Цитокератин 5 при раке молочной железы что

В новообразованиях человека установлены определенные закономерности экспрессии белков ПФ.

Злокачественные опухоли из эпителия экспрессируют цитокератины, выявляемые и в неизмененных клетках того же гистогенеза. Аденокарциномы в основном экспрессируют цитокератины однослойного эпителия – CK8, CK18, CK19 и часто CK7. В клетках переходноклеточного рака и рака из клеток Меркеля сохраняются биохимические свойства нормальных клеток и выявляется CK20. В анапластических клетках плоскоклеточного рака встречаются CK5, CK6, CK14, CK16 и CK17.

Неэпителиальные опухоли, как правило, цитокератин-негативны, однако некоторые мезенхимальные опухоли, такие как лейомиома, рабдомиосаркома, меланома, шваннома и анапластическая крупно-клеточная лимфома могут экспрессировать цитокератины CK8, CK18, CK19. Эпителиоидная саркома, хондрома и амелобластома экспрессируют цитокератины простого эпителия (CK8, CK18, CK19). Синовиальная саркома и злокачественная мезотелиома экспрессируют цитокератины однослойного эпителия, однако в области расположения дифференцированных клеток возможна экспрессия и высокомолекулярных цитокератинов, характерных для многослойного плоского эпителия.

Цитокератины – важные маркеры для иммуногистохимической классификации недифференцированных опухолей.

Для выявления цитокератинов в опухолевых клетках часто используются так называемые общие цитокератины (клоны AE1/AE3 и MNF 116, Dako) – антитела с широкой специфичностью к различным эпителиям, они могут применяться для дифференциальной диагностики рака с большинством неэпителиальных опухолей. Антитела к общему цитокератину можно использовать для выявления микрометастазов или разбросанных опухолевых клеток в лимфатических узлах и костном мозге, инфильтрирующего роста при раках желудка и молочной железы.

Преимущественная экспрессия цитокератинов многослойного плоского эпителия высокого молекулярного веса, таких как CK5 и CK13, в опухолях характеризует плоскоклеточную дифференцировку и помогает выявитьслабо дифференцированные плоскоклеточные опухоли. CK8, CK18 и CK19 могут экспрессироваться как в аденокарциномах, так и в плоскоклеточных раках, в таких случаях наличие CK5 и отсутствие экспрессии CK7 позволяетпредположить плоскоклеточный рак.

Из внутримозговых опухолей цитокератины экспрессируют: папилломы хориодного сплетения и злокачественные папилломы хориодного сплетения, некоторые менингиомы, в то время как глиомы и низкодифференцированные нейроэктодермальные опухоли CK-негативны.

Антитела к плоскоклеточному эпителию CK5 выявляют базальные эпителиальные и миоэпителиальные клетки и таким образом могут помочь ввыявлении инвазии при раке предстательной и молочной желез.

Для переходноклеточного рака мочевого пузыря экспрессия CK13 и CK20 является хорошим прогностическим признаком. Начало экспрессии CK14 в переходноклеточном раке свидетельствует о плоскоклеточной дифференцировке и неблагоприятном прогнозе. В папиллярных уротелиальных опухолях нормальный (поверхностный) тип экспрессии CK20 характерен для нерецидивирующих опухолей и может быть использован для дифференциальной диагностики между инвазивными и неинвазивными опухолями.

Экспрессия CK7 без коэкспрессии CK20 характерна для аденокарциномы легких, молочной железы, эндометрия и щитовидной железы, а также для немуцинозной аденокарциномы яичников и злокачественной мезотелиомы.

Типичным антигенным паттерном для рака толстого кишечника является экспрессия цитокератинов, характерных для эпителия тонкого кишечника, CK20 и отсутствие экспрессии CK7.

Экспрессия CK7 и CK20 характерна для переходноклеточного рака мочевого пузыря, муцинозного рака яичников и аденокарцином желудка, желчных путей и поджелудочной железы.

В свою очередь, гепатоцеллюлярный рак, рак предстательной железы, почечноклеточный рак и мелкоклеточный рак легких не экспрессируют CK7 и CK20.

