Анализ на лейкоз методом ифа

Срок исполнения

Исследуемый материал

Метод определения

Вирус иммунодефицита кошек (FIV)

Вирус иммунодефицита кошек (Feline Immunodeficiency Virus, FIV) — это оболочечный вирус, принадлежащий роду Lentivirus семейства Retroviridae. Вирус поражает домашних и диких кошек повсеместно. Как и вирус иммунодефицита человека, FIV вызывает хроническую персистирующую инфекцию, которая у некоторых кошек становится причиной иммунодефицита.

FIV, как и другие ретровирусы, неустойчив к действию факторов внешней среды (выживает вне организма хозяина в течение нескольких минут) и быстро инактивируется дезинфектантами. FIV в. высокой концентрации содержится в слюне, основным путем передачи инфекции являются укусы больных животных. Имеются сведения о трансплацентарной передаче, передаче при родах, а также с молоком. В экспериментальных условиях эти пути передачи не являются значимыми в случае спонтанной инфекции, а у котят, инфицированных таким образом, может не происходить развития болезни. Данных о передаче инфекции половым путем нет, но FIV обнаруживается в сперме. Возможна передача вируса при переливании крови от инфицированного животного.

Средний возраст животных, в котором чаще всего диагностируется инфекция, составляет от шести до восьми лет (от 80 до 90% кошек). Коты бывают серопозитивными в 4,7 раза чаще, чем кошки. Содержание животных в помещении является фактором, снижающим вероятность передачи, но не исключает ее полностью.

Основной мишенью для FIV являются CD4+ . Однако вирус также поражает CD8+ , , макрофаги, дендритные клетки, клетки микроглии и астроциты. Влияние вируса на иммунную систему комплексное, до конца не изучено и включает как иммуносупрессию, так и активацию иммунитета.

Существуют три фазы болезни: острая (первичная), субклиническая и терминальная, хотя у спонтанно инфицированных кошек могут наблюдаться не все фазы. После инокуляции происходит репликация вируса в лимфоидной ткани. Через две недели после инфицирования отмечается виремия с высокой концентрацией вируса. Пиковые значения фиксируются через 8–12 недель после инфицирования. При этом наблюдается снижение концентрации CD4+ и CD8+ в периферической крови. Для некоторых кошек в острой фазе болезни характерны летаргия, лихорадка, анорексия, диарея, стоматит и/или лимфаденопатия.

В субклинической фазе болезни происходит восстановление уровня CD4+ , а концентрация вируса в плазме крови снижается до очень низкого уровня. Субклиническая инфекция у кошек может сохраняться в течение нескольких лет и даже на протяжении всей жизни. Эта фаза болезни не аналогична латентной инфекции, поскольку размножение вируса происходит в незначительном объеме. Наблюдается снижение показателя соотношения CD4+ : CD8+ ; у некоторых кошек отмечается гиперглобулинемия, вызванная гиперактивацией . Скорость прогрессирования субклинической фазы определяется такими факторами, как штамм вируса, наличие коинфекций другими патогенами, функциональным состоянием иммунной системы хозяина. У некоторых животных данные изменения в итоге приводят к развитию терминальной фазы заболевания, которая характеризуется клиническими симптомами оппортунистических инфекций, неоплазией, миелосупрессией и неврологическими симптомами. Эта фаза болезни чаще всего диагностируется у спонтанно инфицированных кошек. Однако у многих инфицированных животных никогда не происходит развития клинических симптомов даже при низком уровне CD4+ . Терминальная фаза инфекции FIV обычно сопровождается умеренным или тяжелым периодонтитом, лимфоплазмоцитарным стоматитом, гингивитом или одонтокластическими резорбтивными поражениями, которые могут быть вызваны опортунистическими бактериальными или вирусными инфекциями.

У многих кошек инфекция FIV диагностируется при проведении скрининга. Скрининг осуществляется с использованием методов, позволяющих обнаружить антитела к FIV, ввиду их доступности, чувствительности и быстроте проведения анализа.

При получении положительных результатов роль FIV в. развитии тех или иных симптомов может быть неочевидной. Однако вирус может быть причиной лимфомы, тяжелого стоматита, инфекций, вызванных другими патогенами (например, микоплазмами).

Для диагностики FIV доступны серологические методы исследования, направленные на обнаружение антител к вирусу иммунодефицита (иммунохроматографический анализ ‒ ИХА, ImmunoSorbent Assay ‒ ELISA). Также используется и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для выявления заболеваний кошкам рекомендуется проводить дополнительные обследования (общий и биохимический анализ крови, анализ мочи и фекалий, тестирование на FeLV, ПЦР для исключения гемотропных микоплазм).

Для диагностики инфекции FIV был разработан ряд ПЦР (в реальном времени с обратной транскрипцией), с помощью которых обнаруживаются вирусная РНК, провирусная ДНК или РНК и провирусная ДНК в образцах периферической крови. Наиболее широкое применение нашла ПЦР, выявляющая провирусную ДНК в режиме реального времени. В сравнении с серологическими методами исследования чувствительность ПЦР может быть ниже (

Код	Наименование услуг	Цена, руб.	Доступность экспресс	Ед. измер.	Материалы	Заказать
4293	АТ к вирусу лейкоза КРС (ИФА)	600 p (Время исполнения 3-5 дней)	1 исслед.	S P N V C

Цель исследования:
Тест предназначен для выявления в организме крупного рогатого скота антител к вирусу лейкоза КРС.
Преимущество данного теста в том, что есть возможность диагностировать антитела в сливных пробах молока от коров.
Результат оценивается в сравнении с пороговым коэффициентом = 1,0. Образцы считаются положительными (т.е. содержащими антитела к вирусу лейкоза) при значении оптической плотности больше величины порогового коэффициента

Диагностическая значимость:
Тест должен использоваться для подтверждения результатов, полученных экспресс методами, а также для верификации сомнительных результатов, полученных другими методами, не основанными на определении активности антител (например ПЦР).

