед. наук, Каширское ш., д. 24, Москва, Российская Федерация, 115478; тел.: +7(499)323-57-22; e-mail: flesok@yandex.ru

Для цитирования: Флейшман Е.В., Сокова О.И., Попа А.В. и др. Перестройки хромосомного района 11q23 при острых миелоидных лейкозах у детей. Клиническая онкогематология. 2016;9(4):446–55.

РЕФЕРАТ

Цель. Изучить особенности кариотипа с участием района 11q23, возрастные различия в частоте обнаружения этих хромосомных маркеров при острых миелоидных лейкозах (ОМЛ) у детей, а также определить их прогностическое значение при использовании протоколов лечения, принятых в ведущих детских гематологических клиниках России.

Методы. Хромосомный анализ клеток костного мозга и периферической крови выполнен до начала лечения у 395 детей в возрасте от 0 до 16 лет с первичным ОМЛ. Лечение проводилось в детских гематологических клиниках г. Москвы и Московской области, а также в Областной детской клинической больнице № 1 г. Екатеринбурга. Для оценки прогностического значения различных аномалий хромосомного района 11q23 (ген MLL) было отобрано 300 прослеженных пациентов, лечившихся по сходным современным программам. Для определения частоты перестроек 11q23/MLL при ОМЛ у пациентов разного возраста были обследованы не только дети, но и взрослые пациенты (n = 212).

Результаты. При ОМЛ частота изменений хромосомного района 11q23 превышала 40 % у детей 0–2 лет и понижалась с возрастом, составляя у пациентов старше 40 лет всего 2 %. Отмечена выраженная гетерогенность изменений кариотипа с перестройками 11q23/MLL: обнаружены как многочисленные транслокации с различными участками других хромосом, так и делеции 11q23. Кроме того, наблюдались разнообразные числовые и структурные дополнительные аномалии кариотипа. Показатели 10-летней безрецидивной (30,4 ± 6,7 %) и общей (35,1 ± 7,0 %) выживаемости при ОМЛ с изменениями района 11q23 (n = 61) были значительно хуже, чем у пациентов группы промежуточного риска (n = 103) — 48,9 ± 5,8 и 43,8 ± 7,5 % соответственно (p = 0,035). Они близки к показателям группы высокого риска (n = 44) — 35,9 ± 8,1 и 38,3 ± 7,6 % соответственно. Не удалось подтвердить данные литературы о том, что t(9;11) является более благоприятной, а t(6;11) и t(10;11) менее благоприятными прогностическими маркерами, чем все другие транслокации района 11q23. Наши результаты не подтверждают и негативное влияние на прогноз хромосомных маркеров, дополнительных к транслокациям района 11q23.

Заключение. Детей с ОМЛ, у которых обнаружены аномалии хромосомного района 11q23, следует включать в группу высокого риска при лечении по протоколам, применяемым в ведущих гематологических центрах России.

Ключевые слова: острые миелоидные лейкозы у детей, перестройки хромосомного района 11q23/MLL, группы риска.

Получено: 12 мая 2016 г.

Принято в печать: 15 июня 2016 г.

• ISBN: 5-98322-172-8
• 112 страниц
• август 2006
• МедПресс

Издательство:	МедПресс
Дата выхода:	август 2006
ISBN:	5-98322-172-8
Объём:	112 страниц
Обложка:	мягкая

Восточная медицина лечит не болезнь, а человека в целом, восстанавливая его энергетический баланс, направляя движение энергии в ослабленный орган. Мы предлагаем читателю освоить эффективные энергетические практики, дошедшие до нас сквозь века. Данное издание предназначено для тех, кто хочет быть здоровым всегда, в любом возрасте, кто не любит сидеть в бесконечных очередях поликлиник и больниц, кому.

Издательство: Эксмо
Дата выхода: октябрь 2018

Новый сборник прозы Александра Кабакова, как и предыдущий, включает все жанры, кроме разве что романа. Здесь вольная фантазия fiction и почти протокольная достоверность non-fiction, рассказы о неназванных исторических персонажах и реальные истории выдуманных героев, рассуждения на свободные темы и свободные импровизации на темы заданные. Словом, что хочет, то и пишет, а получается всегда современная русская.