С.В. Петров, Н.Т. Райхлин (2000) на первом этапе, при диагностике анапластических опухолей, предлагают использовать 4 типа антител – к виментину, цитокератинам (CK-Pan), белку S-100 (представляющему семейство Са 2+ -связывающих белков, которые обнаружены в клетках различных тканей) и общему лейкоцитарному антигену. Если ИГХ реакция будет везде положительной или везде отрицательной – это расценивается как артефакт. Если положительная реакция отмечается только на виментин, то ставится диагноз саркома (либо семинома). При положительной реакции на виментин и белок S-100, эта опухоль оценивается как липосаркома или меланома. Если положительная окраска на виментин сочетается с реакцией на общий лейкоцитарный антиген – и в редких случаях низкомолекулярные цитокератины, то предполагается наличие лимфомы. При положительной реакции на цитокератины и в виде исключения на белок S-100 – виментин, можно думать о низкодифференцированном раке, герминоме и о других опухолях.

На втором этапе удается разделить цитокератин-позитивные низкодифференцированные опухоли на переходноклеточные, плоскоклеточные, нейроэндокринные раки, аденокарциномы и мезотелиому.

Если положительная реакция на цитокератины, характерные для плоского эпителия (CK5, CK13), сочеталась с положительной реакцией на цитокератины однослойного эпителия (CK8, CK18, CK19, CK7), то это – переходноклеточный рак или некоторые протоковые аденокарциномы. Если иммунофенотип опухоли был CK5 и CK14 (+), а CK8, CK18 (-), то это – плоскоклеточный рак.

При положительной реакции на широкий спектр цитокератинов и виментина, это – мезателиома либо синовиальная или эпителиоидная саркома, либо некоторые раки щитовидной железы, почки и другие редкие раки.

В случае коэкспрессии CK8, CK7, CK18 с общим лейкоцитарным антигеном предполагается анапластическая крупноклеточная лимфома, диагноз которой уточняется с помощью антител к CD-30, антигену ALCL.

Если положительная реакция на CK8, CK18, CK19 и CK7 сочеталась с отрицательной реакцией на CK5, CK6, CK14, CK16 и CK17, то эта опухоль являлась аденокарциномой, которая в дальнейшем тестировалась на раковоэмбриональный антиген (РЭА). Выраженная реакция на РЭА свидетельствует о раке толстого кишечника, желудка, поджелудочной железы, желчных протоков.

Слабая реакция на РЭА наблюдается при раке мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, легкого (при плоскоклеточном крупноклеточном варианте). Отрицательная реакция на РЭА наблюдается в клетках аденокарциномы простаты, почки, печени, яичников, щитовидной железы, эндокриноклеточных раковых опухолях.

Третий этап имеет цель определить органную локализацию анапластической опухоли с иммунофенотипом РЭА (+), CK8, CK18, CK19, CK7 (+) и проводится с помощью органоспецифических маркеров.

При раке простаты выявляется специфический антиген простаты (PSA) и щелочная фосфатаза, специфичная для простаты (PAP), при раке щитовидной железы – тиреоглобулин, в клетках печеночноклеточного рака – альфа-фетопротеин, рака яичника – СА-125, хориоэпителиомы – хорионический гонадотропин. Клетки эндокринных раков экспрессируют нейрон-специфическую энолазу (NSE), хромогранин и др. Положительные на виментин и отрицательные на общий цитокератин (CK-Pan) мягкотканые опухоли являются новообразованиями мезенхимальной природы (лимфомы, саркомы), некоторыми нейрогенными опухолями, либо меланомами.

Анапластические опухоли, дающие окраску на виментин подразделяются на лимфомы (Т- и В-клеточные), меланому (положительная реакция с белком S-100), миогенные саркомы (позитивные реакции на гладкомышечный актин, десмин, миоглобин), ангиосаркомы (реагирующие с антителами к фактору VIII свертывания крови, CD31), злокачественную фиброзную гистиоцитому (экспрессирует альфа-1-антитрипсин, CD68, лизоцим, альфа-1-антихимотрипсин, иногда белок S-100), фибросаркому, реагирует с виментином и CD34).

Дата добавления: 2015-07-24 ; просмотров: 8815 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Оценить уровни экспрессии Cyclin D1 в папилломах молочных желез и папиллярных карциномах и проанализировать типы клеток, которые совместно экспрессируют Cyclin D1 с Cytokeratin 5/6 (CK 5/6) или с Cytokeratin 8/18 (CK 8/18 ).