Метод исследования:
Сендвич-вариант твердофазного иммуноферментного анализа;
Принцип непрямого варианта ИФА заключается в выявлении комплекса, образованного антигеном, иммобилизованным с помощью моноклональных антител на поверхности лунок полистиролового планшета и специфическими антителами, содержащимися в пробах сыворотки крови или молоке крупного рогатого скота. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым конъюгатом моноклональных антител к IgG крупного рогатого скота с пероксидазой и обнаруживается по изменению окраски раствора в результате химических превращений субстрата и хромогена. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации специфических антител в исследуемой пробе.

Требования к взятию материала: 1. Сыворотка. Кровь в пробирке для биохимии (с активатором свертывания или гранулами) или пустой пробирке - мин. объем 1 мл. Сыворотка- мин.объем 150 мкл. Без признаков гемолиза и бактериальной контаминации. 2. Плазма. Кровь в пробирке с ЭДТА - мин.объем 1 мл, или плазма - мин. объем 150 мкл. Без признаков гемолиза и бактериальной контаминации 3. Молоко, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. Рекомендовано брать из обмытого вымени в чистую (по возможности стерильную) посуду 4. Молоко, сливные (пулированные) пробы – допустимо до 50 индивидуальных образцов в пуле, минимальный объем индивидуального образца – не менее 5мл. Пул формируется из РАВНЫХ объемов индивидуальных образцов. 5. Молозиво, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. 6. Секрет вымени сухостойных коров, индивидуальные пробы. Объем не менее 5 мл. Стабильность антител в пробах крови и молоке: Допускается хранение образцов при температуре +2-+8 ⁰С в течение 72 ч.

Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, которая протекает бессимптомно или проявляется лимфоцитозом и злокачественными разрастаниями клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли. Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является РНК–содержащий вирус семейства Retroviridae, классифицированный по морфологическим признакам как онковирус типа С млекопитающих, местом обитания и размножения которого являются лимфоциты. Клинические признаки. В настоящее время нет пород крупного рогатого скота, абсолютно устойчивых к заражению вирусом лейкоза КРС и заболеванию лейкозом. Различают две формы клинического течения болезни: энзоотическую и спорадическую. Энзоотический лейкоз поражает взрослых (5—8 лет) животных и протекает с длительным латентным периодом (до нескольких лет), который характеризуется стойким лимфолейкозом без клинических признаков болезни. Терминальная стадия сопровождается снижением массы тела, молочной продуктивности, увеличением лимфоузлов и заканчивается смертью. Экономический ущерб очень высокий. Спорадический лейкоз встречается редко и в экономическом отношении малоактуален. Поражается молодняк до трех лет. Болезнь протекает в трех формах: ювенальной, тимусной и кожной. Локализация вируса. Вирус локализуется в лимфоидных клетках разных органов, где сохраняется пожизненно (персистирует). В инфицированных лимфоцитах в форме провируса (непродуктивное состояние) вирус защищен от действия вируснейтрализующих антител и может передаваться потомству во время деления клеток. Провирус может изменять экспрессию генов клетки, что приводит к ее трансформации и развитию опухолевой стадии лейкоза. Постоянным признаком инфекции служит продукция специфических антител. Источник инфекции — больные животные. Возбудитель передается со всеми секретами и экскретами, содержащими зараженные вирусом лейкоциты (кровь, молоко, молозиво, сперма, носовая и влагалищная слизь, слюна). Чаще всего вирус передается с кровью. Наибольшую опасность с точки зрения распространения инфекции представляют животные с персистентным лимфоцитозом, у которых доля инфицированных лимфоцитов в периферической крови значительно выше, чем у животных инфицированных, но не достигших гематологической стадии заболевания. Основной путь передачи инфекции в естественных условиях через контаминированные вирусом инъекционные иглы, хирургические инструменты и т. д. при проведении санитарно-ветеринарных мероприятий. Кроме того, вирус может передаваться трансплацентарно (хромосомная или экстрахромосомная трансмиссия) от матери к плоду, алиментарно через молоко и молозиво, а также половым путем через инфицированную сперму. Распространяться инфекция может и кровососущими насекомыми. Метод ИФА позволяет обнаружить специфические антитела у инфицированных животных, начиная с 6-месячного возраста и старше (телята, выпаиваемые молозивом и молоком инфицированных коров, могут получать материнские антитела, которые сохраняются до 6 мес, следовательно при применении серологических методов исследования в этом возрасте могут быть получены ложноположительные результаты). Используется для быстрого скрининга стада на наличие инфицированных животных (допускается исследование в группах со смешиванием сывороток максимум от 10 голов), а так же для подтверждения результатов ПЦР в периоды, когда уровень провирусной ДНК минимален.