Издательство: Время
Дата выхода: декабрь 2018

Новая книга Александра Хинштейна посвящена одной из самых трагичных страниц российской истории - развалу Советского Союза в декабре 1991 года. Это не только попытка беспристрастно разобраться в причинах краха великой страны, это еще и сенсационные свидетельства, документы и фотографии с грифом: "совершенно секретно", полученные из различных архивов России. Главный вопрос, поднимаемый известным.

Издательство: ОЛМА Медиа Групп
Дата выхода: декабрь 2018

УДК: 616.155.392-036-11:575]-037-053.2
Год издания: 2014

Встречаемость перестроек гена MLL при острых лейкозах у детей

Острый лейкоз (ОЛ) - наиболее распространенное злокачественное заболевание в детском возрасте. ОЛ имеет генетическую природу, т.е. возникает и развивает­ся в результате генетических нарушений, происходящих в родоначальной кроветворной клетке. Кариотип лейке­мических клеток является одним из важнейших незави­симых прогностических критериев при ОЛ. Выявление хромосомных аберраций позволяет проводить страти­фикацию пациентов для назначения адресной полихи­миотерапии, а также влияет на исход заболевания.

При лейкозах - как остром лимфобластном (ОЛЛ), так и остром миелобластном (ОМЛ) выделяют груп­пу хромосомных перестроек с участием гена MLL (от mixed lineage leukemia, KMT2a, HRX, Htrx-1, ALL-1), расположенного в локусе 11q23. Перестройки с участи­ем гена MLL можно отнести к наиболее распространен­ным аберрациям при гематологических злокачествен­ных новообразованиях. Они выявляются в 5-10% при ОЛЛ детей и взрослых, ОМЛ, миелодиспластическом синдроме и бифенотипическом лейкозе. Наличием пе­рестроек с вовлечением MLL также характеризуются 80% лейкозов у детей до года и 25% вторичных или вы­званных терапией лейкозов. В настоящее время иден­тифицировано свыше 60 генов-партнеров, участву­ющих в таких транслокациях - AF9, AF6, AF10, AF1, AF4, ENL, ELL и др.

Дети с перестройками гена MLL характеризуются неблагоприятным прогнозом. Хотя появляются данные о том, что прогноз может определяться конкретным ти­пом химерного гена (например, пациенты с MLL-AF9 характеризуются более благоприятным течением забо­левания), в целом перестройки гена MLL относятся к неблагоприятным прогностическим признакам.

Анализ перестроек гена MLL имеет существенное клиническое значение для распределения пациентов с лейкозами по группам риска с целью оптимизации те­рапии с учетом неблагоприятного прогноза транслока­ций MLL, а также для мониторинга минимальной оста­точной болезни, т. е. определения остаточных опухо­левых клеток в организме пациента и предупреждения развития рецидива (возврата) заболевания. Поэтому определение типа перестройки гена MLL является не­обходимым условиям успешной терапии.

Методы определения наиболее распространен­ных химерных онкогенов с вовлечением гена MLL. Для выполнения работы нами использовалось несколь­ко подходов к оценке экспрессии основных перестро­ек гена MLL. При первичном поступлении материа­ла -- костного мозга (КМ) пациентов на момент по­становки диагноза проводилось выявление перестро­ек с использованием коммерческого набора Hemavision (Дания). Данный набор рассчитан на выявление 28 хи­мерных генов, распространенных при острых лейко­зах. Этот набор позволял определять экспрессию генов MLL-AF1, MLL-AFX, MLL-AF4, MLL-AF6, MLL-AF9, MLL-AF10, MLL-ENL, MLL-ELL. Методической осно­вой набора послужила статья N. Pallisgaard et al. Па­раллельно проводился анализ с использованием про­токола BIOMED-1, который подтверждает результаты Hemavision в отношении гена MLL-AF4 и дополнитель­но позволяет выявлять редкие варианты этого химерно­го гена. В настоящее время для определения перестро­ек гена MLL при первичных лейкозах в нашей практике используется метод PMRT-PCR, позволяющий в двух реакциях (18 праймеров) определять экспрессию генов MLL-AF4, MLL-AF6, MLL-AF9, MLL-AF10, MLL-ENL, MLL-ELL. Вышеуказанные подходы явились стандар­том для разработки собственного метода, основанно­го на мультиплексной гнездной ПЦР для определения основных клинически значимых перестроек гена MLL при острых лейкозах у детей (Leukogene) (таблица 1).