Обследовано 49 случаев папиллярных поражений, в том числе 36 папиллом и 23 интрацистозных папиллярных карцином. Уровни экспрессии Cyclin D1, CK 5/6 и CK 8/18 оценивали двойным иммуноокрашиванием.

Cyclin D1 высоко экспрессируется в папиллярных карциномах (27,54 ± 15,43%) по сравнению с папиллом (8,81% ± 8,41%, p 37,00%, CK 5 / 6 отрицательный). Кроме того, наши данные свидетельствуют о том, что Cyclin D1 экспрессируется только в клетках рака или клетках-предшественниках, которые совместно иммунизируются с CK 8/18 в папиллярных карциномах и преимущественно с CK 8/18 в папилломах.

Папиллярные опухоли молочной железы состоят из пролиферативных эпителиальных клеток молочной железы, которые вторгаются в просвет протока и образуют фибро-сосудистые стебли, которые могут развиваться в ветвящиеся древовидные структуры. Интрадуктивные папилломы и папиллярные протоковые карциномы in situ (DCIS) являются примерами папиллярных повреждений груди. Несмотря на хорошо описанные гистологические особенности этих двух опухолей, иногда бывает трудно различать их из-за перекрывающихся микроскопических характеристик [1]. Ключевой гистологической особенностью, используемой для определения доброкачественной папилломы из папиллярного DCIS, является наличие миоэпителиальных клеток, которое сохраняется в первом и скудное или отсутствует в последнем. CK 5/6, SMA (гладкомышечный актин) и р63 являются общепринятыми маркерами для дифференциальной диагностики папиллом и папиллярных карцином [2].

В последние годы повышенная экспрессия Cyclin D1 в папиллярных карциномах по сравнению с папилломами привлекла значительное внимание. В нескольких исследованиях сообщалось, что уровни экспрессии Cyclin D1 достаточно чувствительны, чтобы различать эти два типа повреждений [3]. Независимо от того, могут ли эти два типа повреждений различать только уровни экспрессии Cyclin D1, требуется дальнейшее исследование. Более того, механизм, лежащий в основе повышенной экспрессии Cyclin D1 в карциномах молочной железы, остается неизвестным.

Cyclin D1 является регулятором клеточного цикла, который необходим для прогрессирования через фазу G1 и является кандидатом прото-онкогена. Этот белок также был вовлечен в патогенез нескольких типов опухолей человека, включая карциному молочной железы. Насколько нам известно, нет доступных опубликованных исследований относительно экспрессии Cyclin D1 в разных типах клеток молочной железы. Кроме того, использование циклин D1 в одиночку, чтобы сделать дифференциальный диагноз между папилломы и папиллярного рака остается спорным вопросом. В этом исследовании мы стремились оценить экспрессию Cyclin D1 в разных типах клеток и оценить его потенциал для различения папиллом и папиллярных карцином с использованием метода двойного иммуноокрашивания. Клетки, экспрессирующие CK 5/6 или CK 8/18, проявляли бледно-красную или красную окрашенную цитоплазму, тогда как клетки, экспрессирующие Cyclin D1, имели черный образец окраски ядер.

Мы изучили 59 папиллярных повреждений груди (табл. 1) из базы данных отдела патологии 2-й аффилированной больницы Харбинского медицинского университета, в том числе 36 случаев интрадуктальных папиллом и 23 случая внутрикастисто-папиллярной карциномы. Все диагнозы были сделаны с использованием Cytokeratin 5/6, SMA, p63, CD10 и калпонина.