Я предлагаю продолжить эту тему и более подробно рассмотреть один из методов диагностики – иммуноферментный анализ (ИФА). Кто еще не читал статью про лейкоз коров, немедленно переходите по ссылке, чтобы понять, о чем мы тут рассказываем.

ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного и количественного выявления разнообразных низкомолекулярных соединений, вирусов и прочих.

Давайте разложим всё по полочкам доступным языком!

Иммунологический метод диагностики основан на специфической реакции антигенов с антителами. Данный метод используется для определения групп крови, диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний, распознавания аллергии.

То есть это непосредственно серологические исследования ( изучение сыворотки крови).

Антиген – это чужеродная молекула в организме.

Антитело – особый вид белков в организме, которые имеют избирательную способность связываться с антигенами и блокировать их.

Данный метод анализа набирает популярность среди молочных хозяйств. Так как он опирается на современную иммунохимию и химическую энзимологию.

Энзимология – раздел биохимию изучающий структуру ферментов.

Ферменты – вещества, ускоряющие химические реакции.

Метод ИФА по сравнению с РИД является наиболее чувствительным способом выявления ВЛКРС. Особенно на ранних стадиях.

В Новгородской области для выявления вирусоносителей используется серологический метод диагностики РИД, так как он является самым доступным для сельхоз товаропроизводителей.

К минусам РИД можно отнести невозможность автоматизации при массовых исследованиях и в связи с этим долю субъективизма в результатах (человеческий фактор). Диагностика по ИФА это исключает.

Конечно тем хозяйствам, которые хотят оздоровить свое стадо и быть всегда благополучными будут, рекомендуется проводить диагностику по ИФА.

Важно помнить, что заболевание выгоднее предупредить, чем потом заниматься лечением.

К тому же еще одним плюсом иммуноферментного анализа является то, что есть возможность диагностировать молоко от коров. А это существенно дешевле, чем цена одной пробы на РИД.

С лейкозом необходимо бороться современными методами.

Я планирую данный метод диагностики внедрить в хозяйство, где работаю. Как это будет выглядеть, не могу сказать. Рекомендую подписаться на обновления блога, чтобы не пропустить свежей и актуальную информацию.

Но плюсы очевидны! При взятии крови на РИД животное получает стресс, при ИФА способе такого не будет. Можно исследовать (танкерное) сборное молоко.

До встречи на страницах блога о молочном скотоводстве.

У инфицированных ВБЛ животных в крови циркулируют антитела к нескольким структурным белкам вируса, однако диагностическое значение имеют антитела против gp51 и р24 ВБЛ [61]. Количественное соотношение антител против р24 и gp51 могут коррелировать со стадией инфекционного процесса, но при этом антитела к gp51 появляются раньше и содержатся в более высоком титре. Следовательно, серологические реакции, направленные на выявление aHTH-gp51 антител, по своей чувствительности будут превосходить аналоги, в которых используется антиген р24 [17, 16, 64, 15]. Канадские ученые С. Simard et al. (2000) в сравнительном аспекте изучали РИД и ИФА в диагностике лейкоза крупного рогатого скота. Авторы утверждают, что ИФА-тест с использованием антигена р24 менее чувствителен, чем даже РИД, и в 5,13% случаев показал ложноотрицательные результаты. Исходя из результатов исследований вышеназванных авторов, ИФА-тест с использованием gp51 был признан как отрицательный тест в серодиагностике лейкоза в Канаде [168].

Несмотря на то что РИД остается одним из основных диагностических методов, именно ИФА широко используют в Национальных программах по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота во многих странах Западной Европы и Америки. Практическая и диагностическая эффективность ИФА нашла широкое освещение в литературе [6, 79, 28, 18, 25, 174, 168, 153, 111, 101].

Метод ИФА обладает рядом значительных преимуществ: более высокая, чем в РИД, чувствительность и специфичность, возможность автоматизации процесса и сокращения времени анализа. Сравнение результатов РИД и ИФА показало, что последний можно эффективно применяться для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Чувствительность ИФА, испытанного в лабораториях Германии в диагностике лейкоза крупного рогатого скота, составляла в среднем 97,6%, что в 4 раза выше РИД. Специфичность ИФА равнялась в среднем 98,1%. Методы ИФА позволяют выявить антитела в титрах, в 10-100 раз меньших, чем обнаруживает РИД [46]. Кроме того, методом твердофазного иммуноферментного анализа положительно реагирующие пробы выявляются на 30-45 дней раньше с момента заражения, чем в РИД [26].

О высокой информативности ИФА проб молока в диагностике лейкоза пишут V.K. Nguyen, R.F. Maes (1993), которые исследовали 375 проб сыворотки крови и 150 проб молока от инфицированных ВБЛ коров [153]. J.M. Sargeant et al. (1997) изучали значимость ИФА сборного молока в определении статуса стад коров по лейкозу. Они исследовали 97 стад с различным количеством поголовья животных и установили, что ИФА позволяет обнаруживать наличие анти-ВБЛ антител в пробах сборного молока от стада с соотношением инфицированного и здорового поголовья в среднем на 1:13 [166].