За период анализа первичных острых лейкозов для диагностики перестроек с участием гена MLL исполь­зовалось несколько методик, которые позволяли опре­делять экспрессию различного набора генов (таблица 1). Результаты, полученные с применением ПЦР, сопо­ставлялись с данными лаборатории цитогенетики. В ряде случаев при отсутствии экспрессии химерных он­когенов первичные лейкозы пациентов в возрасте до 2 лет анализировались методом флуоресцентной гибри­дизации in situ (FISH).

* PMRT - Andersson, HV - Hemavision (DNA-technology, Denmark) основан на статье Pallisgaard, Biomed -Van Dongen, LG (LeukoGene) - разработан­ный нами в период выполнения работы подход, позво­ляющий определять 23 химерных онкогена при острых лейкозах (2012).

Встречаемость и спектр MLL-перестроек при остром лейкозе у детей. В ходе выполнения работы проводился анализ экспрессии перестроек гена MLL с вовлечением различных генов-партнеров в образцах КМ пациентов с ОМЛ, лечившихся в Республиканском научно-практическом центре детской онкологии, гема­тологии и иммунологии с мая 1999 г. по сентябрь 2012 г.

При рецидивах ОЛ группы были значительно мень­ше, но встречаемость MLL-позитивных (MLL+) ОМЛ составила 34,7%, а MLL+ОЛЛ - 10,6% (таблица 2). От­мечены также единичные случаи других перестроек с участием гена MLL (MLL-AF1q, MLL-AFX, MLL-AF6). Встречаемость различных перестроек гена MLL по­зволяет отнести эту группу хромосомных аберраций к одной из самых распространенных при остром лейкозе.

Из 97 первичных ОМЛ (не включая M3), 31 (31,9%) характеризовался перестройками гена MLL (табли­ца 3). Следует отметить, что в группу без перестроек вошли пациенты с цитогенетическими доказательства­ми наличия перестроек t(8;21), inv(16) или t(16;16). Таким образом, перестройки гена MLL являются одним из наиболее распространенных типов генетических из­менений при ОМЛ (не-M3) у детей.

Анализ спектра и встречаемости генов-партнеров показал, что наиболее распространенными типами ге­нов являются MLL-AF9 (52%) или MLL-AF10 (23%), ко­торые определяются в 75% случаев. По данным зару­бежных исследований, встречаемость MLL-AF9 варьи­ровала в диапазоне от 31,3 до 61,3%, MLL-AF10 - от 6,5 до 33,3%. 2 пациентов (6%) отмечены гены MLL-AF6 и MLL-ENL, в одном случае определялся MLL-ELL, ци­тогенетически идентичный по локализации гену MLL-ENL. В 2 случаях в качестве партнеров выступали гены семейства септинов - SEPT6 и SEPT9, характерные для ОМЛ, в одном - MLLT11 (AF1q). У пациентов с MLL-AF1q, MLL-SEPT6 и MLL-SEPT9 ген-партнер был иден­тифицирован с использованием анализа точки разрыва на уровне геномной ДНК. Дополнительные цитогене­тические изменения присутствуют в 57% MLL+ ОМЛ, при этом трисомия 8 хромосомы, которая рассматрива­ется как самое распространенное дополнительное ци­тогенетическое изменение, встречается в 17,8% случа­ев (5/28).

При ОЛЛ наиболее распространенными химерны­ми генами с вовлечением MLL были MLL-AF4 (1,9%, 9/462) и MLL-ENL (2%, 7/349), встречались также MLL-AF9 (1,15%4/349,) и MLL-AF10 (0,57%, 2/348), не опре­делялись MLL-AF6 (0/365) и MLL-ELL (0/344). Практи­чески все эти гены были характерны для В-линейного ОЛЛ, в 58,8% лейкозные клетки характеризовались про-В подтипом. При Т-линейном ОЛЛ были отмечены только 2 случая экспрессии MLL-ENL.