Распределение различных возрастных групп пациентов с папиллярными поражениями

Проводились двойные анализы с иммуноокрашиванием. Ткани были разделены на последовательные срезы (из каждого блока были вырезаны две последовательные секции, в частности, одна для окрашивания Cyclin D1 и CK 5/6 и одна для окрашивания Cyclin D1 и CK 8/18). Первоначальное иммуноокрашивание проводили с использованием антитела Cyclin D1, приобретенного у QuanHui (Пекин, Китай), и антитела Cytokeratin 5/6 (CK 5/6) или Cytokeratin 8/18 (CK 8/18), оба из которых были приобретены у Maxim Био (Фучжоу, провинция Фуцзянь, Китай). Каждое первичное антитело применяли при конечном разведении 1:50. Набор Maxim DouMax Visiontm был приобретен у Maxim Bio, который включал блокирующий раствор эндогенной пероксидазы, неиммунную сыворотку, биотинилированное вторичное антитело, щелочную фосфатазу стрептавидина, BCIP / NBT, амплифер, пероксидазу стрептавидина, буфер AEC, субстрат AEC, AEC Chromogen, гематоксилин , и ClearMount.

Все ткани фиксировали в 10% -ном растворе формалина. Серии с последовательностью в четыре микрона были сформированы из блоков, встроенных в парафин. Для получения эпитопа слайды кипятили в плите в буфере EDTA с pH 9,0 в течение 20 минут. Затем секции инкубировали с первичным антителом Cyclin D1 в течение ночи при 4 градусах Цельсия. Остальные этапы процедуры выполнялись в соответствии с рекомендованным изготовителем протоколом. Секции визуализировали путем инкубации в BCIP / NBT в течение 30 минут при комнатной температуре. Ядра клеток, которые экспрессировали Cyclin D1, были окрашены в черный цвет.

Затем секции обрабатывали Amplifer в течение 10 минут, инкубировали в 10% нормальной сыворотке коз в течение 30 минут при комнатной температуре и инкубировали со вторым первичным антителом к ​​CK 5/6 или CK 8/18 в течение 1 часа при комнатной температуре , Остальные этапы процедур выполнялись в соответствии с рекомендованным изготовителем протоколом. Секции визуализировали, используя коктейль AEC Buffer, AEC Substrate и AEC Chromogen в течение 10 минут при комнатной температуре. Цитоплазма CK 5/6 или CK 8/18-экспрессирующих клеток окрашивалась в светло-красный или красный цвет после окрашивания. Гематоксилин использовался в качестве противозаконного пятна, и поэтому ядра были окрашены сине-пурпурными, если только ядра не были положительными для Cyclin D1: в этих случаях ядра окрашивались в черный цвет.

Затем окрашивание Cyclin D1, CK 5/6 или CK 8/18 классифицировалось как отрицательное или положительное для каждого антитела. Пять полей были выбраны случайным образом при увеличении 400 ×. Количество клеток, экспрессирующих Cyclin D1, и CK 5/6 или CK 8/18, ко-экспрессирующие клетки, количественно определяли — из 200 клеток для каждого выбранного поля. Рассчитана средняя скорость экспрессии Cyclin D1. Данные анализировались с использованием программного пакета SPSS 13.0 (IBM, Armonk, NY, USA) и представлены как X¯ ± SD. Тест Mann-Whitney U использовался для анализа расхождений. P-значения 37,00%). Во время дифференцировки клеток молочной железы различные иммунохимические маркеры появились или исчезли в разные моменты времени. В наших результатах Cyclin D1 был почти исключительно экспрессирован в опухолевых клетках, окрашенных CK 8/18, который является маркером просветных клеток в нормальной груди во время развития в финальный просвет. Поэтому мы заключаем, что Cyclin D1 экспрессируется исключительно в клетках рака или клетках-предшественниках, которые положительно коинфекционированы для CK 8/18 при папиллярных карциномах и преимущественно для CK 8/18 поражения папилломы.

CK 5/6: Цитокератин 5/6; CK 8/18: Цитокератин 8/18; DCIS: проточные карциномы in situ; MaSCs: мультипотентные стволовые клетки молочной железы; SMA: гладкий мускульный актин; CSC: стволовые клетки рака; CIN: Хромосомная нестабильность.

Фонд проекта: Научно-исследовательский фонд для возвращающихся зарубежных китайских ученых, Министерство государственного образования (2009-1001).

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

YW и JZ провели эксперименты и анализ полученных результатов. Все авторы участвовали в разработке исследования, анализе полученных результатов. YW подготовил рукопись. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Мы благодарны Цзинь Лю, Мин-мину Чу и Ке-фэй Ву за отличную техническую помощь в создании секций. Это исследование было поддержано Отделом патологии 2-й аффилированной больницы Харбинского медицинского университета.