В сыворотке крови и молоке инфицированных вирусом лейкоза коров выявляются иммунные комплексы, содержащие провирусные ДНК. Провирус-содержащие иммунные комплексы появляются, в основном, в более поздних стадиях болезни, когда животное становится потенциально опасным источником перезаражения стада. Обнаруживаемые в молоке от инфицированных вирусом лейкоза коров циркулирующие иммунные комплексы, содержащие провирусную ДНК, а также специфические антитела, связанные в иммунных комплексах, являются важным критерием для оценки контаминации сборного молока на предприятиях по переработке молока и молочных продуктов [82].

Давайте разложим всё по полочкам доступным языком!

То есть это непосредственно серологические исследования ( изучение сыворотки крови).

Антиген – это чужеродная молекула в организме.

Энзимология – раздел биохимию изучающий структуру ферментов.

Ферменты – вещества, ускоряющие химические реакции.

Важно помнить, что заболевание выгоднее предупредить, чем потом заниматься лечением.

С лейкозом необходимо бороться современными методами.

До встречи на страницах блога о молочном скотоводстве.

*Статья основана на рекомендациях AAFP (Американского общества врачей, специализирующихся на лечении кошек).

Введение

Вирус лейкоза (ВЛК, FeLV ) и вирус иммунодефицита (ВИК, FIV ) – достаточно распространенные возбудители инфекционных болезней кошек. В группе риска находятся взрослые некастрированные коты, имеющие доступ на улицу. У стерилизованных животных, ведущих исключительно домашний образ жизни, риск заболевания значительно снижен.

Вирус лейкоза кошек . Заразиться вирусным лейкозом кошка может при драках и укусах, а также при совместном содержании с инфицированной кошкой. Котята могут получить вирус от инфицированной матери. Через некоторое время после заражения (стадия виремии) вирус можно найти в крови, слюне, выделениях из носа, молоке, моче и фекалиях зараженной кошки. В дальнейшем вирус переходит в лимфоидные ткани организма (лимфатические узлы, селезенку и тимус), где становится недоступен для иммунной системы кошки. В это время у кошки может подниматься температура тела, увеличиваться лимфатические узлы, а также снижаться уровень лейкоцитов в крови (лейкопения).
После стадии виремии наступает асимптоматическая стадия, которая может длиться от нескольких месяцев до нескольких лет. В это время у кошки нет совершенно никаких признаков заболевания, кроме положительных результатов теста на ВЛК.

В дальнейшем течение заболевания может идти двумя путями – прогрессирование болезни или её регресс. При регрессе заболевания вирус массово не обнаруживается в крови кошки (хотя его и можно обнаружить специальными методами), при этом у животного нет никаких проявлений болезни. При прогрессировании заболевания вирус активно размножается в лимфатических узлах и костном мозге кошки, вызывая клинические признаки заболевания (анемию, вторичные инфекционные болезни, воспаление в ротовой полости, появление опухолей, в т.ч. кишечника и др.). В любом случае, однажды заразившись ВЛК, кошка остается его носителем на всю жизнь.

Вирус иммунодефицита кошек

Чаще всего заражение происходит при драках, когда в раны попадает слюна инфицированной кошки. Заражение при совместном содержании с инфицированной кошкой маловероятно. Котята заражаются от инфицированной матери. После инфицирования большие количества вируса обнаруживаются в слюне кошки. Через некоторое время после заражения вирус проникает в лейкоциты (иммунные клетки крови) и становится недоступен для иммунитета кошки. В это время у животного может подниматься температура, появляться вялость или диарея.

Как и в случае с ВЛК, после инфицирования ВИК наступает асимптоматическая стадия. В дальнейшем очень многие зараженные кошки могут не проявлять никаких признаков болезни и жить столько же, сколько и здоровые животные. У части зараженных кошек болезнь прогрессирует, вирус активно поражает клетки иммунной системы, приводя к иммунодефициту и склонности к хроническим воспалениям (например, воспаления в ротовой полости и абсцессы) и инфекциям (вирусные и бактериальные инфекции с различными клиническими проявлениями). Вне зависимости от течения болезни, кошка на всю жизнь остается инфицированной ВИК.

Диагностика заболевания

Желательно проводить проверку на носительство ВЛК/ВИК у всех кошек, не зависимо от возраста, особенно у животных из группы риска (кошки, которые выходят на улицу и дерутся с другими животными).

Для кошек с признаками заболеваний – ВЛК/ВИК могут проявляться очень разные клинические симптомы. Выявление инфицирования необходимо для выяснения точного прогноза течения болезни и подбора

Для подобранных или взятых из приютов кошек. Особенно важно выявление инфицированных животных, если дома уже есть другие кошки или Вы планируете их завести.

Для кошек группы риска, особенно после драк.

Перед вакцинацией против вирусного лейкоза кошек.

Диагностика ВЛК . Для выявления ВЛК используют тесты, определяющие наличие вируса (антигена) в крови (ПЦР) и в инфицированных клетках (ИФА).

Положительно (ВЛК обнаружен)

Отрицательно (ВЛК не обнаружен)

Сразу же провести тест методом ИФА для подтверждения

Повторить тест через 30 дней, особенно для животных группы риска

Положительно (ВЛК обнаружен)

Отрицательно (ВЛК не обнаружен)

Может зависеть от стадии заболевания.

Повторить тест ПЦР и ИФА через 60 дней

Диагностика ВИК. Для диагностики ВИК используют тесты, определяющие присутствие в крови кошки антител к вирусу.