Частота встречаемости различных перестроек гена MLL позволяет отнести эту группу хромосомных абер­раций к одной из самых распространенных при остром лейкозе как на момент постановки диагноза, так и при рецидиве. К наиболее распространенным генам-партнерам MLL, определяющимся при MLL+ ОЛ, мож­но отнести гены AF4, AF9, ENL, AF10. Структура ге­нов - их частота и спектр при ОЛЛ в нашем исследова­нии соответствует данным литературы [2].

Особенности межлинейной экспрессии пере­строек с вовлечением гена MLL. Встречаемость раз­личных вариантов перестроек с участием гена MLL различается в зависимости от линейной принадлеж­ности бластных клеток. При ОМЛ преимущественно определяются химерные гены MLL-AF9 и MLL-AF10, при ОЛЛ - MLL-AF4 и MLL-ENL. В то время как MLL-AF4 в нашей работе был обнаружен только при ОЛЛ, гены MLL-AF9, MLL-AF10 и MLL-ENL определяются как при ОМЛ, так и при ОЛЛ, что позволяет предполо­жить вклад вторичных изменений или микроокруже­ния в формировании линейности лейкоза. Следует от­метить, что экспрессия MLL-AF4 описана в отдельных случаях при ОМЛ (1,6%, 13/768 MLL+ ОМЛ). Суще­ствует предположение, что линейная специфичность может быть связана с типом химерных транскриптов. Так, ОЛЛ чаще ассоциирован с перестройками MLL-ENL, в ходе которых MLL сливается c N-концевым участком ENL (bcr1 и bcr3), тогда как при ОМЛ чаще выявляются слияния с С-концевой областью (bcr2 и bcr4).

Распределение перестроек гена MLL в пределах различных подтипов острых лейкозов также неравно­мерно. При ОМЛ в 61 и 71 соответственно экспрессия химерных генов MLL-AF9 и MLL-AF10 определялась при M4/M5 подтипах. При ОЛЛ MLL-AF4 экспресси­ровался при про-В подтипе, MLL-ENL определялся как при В- (на разных стадиях), так и при Т-линейном ОЛЛ (кортикальный Т-ОЛЛ).

Таким образом, нами сделаны следующие выводы:

1. Была проанализирована экспрессия 10 химерных генов с вовлечением гена MLL: MLL-AF4, MLL-AF6, MLL-AF9, MLL-AF10, MLL-ENL, MLL-ELL, MLL-AF1q, MLL-AFX, MLL-AF1P, MLL-AF17. Наиболее распро­страненными генами-партнерами при детских лейко­зах являются AF4, AF6, AF9, AF10, ENL, выявляемые в 26% ОМЛ (не-М3) и в 7,3% ОЛЛ. Структура генов - их частота и спектр при ОЛЛ в нашем исследовании соот­ветствует данным литературы.

2. Встречаемость различных вариантов перестроек с участием гена MLL различается в зависимости от ли­нейной принадлежности бластных клеток. При ОМЛ преимущественно определяются химерные гены MLL-AF9 и MLL-AF10, при ОЛЛ - MLL-AF4 и MLL-ENL.

При рецидивах частота встречаемости MLL+ ОЛЛ составила 12% (n=14), а MLL+ ОМЛ - 34,7% (n=23).

Область применения: онкология, гематология, трансфузиология.
Рекомендации по использованию: полученные результаты являются исходными данными для разработки схемы молекулярно-генетической диагностики перестроек гена MLL при лейкозах, а также для создания системы мониторинга остаточных опухолевых клеток.
Предложения по сотрудничеству: результаты, полученные в ходе выполнения проекта, перспективны в плане дальнейшего практического применения, могут быть могут быть использованы в фундаментальных исследованиях по биологии опухолевой клетки, а также внедрены в практику профильных лечебных учреждений. Совместные исследования по тематике. Сотрудничество в области диагностики и исследования биологии лейкозных клеток.