В новообразованиях человека установлены определенные закономерности экспрессии белков ПФ.

Злокачественные опухоли из эпителия экспрессируют цитокератины, выявляемые и в неизмененных клетках того же гистогенеза. Аденокарциномы в основном экспрессируют цитокератины однослойного эпителия – CK8, CK18, CK19 и часто CK7. В клетках переходноклеточного рака и рака из клеток Меркеля сохраняются биохимические свойства нормальных клеток и выявляется CK20. В анапластических клетках плоскоклеточного рака встречаются CK5, CK6, CK14, CK16 и CK17.

Неэпителиальные опухоли, как правило, цитокератин-негативны, однако некоторые мезенхимальные опухоли, такие как лейомиома, рабдомиосаркома, меланома, шваннома и анапластическая крупно-клеточная лимфома могут экспрессировать цитокератины CK8, CK18, CK19. Эпителиоидная саркома, хондрома и амелобластома экспрессируют цитокератины простого эпителия (CK8, CK18, CK19). Синовиальная саркома и злокачественная мезотелиома экспрессируют цитокератины однослойного эпителия, однако в области расположения дифференцированных клеток возможна экспрессия и высокомолекулярных цитокератинов, характерных для многослойного плоского эпителия.

Цитокератины – важные маркеры для иммуногистохимической классификации недифференцированных опухолей.

Для выявления цитокератинов в опухолевых клетках часто используются так называемые общие цитокератины (клоны AE1/AE3 и MNF 116, Dako) – антитела с широкой специфичностью к различным эпителиям, они могут применяться для дифференциальной диагностики рака с большинством неэпителиальных опухолей. Антитела к общему цитокератину можно использовать для выявления микрометастазов или разбросанных опухолевых клеток в лимфатических узлах и костном мозге, инфильтрирующего роста при раках желудка и молочной железы.

Преимущественная экспрессия цитокератинов многослойного плоского эпителия высокого молекулярного веса, таких как CK5 и CK13, в опухолях характеризует плоскоклеточную дифференцировку и помогает выявитьслабо дифференцированные плоскоклеточные опухоли. CK8, CK18 и CK19 могут экспрессироваться как в аденокарциномах, так и в плоскоклеточных раках, в таких случаях наличие CK5 и отсутствие экспрессии CK7 позволяетпредположить плоскоклеточный рак.

Из внутримозговых опухолей цитокератины экспрессируют: папилломы хориодного сплетения и злокачественные папилломы хориодного сплетения, некоторые менингиомы, в то время как глиомы и низкодифференцированные нейроэктодермальные опухоли CK-негативны.

Антитела к плоскоклеточному эпителию CK5 выявляют базальные эпителиальные и миоэпителиальные клетки и таким образом могут помочь ввыявлении инвазии при раке предстательной и молочной желез.

Для переходноклеточного рака мочевого пузыря экспрессия CK13 и CK20 является хорошим прогностическим признаком. Начало экспрессии CK14 в переходноклеточном раке свидетельствует о плоскоклеточной дифференцировке и неблагоприятном прогнозе. В папиллярных уротелиальных опухолях нормальный (поверхностный) тип экспрессии CK20 характерен для нерецидивирующих опухолей и может быть использован для дифференциальной диагностики между инвазивными и неинвазивными опухолями.

Экспрессия CK7 без коэкспрессии CK20 характерна для аденокарциномы легких, молочной железы, эндометрия и щитовидной железы, а также для немуцинозной аденокарциномы яичников и злокачественной мезотелиомы.

Типичным антигенным паттерном для рака толстого кишечника является экспрессия цитокератинов, характерных для эпителия тонкого кишечника, CK20 и отсутствие экспрессии CK7.

Экспрессия CK7 и CK20 характерна для переходноклеточного рака мочевого пузыря, муцинозного рака яичников и аденокарцином желудка, желчных путей и поджелудочной железы.

В свою очередь, гепатоцеллюлярный рак, рак предстательной железы, почечноклеточный рак и мелкоклеточный рак легких не экспрессируют CK7 и CK20.