Провести тест другим методом для подтверждения

Повторить тест через 60 дней, особенно для животных группы риска

моложе 6 месяцев

старше 6 месяцев

Повторить тест другим методом через 60 дней

Сразу же повторить тест другим методом

Антитела не обнаружены

Если возраст котенка 6 месяцев и старше, то он признается инфицированным.

Признается не инфицированным (предыдущий положительный результат возможен из-за присутствия материнских антител)

Кошка признается инфицированной

Кошка признается не инфицированной

Отрицательные результаты тестов на ВЛК и ВИК обычно достаточно достоверны, т.к. эти вирусы не очень широко распространены среди кошек. Положительный результат теста обязательно нужно проверять другими методами. Котят можно исследовать в любом возрасте, однако нужно помнить, что антитела к ВИК, полученные от матери, могут сохраняться в крови котенка до 6-месячного возраста. Вакцинация против ВЛК не приводит к положительным результатам тестов.

Вакцинация против вирусного лейкоза и иммунодефицита кошек

Вакцина против ВИК в настоящее время не доступна в России. Такая вакцина используется в США. Следует знать, что вакцинированные против вирусного иммунодефицита животные будут давать положительный результат теста на ВИК.
Решение о вакцинации против вирусного лейкоза кошек должно основываться на степени риска заражения для каждого отдельного животного.
Вакцинация против ВЛК рекомендуется:

Для кошек, которые имеют возможность выходить из дома и контактировать с другими животными.
Для кошек, живущих совместно с животными, инфицированными ВЛК.
Для котят, которые могут оказаться в дальнейшем в группе риска.

Инфицированные кошки должны содержаться только в домашних условиях без доступа на улицу. Это позволит защитить саму кошку от других инфекций, а также предотвратит заражение других животных. Если в дома содержаться другие кошки, то инфицированную кошку нужно держать отдельно. Если нет возможности содержать животных отдельно, то возможным вариантом является вакцинация здоровых кошек против ВЛК. Появление в доме новых кошек настоятельно не рекомендуется, так как может приводить к повышенному риску их заражения из-за территориальной агрессии зараженного животного.

Уход за инфицированной кошкой

Кошки, инфицированные ВЛК или ВИК, могут прожить годы без каких-либо проявлений этих заболеваний и погибнуть совершенно по другим причинам. Поэтому никогда нельзя принимать решение об эвтаназии животного только на основании положительных результатов тестов на эти заболевания!

Уход за клинически здоровой инфицированной кошкой . С профилактической целью осмотр кошки ветеринарным врачом должен проводиться 2 раза в год.
На каждом осмотре необходимо:
- Взвесить кошку и сравнить результаты с предыдущими (важно не пропустить снижение веса).
- Провести полный клинический осмотр животного, уделяя особенное внимание лимфатическим узлам, состоянию глаз и ротовой полости.
- Как минимум 1 раз в год (а лучше на каждом осмотре) сдать общий клинический и биохимический анализы крови, а также анализ мочи и кала.
- Вакцинировать таких кошек по обычной схеме, используя инактивированные (убитые) вакцины.
- Инфицированные кошки не должны допускаться к разведению. Рекомендуется их кастрировать.

Уход за клинически больной инфицированной кошкой. Правильная и своевременная диагностика является залогом правильного поддержания и ухода за инфицированной кошкой. На настоящий момент, к сожалению, ни одно лекарственное средство (в том числе иммуностимуляторы или противовирусные препараты) не позволяет вылечить полностью инфицированную кошку. Для поддержания качества жизни важен хороший уход за животным, полноценное кормление и своевременное обращение к ветеринарному врачу при малейших признаках болезни. Заболевание лейкозом и иммунодефицитом кошек может проявляться очень разными симптомами – вялостью, лихорадкой, нарушением со стороны органов желудочно-кишечного тракта, образованием опухолей в брюшной или грудной полости, вторичными инфекционными болезнями из-за нарушения иммунитета, хроническими воспалительными процессами в ротовой полости и т.д. Все эти проявления требуют быстрой диагностики и активного, зачастую длительного лечения.

Заключение

Исследование на носительство ВЛК и ВИК необходимо проводить для всех кошек, особенно для животных группы риска.

Лейкемия кошек

Лейкемия кошек – вирусное заболевание, вызываемое ретровирусом, который часто называют его английской аббревиатурой FeLV (Feline Leukemia Virus, вирус лейкемии кошек). Как и все ретровирусы, он обладает специфическими ферментами, позволяющими ему выполнять транскрипцию и интеграцию провирусной РНК и ДНК в геном инфицированной клетки.

Эта особенность позволяет ему находиться в организме в течение очень длительного времени. По окончании латентного периода у животного могут наблюдаться разнообразные клинические признаки (анемия, гипертермия, опухоли). Часто возникают вторичные инфекции, так как этот вирус является иммунодепрессивным. Применяется симптоматическое лечение, при необходимости могут использоваться иммуномодуляторы, но в настоящее время мер, способных уничтожить вирус, не существует. Лучшим средством для защиты, как популяций кошек, так и отдельных особей, являются вакцинация и раннее выявление заболевания.
Введение

Вирус лейкемии кошек (иногда его называют вирусом лейкоза) впервые выявлен в 1964 году. Он распространен по миру повсеместно и вызывает у кошек различные заболевания, в том числе тяжелые иммунодефициты, злокачественные опухоли и лейкозы. Несмотря на использование вакцин, он остается одной из серьезных причин заболеваемости и смертности животных, в частности, в условиях высокой скученности (питомники и гостиницы для кошек). Лейкемия кошек не является зоонозным заболеванием.
Этиология

Вирус лейкемии кошек, обычно называемый ВЛК (по-английски FeLV), относится к семейству Retroviridae, представители которого отличаются характерной структурой, и, главное, способом размножения. Этот РНК-содержащий вирус с помощью переносимого им фермента (обратная транскриптаза) выполняет транскрипцию своего генома в провирусную ДНК и способен таким образом встраиваться в хромосомы инфицированных клеток.

ВЛК, способный вызывать возникновение опухолей и лейкоза, относится к роду Gammavirus. Как и все ретровирусы, он состоит из оболочки, окружающей матрицу, и капсида, содержащего две одинаковые молекулы РНК и вирусные ферменты: это обратная транскриптаза, интеграза и протеаза.

РНК вируса содержит 4 гена, которые определяют действие вируса. Ген gag кодирует внутренние белки вируса (матрица, капсид), ген env — белки внешние (оболочка), ген pol — обратную транскриптазу и интегразу, а ген pro — протеазу вируса. Из составляющих вирус белков и гликопротеинов особенно важное значение для диагностики и лечения заболевания имеют два:
— белок р27, входящий в состав капсида (если он обнаруживается в сыворотке или клетках, это свидетельствует об инфицировании вирусом лейкемии кошек);
— гликопротеин оболочки gp70, отвечающий за проникновение вируса в клетку. По этой причине gp70 является главной мишенью при разработке вакцин, тем более, что он обладает высокой антигенной стабильностью.

В оптимальных условиях (умеренная температура и довольно высокая влажность) вирус может просуществовать до 48 часов. Он инактивируется традиционными дезинфицирующими средствами.
Эпидемиология

Способы передачи вируса лейкемии кошек могут быть различными. Он может проникнуть в организм при укусе или спаривании, но чаще всего он передается орально-назальным путем. Действительно, ВЛК присутствует в слюне, слезах, сперме, моче и испражнениях. Возможна вертикальная передача от матери к котятам либо через молоко, либо вследствие продолжительных контактов или даже трансплацентарным путем.

Наиболее часто в литературе упоминаются случаи инфицирования вирусом ВЛК питомников и гостиниц для кошек, и существует предположение, что особенно восприимчивы к нему породистые кошки. В результате проведенных информационных кампаний, ликвидаций очагов инфекции и вакцинаций частота заболеваний в ряде популяций кошек значительно уменьшилась. В настоящее время лейкемия в основном встречается у кошек, живущих в домах с садами, где между кошками часто происходят неконтролируемые контакты.

Представляется, что распространенность инфекции составляет от 3 до 4% для любой популяции кошек. Но когда исследования проводят среди больных кошек, то, в зависимости от метода изучения, она может достигать от 7 до 21%. Большинство инфицированных кошек моложе 2 лет. Это объясняется большей восприимчивостью молодых особей. Тем не менее, котята младше 6-8 недель, родившиеся от иммунизированных матерей, обычно защищены материнскими антителами и в этом случае период максимальной чувствительности находится между возрастом от 1,5 до 4 лет.

Традиционно предполагают, что сопротивляемость значительно увеличивается с возрастом. Тем не менее, анализ случаев заражения среди кошек старше 6 лет показывает, что взрослые особи сохраняют чувствительность к инфекции, в особенности когда они подвергаются значительному и повторяющемуся воздействию вируса.
Патогенез

Инфекция характеризуется существенно различающимися между собой стадиями, которые определяют клинический аспект болезни и возможную контагиозность пораженных кошек. В зависимости от состояния иммунитета кошки в момент инфицирования, заболевание может пройти весь цикл патогенетического развития или же, напротив, на одном из этапов вирус будет блокирован.
Течение заболевания

Попав в организм оральным или назальным путем, вирус активно размножается в местных лимфоидных тканях (миндалевидных железах и заднеглоточных лимфатических узлах). Инфицированные лимфоцитарные и моноцитарные клетки попадают в кровеносную систему и через несколько дней после инфицирования наступает этап виремии, которую сложно обнаружить с помощью сывороточных тестов.

Вирус, таким образом, разносится к различным тканям и, в том числе, к костному мозгу, где может поразить стволовые клетки крови любой линии. Встраивание ДНК провируса в хромосомы инфицированных клеток, характерное для ретровирусов, может происходить только в клетках, находящихся в состоянии активного деления. Эта фаза наступает через 2-4 недели после первичного инфицирования и может продолжаться до 4 месяцев.

Поскольку виремия слабо выражена, экскреция также незначительна, и поэтому кошки заразны лишь в слабой степени. Инфицированные стволовые клетки производят также инфицированные кровяные клетки, которые при циркуляции создают стойкую виремию. Вирус при этом распространяется к эпителиальным тканям самых разных систем и органов, таких как пищеварительный тракт, почки, мочевой пузырь, верхние дыхательные пути, носоглотка и слюнные железы, откуда в большом количестве и экскретируется. Кошка, у которой виремия выражена в течение длительного времени, постоянно выделяет вирус в окружающую среду.
Индивидуальные вариации

В зависимости от статуса иммунной системы кошки инфекция может быть пресечена на том или ином этапе. В имеющихся публикациях приведены очень неоднородные данные, что связано, в частности, с различиями лабораторных методов, использованных авторами для определения уровня стойкой виремии. Примерно в трети случаев иммунная система действует очень эффективно и нейтрализует вирус сразу после его проникновения в организм или на этапе первой фазы виремии. Кошки, следовательно, выздоравливают, а вырабатываемые организмом антитела, судя по всему, защищают их очень эффективно.