С.В. Петров, Н.Т. Райхлин (2000) на первом этапе, при диагностике анапластических опухолей, предлагают использовать 4 типа антител – к виментину, цитокератинам (CK-Pan), белку S-100 (представляющему семейство Са 2+ -связывающих белков, которые обнаружены в клетках различных тканей) и общему лейкоцитарному антигену. Если ИГХ реакция будет везде положительной или везде отрицательной – это расценивается как артефакт. Если положительная реакция отмечается только на виментин, то ставится диагноз саркома (либо семинома). При положительной реакции на виментин и белок S-100, эта опухоль оценивается как липосаркома или меланома. Если положительная окраска на виментин сочетается с реакцией на общий лейкоцитарный антиген – и в редких случаях низкомолекулярные цитокератины, то предполагается наличие лимфомы. При положительной реакции на цитокератины и в виде исключения на белок S-100 – виментин, можно думать о низкодифференцированном раке, герминоме и о других опухолях.

На втором этапе удается разделить цитокератин-позитивные низкодифференцированные опухоли на переходноклеточные, плоскоклеточные, нейроэндокринные раки, аденокарциномы и мезотелиому.

Если положительная реакция на цитокератины, характерные для плоского эпителия (CK5, CK13), сочеталась с положительной реакцией на цитокератины однослойного эпителия (CK8, CK18, CK19, CK7), то это – переходноклеточный рак или некоторые протоковые аденокарциномы. Если иммунофенотип опухоли был CK5 и CK14 (+), а CK8, CK18 (-), то это – плоскоклеточный рак.

При положительной реакции на широкий спектр цитокератинов и виментина, это – мезателиома либо синовиальная или эпителиоидная саркома, либо некоторые раки щитовидной железы, почки и другие редкие раки.

В случае коэкспрессии CK8, CK7, CK18 с общим лейкоцитарным антигеном предполагается анапластическая крупноклеточная лимфома, диагноз которой уточняется с помощью антител к CD-30, антигену ALCL.

Если положительная реакция на CK8, CK18, CK19 и CK7 сочеталась с отрицательной реакцией на CK5, CK6, CK14, CK16 и CK17, то эта опухоль являлась аденокарциномой, которая в дальнейшем тестировалась на раковоэмбриональный антиген (РЭА). Выраженная реакция на РЭА свидетельствует о раке толстого кишечника, желудка, поджелудочной железы, желчных протоков.

Слабая реакция на РЭА наблюдается при раке мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, легкого (при плоскоклеточном крупноклеточном варианте). Отрицательная реакция на РЭА наблюдается в клетках аденокарциномы простаты, почки, печени, яичников, щитовидной железы, эндокриноклеточных раковых опухолях.

Третий этап имеет цель определить органную локализацию анапластической опухоли с иммунофенотипом РЭА (+), CK8, CK18, CK19, CK7 (+) и проводится с помощью органоспецифических маркеров.

При раке простаты выявляется специфический антиген простаты (PSA) и щелочная фосфатаза, специфичная для простаты (PAP), при раке щитовидной железы – тиреоглобулин, в клетках печеночноклеточного рака – альфа-фетопротеин, рака яичника – СА-125, хориоэпителиомы – хорионический гонадотропин. Клетки эндокринных раков экспрессируют нейрон-специфическую энолазу (NSE), хромогранин и др. Положительные на виментин и отрицательные на общий цитокератин (CK-Pan) мягкотканые опухоли являются новообразованиями мезенхимальной природы (лимфомы, саркомы), некоторыми нейрогенными опухолями, либо меланомами.

Анапластические опухоли, дающие окраску на виментин подразделяются на лимфомы (Т- и В-клеточные), меланому (положительная реакция с белком S-100), миогенные саркомы (позитивные реакции на гладкомышечный актин, десмин, миоглобин), ангиосаркомы (реагирующие с антителами к фактору VIII свертывания крови, CD31), злокачественную фиброзную гистиоцитому (экспрессирует альфа-1-антитрипсин, CD68, лизоцим, альфа-1-антихимотрипсин, иногда белок S-100), фибросаркому, реагирует с виментином и CD34).

Дата добавления: 2015-07-24 ; просмотров: 8020 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Оценить уровни экспрессии Cyclin D1 в папилломах молочных желез и папиллярных карциномах и проанализировать типы клеток, которые совместно экспрессируют Cyclin D1 с Cytokeratin 5/6 (CK 5/6) или с Cytokeratin 8/18 (CK 8/18 ).

Обследовано 49 случаев папиллярных поражений, в том числе 36 папиллом и 23 интрацистозных папиллярных карцином. Уровни экспрессии Cyclin D1, CK 5/6 и CK 8/18 оценивали двойным иммуноокрашиванием.

Cyclin D1 высоко экспрессируется в папиллярных карциномах (27,54 ± 15,43%) по сравнению с папиллом (8,81% ± 8,41%, p 37,00%, CK 5 / 6 отрицательный). Кроме того, наши данные свидетельствуют о том, что Cyclin D1 экспрессируется только в клетках рака или клетках-предшественниках, которые совместно иммунизируются с CK 8/18 в папиллярных карциномах и преимущественно с CK 8/18 в папилломах.

Папиллярные опухоли молочной железы состоят из пролиферативных эпителиальных клеток молочной железы, которые вторгаются в просвет протока и образуют фибро-сосудистые стебли, которые могут развиваться в ветвящиеся древовидные структуры. Интрадуктивные папилломы и папиллярные протоковые карциномы in situ (DCIS) являются примерами папиллярных повреждений груди. Несмотря на хорошо описанные гистологические особенности этих двух опухолей, иногда бывает трудно различать их из-за перекрывающихся микроскопических характеристик [1]. Ключевой гистологической особенностью, используемой для определения доброкачественной папилломы из папиллярного DCIS, является наличие миоэпителиальных клеток, которое сохраняется в первом и скудное или отсутствует в последнем. CK 5/6, SMA (гладкомышечный актин) и р63 являются общепринятыми маркерами для дифференциальной диагностики папиллом и папиллярных карцином [2].

В последние годы повышенная экспрессия Cyclin D1 в папиллярных карциномах по сравнению с папилломами привлекла значительное внимание. В нескольких исследованиях сообщалось, что уровни экспрессии Cyclin D1 достаточно чувствительны, чтобы различать эти два типа повреждений [3]. Независимо от того, могут ли эти два типа повреждений различать только уровни экспрессии Cyclin D1, требуется дальнейшее исследование. Более того, механизм, лежащий в основе повышенной экспрессии Cyclin D1 в карциномах молочной железы, остается неизвестным.

Cyclin D1 является регулятором клеточного цикла, который необходим для прогрессирования через фазу G1 и является кандидатом прото-онкогена. Этот белок также был вовлечен в патогенез нескольких типов опухолей человека, включая карциному молочной железы. Насколько нам известно, нет доступных опубликованных исследований относительно экспрессии Cyclin D1 в разных типах клеток молочной железы. Кроме того, использование циклин D1 в одиночку, чтобы сделать дифференциальный диагноз между папилломы и папиллярного рака остается спорным вопросом. В этом исследовании мы стремились оценить экспрессию Cyclin D1 в разных типах клеток и оценить его потенциал для различения папиллом и папиллярных карцином с использованием метода двойного иммуноокрашивания. Клетки, экспрессирующие CK 5/6 или CK 8/18, проявляли бледно-красную или красную окрашенную цитоплазму, тогда как клетки, экспрессирующие Cyclin D1, имели черный образец окраски ядер.

Мы изучили 59 папиллярных повреждений груди (табл. 1) из базы данных отдела патологии 2-й аффилированной больницы Харбинского медицинского университета, в том числе 36 случаев интрадуктальных папиллом и 23 случая внутрикастисто-папиллярной карциномы. Все диагнозы были сделаны с использованием Cytokeratin 5/6, SMA, p63, CD10 и калпонина.

Распределение различных возрастных групп пациентов с папиллярными поражениями

Проводились двойные анализы с иммуноокрашиванием. Ткани были разделены на последовательные срезы (из каждого блока были вырезаны две последовательные секции, в частности, одна для окрашивания Cyclin D1 и CK 5/6 и одна для окрашивания Cyclin D1 и CK 8/18). Первоначальное иммуноокрашивание проводили с использованием антитела Cyclin D1, приобретенного у QuanHui (Пекин, Китай), и антитела Cytokeratin 5/6 (CK 5/6) или Cytokeratin 8/18 (CK 8/18), оба из которых были приобретены у Maxim Био (Фучжоу, провинция Фуцзянь, Китай). Каждое первичное антитело применяли при конечном разведении 1:50. Набор Maxim DouMax Visiontm был приобретен у Maxim Bio, который включал блокирующий раствор эндогенной пероксидазы, неиммунную сыворотку, биотинилированное вторичное антитело, щелочную фосфатазу стрептавидина, BCIP / NBT, амплифер, пероксидазу стрептавидина, буфер AEC, субстрат AEC, AEC Chromogen, гематоксилин , и ClearMount.