Примерно в трети случаев иммунная система не может помешать вирусу попасть во вторичные центры активного размножения. Такие кошки становятся латентными носителями вируса. Примерно половина из них сумеют уничтожить вирус окончательно, тогда как у другой половины может произойти реактивация вируса, которая переведет их в состояние стойкой виремии.

Принято считать, что если реактивация не произошла в течение года после инфицирования, она становится крайне маловероятной. В последней трети случаев иммунная система кошек оказывается неспособной контролировать вирус. У этих кошек возникает стойкая виремия после первого проникновения вируса в кровоток. 85% таких кошек умирают в течение трех с половиной лет, и средняя продолжительность жизни составляет 21 месяц.
Клинические признаки

Дегенеративные болезни
Данные заболевания являются следствием инфицирования стволовых кроветворных клеток. Поражению подвергаются красные и белые тельца, а также тромбоциты. В результате развиваются анемии, формы псевдопанлейкопении и нарушения коагуляции.

Иммунодепрессия
Иммунная система подавлена. Ослаблены синтез антител, функции макрофагов и цитотоксические способности. В связи с этим наблюдается появление вторичных инфекций. Не обнаружено связи между инфекцией ВЛК и вирусом иммунодефицита кошек, но клинические проявления усиливаются. Признано, что большинство кошек умирает скорее именно от вторичных инфекций, чем от опухолевых форм. Таким образом, симптоматическое лечение от вторичных инфекций жизненно важно для кошек с таким типом поражения.

Опухолевые формы
Наиболее частыми новообразованиями являются лимфосаркомы. Существует несколько форм таких опухолей: опухоли пищеварительного тракта (у пожилых кошек), тимусные (у кошек моложе 4 лет), многоочаговые или другие. Лейкозы более редки, но они могут затронуть все стволовые клетки.

Нарушения репродуктивной функции
Кошки, находящиеся в состоянии виремии, транспланцентарным путем заражают эмбрионы, вызывая их гибель и становясь бесплодными. Если котята не умирают в матке, то рождаются с виремией и быстро погибают.

Другие формы
Наблюдаются невропатии с анизокарией или парезами.
Наконец, иммунные расстройства могут проявляться в форме выработки иммунных комплексов, что приводит к разнообразным последствиям (гломерулонефрит, гемолитическая анемия…)
Характер поражений

Характер поражений напрямую связан с рассмотренными выше формами. Картина часто осложняется вследствие вторичных инфекций. В литературе имеются данные о том, что увеличение среднего объема эритроцитов при анемии вне зависимости от того, является она регенеративной или нет, очень напоминает инфекцию ВЛК. Вместе с тем, количество лимфоцитов у кошек в состоянии виремии зачастую снижается.
Диагностика

Клиника
Вирус ВЛК провоцирует развитие самых разнообразных заболеваний (различных инфекций, нарушений функции воспроизводства, лимфосарком, анемии, нефрита…), ни одно из которых не является специфичным. Поэтому лейкемию кошек необходимо подозревать при наличии любой хронической или рецидивирующей болезни.

Дополнительные исследования
Вследствие того, что у кошек, сумевших справиться с ВЛК, антитела в крови могут присутствовать в течение длительного времени, тогда как у инфицированных кошек иммунная реакция нарушена, использование серологических анализов в качестве средства диагностики или выявления заболевания исключается.

Дополнительные исследования основаны на обнаружении капсидного белка р27, который в избытке вырабатывается во время фазы размножения ВЛК и вследствие этого выделяется в кровь. Антиген р27 легко обнаруживается в сыворотке, плазме или цельной крови с использованием наборов для экспресс-диагностики, основанных на методе ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуномиграции.

Это превосходные инструменты с очень хорошей чувствительностью и избирательностью при условии точного соблюдения указаний изготовителя (температура реактивов, фазы промывки) во время их использования. Наиболее достоверные результаты получают при исследовании сыворотки. Тем не менее, при оценке результатов нужно принимать во внимание патофизиологические данные (преходящая виремия…), а также возможные ограничения используемых тестов (опасность ложноположительного результата, когда тесты проводят без подозрения на эпизоотию или клинику по причине слишком низкого уровня распространения заболевания).

Поэтому следует без колебаний повторить показавшийся сомнительным тест с использованием вновь взятого образца и запросить дополнительный лабораторный анализ (иммунофлуоресцентный, ПЦР) для подтверждения положительного теста, в частности, если по его результатам принимается решение о судьбе животного (возможность эвтаназии). К дополнительным анализам требуется прибегать также в случае отрицательного результата при наличии у кошки подозрительных клинических признаков.

В любом случае, кошку можно считать не зараженной только при наличии двух отрицательных результатов обследований, выполненных с 16-недельным интервалом. Признать кошку находящейся в состоянии стойкой виремии можно только в том случае, если два теста, выполненные с промежутком в 16 недель, дадут положительный результат.