Все ткани фиксировали в 10% -ном растворе формалина. Серии с последовательностью в четыре микрона были сформированы из блоков, встроенных в парафин. Для получения эпитопа слайды кипятили в плите в буфере EDTA с pH 9,0 в течение 20 минут. Затем секции инкубировали с первичным антителом Cyclin D1 в течение ночи при 4 градусах Цельсия. Остальные этапы процедуры выполнялись в соответствии с рекомендованным изготовителем протоколом. Секции визуализировали путем инкубации в BCIP / NBT в течение 30 минут при комнатной температуре. Ядра клеток, которые экспрессировали Cyclin D1, были окрашены в черный цвет.

Затем секции обрабатывали Amplifer в течение 10 минут, инкубировали в 10% нормальной сыворотке коз в течение 30 минут при комнатной температуре и инкубировали со вторым первичным антителом к ​​CK 5/6 или CK 8/18 в течение 1 часа при комнатной температуре , Остальные этапы процедур выполнялись в соответствии с рекомендованным изготовителем протоколом. Секции визуализировали, используя коктейль AEC Buffer, AEC Substrate и AEC Chromogen в течение 10 минут при комнатной температуре. Цитоплазма CK 5/6 или CK 8/18-экспрессирующих клеток окрашивалась в светло-красный или красный цвет после окрашивания. Гематоксилин использовался в качестве противозаконного пятна, и поэтому ядра были окрашены сине-пурпурными, если только ядра не были положительными для Cyclin D1: в этих случаях ядра окрашивались в черный цвет.

Затем окрашивание Cyclin D1, CK 5/6 или CK 8/18 классифицировалось как отрицательное или положительное для каждого антитела. Пять полей были выбраны случайным образом при увеличении 400 ×. Количество клеток, экспрессирующих Cyclin D1, и CK 5/6 или CK 8/18, ко-экспрессирующие клетки, количественно определяли — из 200 клеток для каждого выбранного поля. Рассчитана средняя скорость экспрессии Cyclin D1. Данные анализировались с использованием программного пакета SPSS 13.0 (IBM, Armonk, NY, USA) и представлены как X¯ ± SD. Тест Mann-Whitney U использовался для анализа расхождений. P-значения 37,00%). Во время дифференцировки клеток молочной железы различные иммунохимические маркеры появились или исчезли в разные моменты времени. В наших результатах Cyclin D1 был почти исключительно экспрессирован в опухолевых клетках, окрашенных CK 8/18, который является маркером просветных клеток в нормальной груди во время развития в финальный просвет. Поэтому мы заключаем, что Cyclin D1 экспрессируется исключительно в клетках рака или клетках-предшественниках, которые положительно коинфекционированы для CK 8/18 при папиллярных карциномах и преимущественно для CK 8/18 поражения папилломы.

CK 5/6: Цитокератин 5/6; CK 8/18: Цитокератин 8/18; DCIS: проточные карциномы in situ; MaSCs: мультипотентные стволовые клетки молочной железы; SMA: гладкий мускульный актин; CSC: стволовые клетки рака; CIN: Хромосомная нестабильность.

Фонд проекта: Научно-исследовательский фонд для возвращающихся зарубежных китайских ученых, Министерство государственного образования (2009-1001).

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

YW и JZ провели эксперименты и анализ полученных результатов. Все авторы участвовали в разработке исследования, анализе полученных результатов. YW подготовил рукопись. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Мы благодарны Цзинь Лю, Мин-мину Чу и Ке-фэй Ву за отличную техническую помощь в создании секций. Это исследование было поддержано Отделом патологии 2-й аффилированной больницы Харбинского медицинского университета.