Лабораторная диагностика
Иммунофлуоресцентный анализ является лабораторным методом, позволяющим обнаружить белок р27 внутри гранулоцитов и тромбоцитов, если для исследования используют свежие образцы цельной крови. Метод способен выявить слабую виремию (когда антигены присутствуют в основном внутри клеток), не поддающуюся обнаружению методиками ИФА. Он также может быть выполнен на образце костного мозга.

ПЦР позволяет обнаружить часть генетического материала ВЛК. При латентной форме инфекции возможен ложноотрицательный результат при анализе крови и положительный – при тестировании образцов костного мозга. Вне зависимости от применяемых методов диагностики признать у кошки наличие стойкой виремии следует только в случае получения двух положительных результатов. Первый положительный результат предполагает изоляцию животного в ожидании окончательных результатов.

При отсутствии тяжелых симптомов усыплять кошку с подтвержденным диагнозом нет необходимости. Как альтернативу следует рассмотреть возможность ее окончательной изоляции от других кошек группы или передачу новому владельцу, у которого кошек нет.
Лечение

Более 80% кошек, зараженных вирусом лейкемии, погибают от последствий иммунодепрессии. Это обстоятельство свидетельствует в пользу симптоматического лечения животных, которое позволит в большинстве случаев продлить больным лейкемией кошкам жизнь с обеспечением ее хорошего качества. Лечение включает главным образом антибиотикотерапию, направленную на борьбу с вторичными микробными инфекциями, и, при необходимости, переливания крови для лечения анемии.

К продаже разрешен омега-интерферон для кошек, который также можно применять при данном заболевании. Его применение может снизить интенсивность проявления симптомов и продлить жизнь животных. С разной степенью успеха применялись антивирусные препараты (аналоги нуклеозидов), предназначенные для человека, такие, как AZT.
Профилактика

Борьба с распространением инфекции
Изоляция котят в возрасте до 16 недель (особенно чувствительных к первичным инфекциям) является одним из эффективных методов профилактики. Физически изолировать кошек, что могло бы снизить риск заражения в доме, где содержится несколько животных (некоторые — со стойкой виремией), все-таки задача трудновыполнимая. Такой план борьбы с вирусом может быть реализован в питомниках и других местах массового содержания кошек.

Они основаны на повторении (каждые 12-14 недель) тестов по выявлению заболевания в сочетании с немедленной изоляцией кошек, для которых получены положительные результаты. Вместе содержат только тех кошек, чьи результаты в 2 последовательных тестах признаны отрицательными. Недостатком такого плана ликвидации инфекции является то, что при этом будут изолированы и кошки с преходящей виремией. При поступлении нового животного необходимо также выполнить два теста с интервалом в 16 недель и в течение этого времени содержать животное в карантине.

Санитарные мероприятия
Вирус чувствителен к высокой температуре, мылу и прочим обычным дезинфицирующим средствам, поэтому необходимо регулярно стирать подстилки и чистить миски животных.

Вакцинация
Особенности биологического цикла ретровирусов и опасность возврата к вирулентности делают трудноосуществимым использование вакцин на основе живого ослабленного штамма. Существует три вида вакцин: цельноклеточные на основе инактивированного вируса, субъединичные и на основе живого возбудителя, неспособного к размножению [рекомбинантные]. Вакцины на основе инактивированного вируса состоят из цельных вирусов, выращенных в клеточной культуре.

Субъединичные вакцины готовят либо из инактивированного фильтрата (содержащего, в частности, белок gp70) инфицированных клеток, либо из иммуногенного белка (р45 негликозированная фракция белка gp70), создаваемого с применением генной инженерии. Эти две группы вакцин применяют совместно с каким-либо стимулятором иммунитета.

В вакцине на основе живого носителя использован ослабленный штамм оспы канареек (canarypoxvirus), в геном которого встроены гены gag (кодирующий белки капсида) и env (кодирующий гликопротеин оболочки gp70) вируса ВЛК. После инъекции вирус инфицирует клетки кошки, но он не способен в них размножаться. Тем не менее, он вызывает выработку антител против ВЛК, которые эндогенным путем попадают на поверхность клеток вследствие гистонесовместимости, обеспечивающей иммунизацию клетки-хозяина.

Эту вакцину применяют без адъювантов. Основанная на живой культуре, она позволяет одновременно инициировать выработку гуморального и клеточного иммунитета. Вне зависимости от типа вакцины в программу вакцинации для котят в возрасте 8-9 недель включены две инъекции, с интервалом 3-4 недели, с последующим ежегодным повторением. Вакцинация является эффективной мерой и позволяет защитить большинство животных от стойкой виремии.

Прививка для кошек от лейкоза с латентной инфекцией или со стойкой виремией не приводит к каким-либо нежелательным последствиям. Тем не менее, рекомендовано (особенно, если вакцинацию впервые делают взрослым кошкам) убедиться в том, что животные не заражены, поскольку вакцинация кошек со стойкой виремией будет бесполезной и создаст ложное впечатление защищенности. Напротив, вакцинацию от других заболеваний следует продолжать с тем, чтобы возместить иммунный дефицит у кошек со стойкой виремией.

Вакцинация может помочь искоренить ВЛК в популяции кошек, но при этом не следует забывать об элементарных правилах санитарной профилактики.

Читайте также: